TECHNIQUE

1“ Méthode de prélèvement des selles

Toutes les fois que l'oii voudra recueillir des selles eu vue d’uii isolement des espèces qui y sont contenues, il faudra toujours s’entourer de minutieuses précautions. Ce fait avait déjà été mis en pratique par Esclierich qui se servait d’un tube de plomb soigneusement stérilisé ([u’il adaptait à une seringue. Il introduisait ce tube dans le rectum après avoir soigneusement stérilisé l’appareil et avoir lavé l’anus avec du sublimé. Nous nous sommes servis d’une méthode un peu différente. On prend un tube de caoutchouc assez rigide, comme une sonde uréthrale, ou une sonde œsophagienne, on la coupe à 10 ou 15 centimètres de l’extrémité terminée en pointe près de laquelle se trouve l’œilleton ovale.

Après l’avoir soigneusement lavé, on le fait bouillir pendant 10 minutes et on la place dans un tube stérilisé, bouché avec du coton hydrophile stérilisé. On met le tout à

l'autoclave à 120° pendant 20 iiiiimtes. Ou peut ainsi transporter cette sonde hors du laboratoire sans danger d’infection. On se inunitd'nne pij)ette et d’un tube do caoutchouc. Quand on vent recueillir les nialièrcs fécales derenfant à examiner, on adapte à la grosse extrémité de la pipette le tube de caoutchouc. On llambe la j)i])ette que l’on brise avec une pince flambée dans sa partie moyenne. On débouche le tube contenant la sonde et après en avoir ilambé l’orifice, on prend la sonde avec la pince I1aml)é('. L’anus étant au préalable lavé au savon, jniis à l’éther, puis avec de l’eau stérilisée, on introduil avec la j)ince la sotahî dans le rectum à une profondeur de d centimèires environ. On adapte la pipette à l’extrémité de la sonde et on aspire. Le refoulement est alors facile et les matières fécales montent dans la sonde jusque dans la pipette. Mais il peut arriver C[u’il n’existe jjas de matières dans le Ilectum, il faut alors faire avec la sonde des mouvements d’avant en arrière pour provoquer les moments péristaltiipies de l’intestin. Quand on aura obtenu assez de matières pour l’examen microscopique et les cultures, on replacera avec les jiiémes précautions la sonde dans le tube stérilisé.

Il faut faire le plus rapidement jjossible les cultures et les examens. Pour cela on coupe par sa moitié, avec des ciseaux llambés, la sonde et on recueille avec une pipette stérilisée la quantité nécessaire en ayant soin de ne pas toucher les bords do l’ouverture de la sonde. De cette façon, on évite do prendre les malières qui auront pu être en contact au début et à la lin avec l’œilh'ton de la sonde qui pourrait être souillé à son outrée ou à sa sortie de l’anus.

2" Examen micboscopique

On étale sur une lamelle, une mince couche de matières fécales et on examine d’abord sans coloration. Ce procédé

permet de se rendre compte do la mobilité do certaines espèces et de certaines particularités, dans la forme des espèces, que la fixation peut empêcher de voir.

On fixe à la chaleur et on colore d’abord avec les colorants basiques employés ordinairement. On peut employer le violet de gentiane, le bleu de méthylène, le ziehl dilué, la fuschine acide, etc.

On note alors nrec soin tous les détails de la préparation, la forme, la variété des espèces, la façon dont elles se laissent colorer.

On fait alors une nouvelle lamelle que l’on fixe de la môme manière. On colore cette deuxième préparation, avec la méthode de Gram. Suivant une coutume en usage dans le laboratoire, nous avons suivi, la technique indiquée par sou auteur. Elle semble en effet, plus fidèle. , Quoique d’un maniement un peu plus délicat, elle nous a foujours donné de bons résultats. Il est à remarquer (pi’il existe certaines espèces, la plupart du tem[)s des anaérobies, qui prennent la coloration par cette métiiode d’une façon irrégulière. A côté d’éléments bien colorées, il en existe d’autres de même forme, de même dimension qui ne se colorent <|u’à demi on même par place seulement. Nous verrons même au cours de ce traAuül, qu’il existe des espèces qui même en cultures pures ont a côté d’éléments colorés d’autres complètements décolorés.

La méthode d’Eschericli, ipii n’est ([u’une coloration par la méthode de Gram recolorée par de la fuscldne alcoolique ne doit donc pas être employée d’une façon courante. Car si on l’emploie, sur une culture pure de bifidus par exemple, la récoloration à la fuschine colore en rouge les éléments qui n’ont pas pris la couleur par la méthode de Gram. On serait donc tenté dans un examen direct de selles, de prendre

ces éléments colorés en rouge pour des espèces différentes de celles qui restent colorées eu bleu, ce qui fausserait certainement les examens.

Avant toute essai de culture, il est nécessaire de faire ces examens. Ils permettront en effet de soupçonner l’espèce dominante et feront que l’on pourra suivant le caractère présumé de cette espèce, varier la méthode d’ensemencement. Si 011 voyait en effet, que les cocco-bacilles sont dominant, il faudrait après avoir fait une dilution dans les milieux ordinaires, employer paralèllement des milieux qui leur seront moins favorables, afin d’essayer d’isoler les autres espèces.

3" Procédés de culture

Nous ne ferons pas dans ce chapitre, l’iiistorique et la critique des diverses méthodes de cultures employées. En ce qui concerne surtout la questioir des cultures en ce milieu anaérobie, nous renvoyons le lecteur au remarquable travail de Veillou et Zuber, ainsi qu’aux excellentes thèses de Rist, Cottet, Hallé Guillemot, qui ont toutes admirablement traité cette question.

Nous indiquerons seulement quelles sont à notre avis les méthodes les plus pratiques et les plus sûres.

Tout d’abord, la parcelle des matières fécales, doit être diluée dans une faible quantité de bouillon et mise immédiatement dans les tubes de dilution. Il est important d’agir rapidement, car dans un milieu liquide comme le bouillon, le rapport des espèces change rapidement.

Au bout d’un quart d’heure, il existe déjà un changement appréciable dans l’aspect microscopique. Certaines espèces comme le B. Coli le streptocoque intestinal, l’enterocoque, le staphylocoque blanc pullulent rapidement. Au bout do 12 heures, dans le bouillon, l’aspect bactériologique de cette uujture est profonçléipent modifié,

Toutes les espèces que nous venons d’énumérer ont proliféré, et parmi elles, celle qui se trouvait, la plus nombreuse pullule et devient tout à fait prédominante. Si l’on répartissait à ce moment dans les milieux de dilution, les résultats seraient complètement faussés. Ensuite il peut exister des espèces anaérobies qui, rapidement meurent dans ce bouillon aéré. Nous avons vu que dans des matières fécales contenant une espèce anaérobie, recolinaissable à l’examen direct comme le B. putrificus Coli par exemple, qui est une espèce pseudo-tétanique, après 24 heures de séjour clans le bouillon , il est impossible d’obtenir dans les tubes de dilution cette bactérie spondée. Les autres microbes ont tellement proliféré cju’ils suivent son développement.

Quelle méthode d’isolerneut devons-nous employer ? et quelle est la substance cpii conviendra le mieux au développement de toutes ces espèces.

Ou doit tout d’abord rejeter la gélatine. Toutes les espèces n'y poussent pas. Quekfues-unes poussent très lentement, et si par hasard il se trouve avec elle un microbe licfuéfiant, il sera impossible de les isoler. La gélose est donc bien préférable. Cependant sur de l’agar peptonisée et salée, ou agar ordinaire, toutes les espèces iie pousséront pas. Il faudra joindre à cet agar une substance nutritive comme le glucose à la dose de 1,5 pour 100. C’est le milieu de choix, il est bien préférable au sérum, et même à la gélose-ascite. Les milieux liquides, peptonisés, salés et sucrés doivent être également rejetés. Il est trop difTicile d’y faire des séparations un peu délicates.

Nous devons donc nous servir de gélose sucrée, peptonisée et salée.

La sqb stapce nutritive ensemencée peut être laissée aq

contact de l’oxygène de l’air. Ces procédés sont nombreux, ce sont ceux qui sont le plus ordinairement employés, comme paraissant les plus faciles. Tantôt on ensemence la gélose pendant qu’elle est encore liquide et on la coule rapidement dans une boîte de Pétri ou sur des pla(iues. Tous ces milieux ont le grand inconvénient de se dessécher et de s’infecter facilement. Il se produit des colonies dans la profondeur et en surface. Celles de la profondeur sont difficiles à différencier. Veillon a indiqué dans sa thèse une méthode bien plus simple. 11 se sert de gélose fraichement couchée, par conséquent non desséchée et laissait exsuder de l’eau qui se réunit au fond du tube. Il ensemence dans cette eau d’exsudation, par dilutions successives et incline le tube après l’ensemencement. L(? liquide se répand sur le milieu et dissémine les espèces sur cette surface. Il redresse ensuite le tube pour le mettre à l’étuve. Ce procédé do Veillon est excellent, il nous semble même le meilleur pour les séparations d’espèces aérobies.

Cependant, aucun de ces procédés ne peut être considéré comme une méthode générale. Ils ne peuvent donner que les espèces aérobies. Il faudra donc voir s’il est possible d’en employer d’autres. L’intestin étant un milieu privé d’air, il semble de prime abord que seules les espèces qui vivent à l’aliri de l’air peuvent y séjourner. Parmi ces microbes, les uns sont facultatifs, les autres strictement anaérobies. Donc un milieu réalisant ces conditions, privé d’air, semble donc le milieu de choix.

Or on peut enlever l’oxygène des milieux soit par l’ébullition, par l’extraction au moyen de machines pneumatiques, par l’absorption par des substances réductrices, formiato de soude, glucose, composés sulfurés, sulfo-indigotate de soude, etc., ou bien enfin par le déplacement de cet oxygène par un gaz inerte.

Le milieu une fois complètement purgé d’oxygène est eusemensé puis remis dans des conditions de stricte anaérobiose.

La plupart de ces méthodes sont longues, ditlicileset d’un maniement délicat. On ne peut pas s’en servir pour les séparations des espèces. La plupart des microbes anaérobies n’ont pas été obtenus ainsi. On les obtenait par inoculations aux animaxix, on en portant à 80° un milieu qui les contenait quand ils étaient spornlés.

Nous ajouterons en outre que ces milieux ne permettraient pas la culture d’une espèce strictement aérobie, si par hasard il en existait une dans l’intestin, en tant qn’(;spèce de passage. 11 faudra donc faire en plus des ensemencements sur milieux aérobies.

Il nous faut donc une méthode plus générale cpii permette d’isoler à la fois aérobies stricts, facultatifs et anaôrol)ies. C’est une méthode répondant à tous ces cas ([uc Veillon a employée pour les différentes études qu’il a entimprises. Elle est eu effet absolument générale et surtout précieuse poulie genre de recherches que nous avions à faire.

Cette méthode a été employée pour la première fois par Liboruis eu 1886, mais elle ne fut guère mise en pratique. Cet auteur faisait des ensemencements par dilution dans des tubes de gelose profonde sucrée au moyeu d’un lil de platine ou d’une pipette, quand la gélose ii'était pas encore solidifiée. Il examinait ensuite les tubes ensemencés et constatait ainsi rinllueuce de l’oxygène sur le développement des bactéries. Il expulsait la colonne de gélatine ou d’agar dans une boite de Pétri stérilisée et la coupait eh tranches au moyen d’un instrument aseptique. Maisilne s’eu servait fias pour l’isolement de ses espèces puisqu’il avait recours à d’autres moyens comme les cloches, etc.

Veillou eut alors l’idée de se servir de cette méthode pour faire les isolements des espèces et cela sans abimer le tube de culture de façon à ce que les espèces qui restent à pousser, puissent se développer postérieurement. Nous allons indiquer rapidement ce procédé. Si nous avons, par exemple, à examiner une selle où nous avons noté à l’examen direct des espèces noml)reusos, nous faisons fondre au bain-marie des tubes profonds contenant de la gélose sucrée, en les maintenant pendant un quart d’heure environ dans l’eau bouillante. La température de la gélose est d’environ 80°. L’air est expulsé. On laisse refroidir, pins quand le milieu est à 55“ environ, ou ensemence. On prend avec une pipette stérilisée un peu des matières diluées dans le bouillon et on ensemence un premier tube. On aspire de la gélose dans la pipette, on la refoule et ou aspire de nouveau, puis on agite, on retire la pipette et oii bouche le tube. Rapidement onia reporte dans un autre tube sans aspirer et on agite. On fait de meme pour 10 à 12 tubes. Immédiatement après on plonge ces tidies dans l’eau froide. Ces tubes sont mis à l’étuve à 37“ et on note tous les jours l’aspect des colonies qui y ont poussé. 3’outes les colonies qui pousseront soit en surface, soit dans la zone aérée (Voir thèses de Rist, de Ouillemont, Cottet) sont des aerol)ies stricts ou des facultatifs.

Ou peut déjà les recueillir soit avec un fil de platine, soit avec une pijjctte stérilisée, auquel on adapte le tube de Guillemot. Toutes les colonies poussant dans la zone de l’anaérobiose, appartiennent à des facultatifs ou à des auaérobies stricts. La date do l’apparition des colonies peut donner déjà, comme l’a fait remarquer Guillemot, des présomptions sur leur nature. Celles qui apparaîtront *de 24 à 48 heures sont, la plupart du temps, des facultatifs. Les

anaérobies poussent en général plus tard, 4, 5 et même 10 à 12 jours après. On les recueille alors avec la pipette en évitant de toucher aux autres colonies.

Tous les tubes sont ainsi successivement examinés. On réensemence alors dans d’autres tubes profonds et si l’espèce est facultative elle poussera jusqu’en haut, si elle est anaérobie elle s’arrêtera à la zone acrée et ne poussera que dans la zone de l’anaérobiose.

Quand une espèce est isolée on se servira alors des méthodes usuelles pour étudier ses caractères.

Si nous avons insisté sur cette inétliode d’isolement, c’est qu'elle nous parait absolument générale, Elle donne toutes les espèces susceptibles de pousser en gélose sucrée. Elle peut aussi bien servir pour la séparation des microbes d’une angine, que pour la séparation des bactéries d’une selle. Pour être à l’abri de tous reproches, nous avons toujours fait suivre ces dilutions, sur tubes profonds, d’autres sur tube s couchés, et toutes les espèces poussant sur ces derniers tubes étaient aussi facilement retrouvés dans les premiers.

Bien plus, nous avons ainsi pn obtenir des aérobies que nous n’aurions jamais pu obtenir directement sur des tubes couchés sucrés. La finesse de leurs colonies sur- ces tubes est telle qu’ils auraient pu passer inaperçus, tandis que celles des tubes profonds étaient nettement visibles. Il en est ainsi pour le B. acidophilus, le B. exilis, la sarcina minuta, etc. Le streptocoque d’IIirsch Libbmann est très facile à obtenir par cette méthode.

Elle ne présente que de petits inconvénients. Quand des espèces gazogènes, comme le B. Coli, le B. lactis aerogènes, sont pins abondantes que les autres, elles fragmentent le tube et empêchent les isolements.

11 fgid alors attendre (|ne le gaz soit résorhé et que la

gélose ait repris son aspect primitif. On coupe alors le tube et on peut alors recueillir les petites colonies qui auront poussé entre les colonies qui ont fragmenté. Il est rarement impossible de ne pouvoir isoler dos anaérobies dans ces cas didiciles, mais le fait s’est produit notamment pour des choléras infantiles. Des travaux sont actuellement en cours dans le laboratoire pour olnder à ces légers inconvénients.

Nous ne dirons rien des méthodes employées pour caractériser une espèce isolée. Ce sont les procédés aérobies on anaérobies classiques employés dans tous les laboratoires.

4" Expéri.menï.u'iox sur les animaux

Quand une espèce est isolée et étudiée, il est nécessaire de rechercher son action sur les animaux. On peut procéder par inoculation ou par ingestion.

On peut inoculer par la voie sous-cutanée ou dans le péritoine.

Ces expériences doivent porter sur un grand nombre d’animaux et pour rester comparables entre-elles, doivent être faites avec des cultures de même date et en quantité égale. Au point de vue de la virulence de ces espèces, ces expériences donnent de lions résultats, mais elle ne peuvent donner aucun renseignement sur leur rôle dans la pathogénie des diarrliées. Les associations de ces bactéries, inoculées ainsi, ne donneront pas de résultats plus probants. Deux espèces peu virulentes associées, ou une, peu virulente avec une inoffensive donneront toujours des résultats plus rapides que lorsque ces doux espèces sont isolées.

Les injections de culture ne doivent donner des renseignements, au point de vue de la pathogénie des gastroentérites que si les doses sont comparables et surtout si

la flore intestinale de l'aninial se rapproche de celle de l’enfant. Nous avons étudié dans ce but les selles des souris, des cobayes, des lapins. Tontes ces flores sont différentes et aucune ne rappelle celle de renfant. Nous ne pensons donc pas nous trouver dans des conditions d’expérimentations rigoureusement comparables quand nous faisons ingérera un animal une espèce nocive pour l’enfant. Les expériences de Metcbnikof sur le choléra et- ses vibrions sont sur ce point très nettes et très précises.

DESCRIPTION DES AIICROORGANISMES

Nous examinerons dans ce chapitre les différentes bactéries que nous avons pu isoler des selles du nourrisson, sans chercher aies grouper en normales et pathologiques. Nou» ne les grouperons pas non pins en aérobies ou anaérobies, car nous avons trouvé des espèces intermédiaires qu’il est difficile de placer dans l’une ou l’autre de ces deux catégories. Nous prendrons la classification la plus simple, uniquement basée sur la morphologie habituelle des bactéries, en coccus, cocco bacilles et bacilles.

niPLoooccus GKisEus LiQUEFACiExs (espèce nouvelle)

Cette petite espèce est d’ordinaire assez rare. Nous ne l’avons rencontrée que dans des cas pathologiques, une première fois dans une diarrhée très légère chez un enfant nourri au sein âgé de 35 jours et une deuxième fois chez un athrepsique de un mois et demi, nourri au biberon, présentant des troubles très graves de gastro-entérite durant depuis trois semaines environ. Dans le premier cas (obs. 9) Tenfant prenait le sein maternel au moyen d’une tétine de caoutchouc que la mère eidevait et remettait fréquemment au cours de la tétée sans prendre de précautions aseptiques. Le même enfant fut du reste examiné à nouveau à l’âge de 7 mois et 1/2, alors que la mère ayant renoncé à l’usage de

la tétine lui donnait en plus du sein, 200 graniines de lait bouilli, eu trois fois. L’enfant ne présentait plus depuis longtemps de troubles intestinaux, il était bien portant. Il fut impossible de retrouver dans ses selles d’aspect normal cette même espèce que l’on avait isolée au moment de sa légère diarrhée.

Dans les selles, il est presque impossible de distinguer ce diplocoque des autres cocci qui peuvent, se trouver avec lui.

Dans les cultures en bouillon jeunes, de 20 à 24 heures, il se présente sous la forme de grains soit isolés, le plus souvent groupés par paires.

Les grains isolés sont régulièrement arrondis et plus gros que ceux du staphylocoque blanc, de la grosseur des grains du streptocoque pyogène oscilllant entre 0 [j- 5 à 1 [A. Quant ils sont groupés par deux, ils sont ordinairement opposés par une surface plane, rappelant ainsi la disposition du gonocoque. On peut noter la formation de courtes chaînettes de quatre h six éléments dont les grains médians sont aplatis dans le sens de l’axe de la chaîne. Quelquefois enfin, il se dispose en amas ou cliaque grain conserve sa forme sphérique. Dans les cultures sur gélose, gélatine ou pomme de terre, Informe eu diplocoque est la plus nombreuse. Il peut exister dans les cultures vieilles des grains accolés de grosseur dilférente, mais on ne note jamais de formes géantes ou déformées.

Il prend bien les colorants basiques ordinaires et reste coloré par la méthode de Gram. Par une action prolongée de l’alcool absolu, on peut arriver à lui enlever une partie de la matière colorante, mais il ne se décolore jamais complètement.

11 est facilement tué dans les tubes de cultures portés à

la température de (iü" pendant un quart d’henre. Sa vitalité est considérable, il a pu être réensemencé provenant d’un tube de gélatine vieux de deux mois.

Il pousse bien dans les milieux, aérobies et anaérobies à la température do 20 à 22 degrés et plus rapidement à 37“.

Ses cultures possèdent des caractères bien particuliers.

Sur gélose ordinaire, à 37", il pousse lentement. 24 heures après rensemen(;ement, on voit apj)araître des petits points Itlancs gris diî la grosscuir d’nne pointe d’aiguille. L’eau exsudée de la gélose est légèrement troublée et présenté un lin dépôt pnlvérulent. Qnaranle-liuit heures après, les colojiies apparaissent très nettes plus larges d’un diamètre maximum de Un millinièti'e à un millimètre et demi. Les bords sont nets, régulièrement arrondis. La colonie est à peine saillante, humide et th' coloration grise transparente.

Quand le milieu a été ensemencé largement, il peut se produire une nappe de même couleur à bords polycycliques. Quatre jours après les colonies s’orabiliquent, les bords deviemnent surélevés et le centre se décolore légèrement. Quand la gélose se dessèche, il n’existe plus qu’un anneau régulier gris. L’eau de gélose reste claire, le dépôt devient floconneux.

Dans le bouillon peptonisé à 37", il se forme en 24 heures un trou ble uniforme, léger, de coloration blancluUre. Trois j(mrs après, le milieu devient clair, un dépôt de grumeaux fins se forme sur la paroi tlu verre.

Sur gélatine ordinaire en surtace, il se produit 48 heures après rensemencement des colonies d’aspect etde coloration comparables, à celles de la gélose. Elles liquéfient lentement le milieu. En piqûre, il se forme d’abord une strie grise, puis la liquéfaction commence le jour après l’ensemencement. Il se forme un entonnoir au fond duquel se trouve

une masse blanchâtre arrondie. Le milieu est complètement liquéfié en 8 à 10 jours.

Le lait est assez rapidement transformé, en 4 jours, il est acide puis, coagulé en masse sans rétraction du caillot. Au bout de 8 jours, le coagulum laisse exsuder, un liquide clair traiiparent incolore.

Sur pomme de terre, on voit apparaître trois jours après rensemencement, de petits points blanchâtres, -humides, se réunissant pour former une nappe très mince. La pomme de terre ne noircit pas.

En gélose sucrée profonde, il se produit de fines colonies gris-blanches, petites, régulières criblant le tube du haut en bas, mais poussant de préférence dans, la zone aérée. Il n’y a ni fragmentation, ni liquéfaction du milieu.

Il n’est pas pathogène pour la souris.Une inoculation souscutanée de 2 centimètres cubes de bouillon de 24 heures ne produit aucun résultat.

L’ingestion de cultures n’a donné aucun enseignement. Dans une première série d’expériences on fit ingérer à un lapin de 2 semaines et pendant 4 jours, 20 gouttes de culturejeune eu bouilllon de 24 heures. Les mêmes essais furent faits sur un lapin qui commençait à manger de l’herbe. On ne lui donnait que du lait et on y mélangeait le bouillon. On n’obtint aucun trouble digestif.

Le streptococcus coli gracilis d’Escherich, est bien différent, il donne sur agar des colonies plus épaisses et ne coagule le lait qu’après de long mois. Il forme en outre de longues chaînettes de 6 à 20 éléments de 0[j. 2 à 0;^ 4 de diamètre, contournées en S ce qui ne donne jamais le diplococcus griseus.

La différenciation d’avec le streptococcus Coli brévis est encore plus nette, grâce à la coloration vert-olivatre sur

gélatine et la coloration jaune-citron sur Agar que prennent les colonies de cette dernière espèce. Les staphylocoques sont également très différents par la coloration et l’épaisseur de leurs colonies.

Nous basant sur la morphologie et l’aspect des cultures, nous avons appelé cette espèce diplococcus griseus liquefaciens.

STAPHYLOCOCCUS PY'O'jENES ALDUS

Cette espèce décrite par la plupart des auteurs comme constante dans les selles du nourrisson est au contraire fort rare. Nous n’avons pu la rencontrer qu’une fois chez un enfant alimenté au sein âgé de trois jours et qui se trouvait encore dans la phase d'infection décroissante accompagnant l’apparition des premières selles de lait et une fois chez un enfant de six jours et demi nourri au lait stérilisé.

Nous devron? aussi faire observer que cette espèce se trouve dans le lait maternel. Elle y avait du reste été vue par de nombreux autours.

Colin et Neumann l’y avait rencontré 38 fois sur 41 cas examinés.

llonigmann l’avait également décrite. Nous l’avons isolée dans le lait d’une nourrice saine appartenant à la Maternité de Boucicaut, après avoir pris de minutieuses précautions antiseptiques. Elle était accompagnée d’une sarcine. Ces microorganismes doivent se trouver dans la portion terminale des conduits galactophores.

Nous ne décrivons pas cette espèce qui est du reste bien décrite dans tous les traités de bactériologie classiques. Nous devons simplement indiquer que dans le cas ou elle a été rencontrée dans les selles (obs.22) de l’enfant au sein elle possédait une virulence légère à l'égard de la souris blanche. Elle tuait l’animal en sept jours à la dose de

20 gouttes d’un bouillon do 24 heures eu injection souscutanée. Quand ou associait ce staphylocoque à une espèce complètement iuoffeusive comme le hifidus, la mort se produisait dans les 24 heures. Dans les selles de l'eufaut alimenté au lait stérilisé, elle ne possédait auctiue virulence.

STUKPTOCOQUES INTESTIN.VUX

Les premiers auteurs qui ont étudié les streptocoques ont vu des différences appréciables dans leurs cultures et dans leurs virulences. Ling’elsheiiu les classe d'après leur action sur ranimai. Lehriug, d’après leur aspect eu milieu liquitle, Marot, d’après leur culture sur pommes de terre. Mais Passet, Bioudi, Guttmaiiu, Eidelberg, Noordeii-Kirchuer, Fraeukcl, Strauss, les réunissent eu un seul et même groupe. Veillou dans son étude sur les angines distingue dans la bouche trois espèces qu’il différencie très iiettcmeut : le streptocoque pyogène, le streptocoque de la salive, le streptocoque tennis. Bezançon et Widal confondent ces diverses variétés et concluent à la présence dans la houclie d’une seule et unique espèce. Lemoine dans une étude sur la variabilité morphologique des streptocoques arrive aux mêmes conclusions. Dans deux cas où ce microbe ne prenait' pas la coloration par la méthode de Gram, il parvient à lui faire perdre cette propriété par un séjour prolongé dans le bouillon. Cependant llallé en 1898, en étudiant la fforc vaginale arrive aux mêmes conclusions que Veillou et différencie très nettement les mêmes espèces. 11 semble donc avéré qu’il existe dans la bouche et dans le vagin des streptocoques différents. Avant de commencer mes études sur les microbes intestinaux, j'ai pu me convaincre de la véracité de ces faits' en étudiant divers cas d’angine et d’infection puerpérale. Eixistet-il pour les streptocoques intestinaux les mêmes diffé-

ronces ? Ces espèces sont-elles les mêmes que celles qui se trouvent sur les antres muqueuses. Tavel et Eguet décrivent à côté du pyogène un diplococcus miuor, un diplococcus major et le pneumocoque de Talamon-Frankel. Hirsch et Libbmauu dans une étude plus approfondie voient uettomeiit ces dilférouces et peuvent séparer leur streptocoque du p3:ogèue. Nobecourt, dans sa thèse eu 1899, ne confirme pas ces recherches, comme Lesage et Thiercelin, il ne trouve non seulement aucun caractère dilféreutiel des streptocoques intestinaux d’avec le pyogène, mais encore d’avec les streptocoques saprophytes des autres muqueuses.

Escherich voit au contraire très bien que le streptocoque d'Hirsch et Lihbmauii est spécial qu’il est bien différent du streptocoque à gros grains. 11 voit même dans les selles trois variétés de chaînettes. 1“ Des chaînes de grains aplatis transversalement, les unes courtes, les autres jjlus longues formées de 20 à 30 grains, et restant colorées parla méthode de (Jram. 2" Des chaînettes de diplocoques e'n forme de biscuits allongés et restant également colorées par cette dernière méthode. 3“ De courtes chaînes de petits cocci qui eux ne se colorent pas par la métliode de Gram mais qui prennent lés colorants basiques. Dans les différentes recherches que nous avons faites sur les selles normales et pathologiques nous avons presque toujours pu isoler des streptocoques. La plupart ont été examinés en détail, mis sur les divers milieux employés et inoculés a.ux animaux. Nous n’avons jusqu’ici pu trouver que deux variétés, le streptocoque décoloré par le Gram et le streptocoque d’IIirsch- Libbmann. Il est probable qu’il en existe d’autres, mais nos reclierches ne nous permettent pas de l’affirmer.

A) Streptocoque décoloré par la méthode de Gram

(CoTTETetn. Tissier). Le principal caractère de cette espèce est sa décoloration par la méthode de Gram. Certains auteurs ont également décrit des espèces de streptococpie présentant cette particularité. Doléris et Bourges, Nocart et Mollereau, Etienne, Lemoine en ont puhlié des observations, nous verrons quels sont les caractères différentiels des variétés décrites par ces auteurs. Nous avons communiqué à la Société de Biologie en collaboration avec le docteur Cottet 3 observations, une ayant trait à une infdtration d’urine, une autre se rapportant à une cystite et enfin une dernière concernant une diarrhée légère chez un enfant nourri au sein. Dans ce dernier cas, il s’agissait d’un nourrisson auquel avait été donné du lait mal stérilisé en plus de ses tétées habituelles. Dans ces 3 observations il s’agissait d’une même espèce se présentant avec les mêmes caractères de culture et de virulence. Nous avons pensé qn’il s’agissait d’une variété de streptocoques nettement dérinie. Dans les selles, comme dans le pus, il se présente sous la forme de de petits diplocoques ou do cocci régulièrement arrondis. Dans les cultures en bouillon, on voit de nombreux diplocoques et de courtes chainettes de 5 à lü grains. Chacun do ces grains est arrondi très régulier. Ils sont plus petits que les grains du streptocoque pyogène et même que ceux du streptocoque d’IIirsch-Libbmann. Ils ne dépassent guère U a. O. Dans les vieilles cultures on voit assez fréquemment des formes irrégulières de coccus plus gros ou allongé. Quand il est conservé assez longtemps dans des milieux anaérobies, il se présente sous formes de chaînettes au milieu desquelles se trouvent parfois des formes plus grosses on en bâtonnet.

Il se colore bien par les colorants basiques ordinaires,

Il I II

mais il reste décoloré par la méthode de Gram. Ce carac tère n’est pas modifié, ni par l’âge des cultures, ni par la coloration intensive. Sa vitalité est considérable, il a pu

Iêtre réensemencé après un mois. Il est facilement tué par l’ébullition prolongée ou en plaçant une de ces cultures à 60“ pendant un quart d’heure. Il pousse sur les milieux aérobies et anaérobies.

Ensemencé sur gélose ordinaire couchée, il donne 24 heures. Après de fines colonies blanchâtres opalines, g plus transpaiamtes et plus petites que colles du streptocoque

pyogène, 48 heures après l’ensemencement, ces colonies I grossissent, att(‘ignent au plus 4 à 5 dixièmes de millimètre.

Examinées au microscope elles montrent une surface unio forme et des bords nets. La croissance s’arrête au bout do

ï, 3 à 4 jours. En vieillissant ou en se desséchant, les colo-

?; nies gardent le même aspect régulièrement arrondi.

: Sur gélose AVerteim les colonies sont plus abondantes et

plus grasses, mais présentent les mèmès caractères de -, coloration.

; , Ensemencé en strie sur gélatine ordinaire, il donne au

S bout de 4 jours, de très fines colonies opalescentes qui no

1“ ‘liquéfient pas le milieu.

En piqûre, on voiflo long du trait d’ensemencement, de : petits points très fins. En général, il pousse mal sur la

i; gélatine.

Le bouillon ordinaire est légèrement troublé. Puis, il se claréfic avec formation d’un dépôt sablonneux formé par do très petits grumeaux.

Le lait devient acide six jours après l’ensemencement. Il se pend en une masse gélatineuse, mais sans rétraction du caillot.

Il a été impossible d’obtenir des cultures, soit sur pomme de terre ordinaire, soit sur pomme de terre glycérinée.

Ensemencé dans de la gélose sucrée profonde, il pousse dans toute la hauteur du tube donnant de fines colonies lenticulaires, régulières de la coloration blanchâtre. Il ne se produit pas de gaz.

L’expérimentation sur les animaux a été dans tous les cas néga,tive. Cette espèce, injectée dans la veine de l’oreille d’un lapin, à la dose de 0,5 cc de bouillon de 24 heures, n’a donné aucune réaction. Il est également inoffensif pour la souris blanche et le cobaye.

Si maintenant nous le comparons aux espèces isolées par les différents auteurs et ne prenant pas la coloration do Gram, nous trouvons des caractères un peu différents.

Le streptocoque d’Etienne pousse sur pomme de terre, n'a aucune action sur le lait et est doué d’une vitalité précaire. Celui de Doléris et Bourges donne des colonies plus grosses sur agar analogues au pyogène, il pousse très bien en gélatine et donne sur pomme de terre un enduit blanc, très net. Le streptocoque de Nocart et Molléreau se colore mieux par le Gram-Weigert, donne sur agar des colonies plus blanches et plus jaunes, et sur gélatine une pellicule mince.

Il nous semble donc que cette espèce soit bien différenciée.

b).Streptococcus enteritis (IiiRSCH-LiBBM.\NN). — Cette espèce fut vue en même temps, en 1897, par Booker, Hirsch et Libbman, mais son étude fut surtout bien faite par ces deux derniers observateurs.

Elle est très difficile à isoler avec les méthodes aérobies ordinaires, on peut l’obtenir plus facilement à l’état pur en

se servant des méthodes que nous avons indiquées. Il existe dans presque toutes les selles normales ou pathologiques.

Dans les selles, cette petite espèce se présente sous la forme de diplocoques à grains, régulièrement arrondis, quelquefois allongés. Dans certains cas, on perçoit nettement, en certains endroits de la préparation des chaînettes de 4 à 10 éléments au plus. Escherich prétend avoir vu des chaînes de 20 à 30 grains, il est vrai qu’il a soin d’éviter l’écrasement des matières en étalant sur la lame. Ces grains sont tantôt régulièrement espacés, tantôt groupés par deux, en streptodiplocoques. Booker figure cette disposition dans la planche annexée à son mémoire.

Dans les cultures jeunes en bouillon, il affecte également cette disposition et quand la division est rapide, on peut voir des formes allongées en biscuits qui sont le début de ce stade de division. Presque toujours ces grains sont arrondis, rarement ovales, fréquemment disposés par paire, plus fréquemment en chaînes de 10 à 15 éléments. Les formes en tétrades sont rares, ainsi qu’on peut du reste le voir dans la figure de Hirsch, annexée à son travail. La dimension de ces grains oscille entre 0,5 à 0,8.

Il est plus petit que le streptocoque pyogène. A côté de ces dispositions fréquentes, on note quelquefois, en bouillon, des chaînettes bifurquées à une de ses extrémités et des cocci-isolés. Sur les autres milieux agar, gélatine, pomme de terre, lait, les chaînettes sont rares, les diplocoques, dominent.

Il prend bien la couleur par les méthodes ordinaires de colérants basiques.

Par la méthode de Gram, il reste très fortement très coloré et comme Escherich l’a fait remarquer, il paraît plus gros, ce qui est du reste un fait assez général. Sa vitalité est assez

considérable, il pont rester vivant un mois. 11 pousse bien clans les milieux aérés. Mais beaucoup mieux eu milieu anaérobies.

Les cultures sur agar, présentent au bout de 24 heures de très fines colonies, grosses comme une pointe d’aiguille, à peine visibles, de coloration gris-bleu, et c[ui paraissent bleutées quand on les examine par transparence. L’eau d’exsudation de la gélose reste claire. Quarante’ huit heures après ces colonies grossissent d’une façon assez irrégulière, les unes ne dépassent guère celles qui sont le mieux

séparées sont un peu plus grosses. Au bout de 3 à 4 jours, elles cessent do s’accroître, la plus forte dimension c^n'elles peuvent atteindre et de 2 à 3 milimètrcs. Leur coloration leur transparence reste la même. Examinée au microscope, elle montre un centre acuminé plus épais et des bords finement découpés qui peuvent donner à la colonie un aspect dentelé caractéristique.

L’eau de la gélose contient alors des grumeaux gris-blanchàtre.

Sur gélose sucrée leur développement est plus rapide, elles sont un peu plus épaisses et leur diamètre est plus grand.

La gélose Wertheim donne de bonnes cultures mais moins vivaces que la gélose sucrée.

Sur gélatine couchée, on voit apparaître en 2 à 3 jours, do petits points, très fins de même coloration et do même aspect que sur la gélose.

Dans les ensemencements par piqiire, on obtient le long de la strie de petites colonies assez rares.

Sur le sérum de bœuf, les colonies se développent assez bien.

En bouillon ordinaire, il pousse assez mal, 24 heures à 36 heures après, il donne un trouble très léger qui disparaît

on 8 à 10 jours et forme un dépôt filamenteux finement granulé.

Le lait donne des résultats assez variables, tantôt il devient acide au bout de 4à5jours, tautôtS à 10 jours, tantôt 2 à 3 jours. Petit à petit, le milieu se prend en une masse gélatineuse. Il n’y a pas rétraction du caillot.

Sur pomme de terre, il pousse assez mal, entre 5 et 9 jours d’ordinaire, il donne cpiand les ensemencements ont été larges de petits points dissimincs, brillants, humides surélevés de a grosseur d’une pointe d'aiguille, de coloration blanchâtre, sans changement d’aspect de la pomme de terre.

Dans les milieux anaérobies et en particulier en gélose sucrée profonde, il pousse bien. Il donne du haut on bas du tube de fines colonies, qui apparaissent au microscope, comme de petites masses lenticulaires et très régulières.

Les expériences sur les animaux n’ont pas toujours donné des résultats identiques. La plupart du temps inoculé à faible doses à la souris blanche, il ne donne lieu â aucun accident. Mais à la dose de 2 centimètres cube de bouillon frais de 24 heures, il tue assez fréquemment entre 5 et 15 jours. Dans un cas, il avait produit au point d’inoculation un petit abcès. Toutes les fois (ju’il causait la mort, le sang du cœur réensemencé donnait à l’état pnr ce même strep tocoque.

Bi on le fait ingérer â de jeunes lapins â la mamelle, il ne produit aucun résultat, de môme si l’expérience alieu sur un jeune lapin qui commence à manger de l’herbe.

Sa virulence est donc assez faible et ne faiblit pas après un mois quand elle existe.

Cette espèce paraît donc bien différente du streptocoque pyogène.

Mais il est difficile de le différencier du streptocoque delà

salive de Voillon. En effet comme lui, il donne des cultures bleutées sur agar, comme lui il pousse sur pomme de terre. Il se sépare de cette dernière espèce par la forme allongée de ces grains, bmr régularité et enfin par sa virulence. En effet, jamais comme l’a bien constaté jVeillon, puis Halle, cette espèce, même après passage ne devient virulente, tandis que le treptococcus d’IIirscii-Libbmann peut l’être d’emblée, et le devient facilement par passage.

Il est a remarquer que dans les diarrhées, sa virulence semble s’accroître. Il est très différent de l’entérocoque comme nous le verrons on étudiant cette espèce-.

Le diplocoque décrit par Skossier, paraît se rattacher au streptocoque d’Hirsch-Libbmann , quoique l’auteur n’ait pas observé d’accroissement sur pomme de terre nous ne pouvons nous prononcer, sur son identilication ou sa séparation, car nous n’avons pas rencontré d’espèces correspondant d’une façon complète à la description de cet auteur.

Sarcines

Les sarcines ont été signalées fréquemment dans les selles du nourrisson. Nous en avons rencontré quebpies échantillons, mais on doit les considérer comme des espèces .rares. Elles existent notamment dans le méconium de l’enfant au sein, au moment de la phase d’infection croissante. Dans un cas, il s’agissait d’un enfant âgé de 3 jours, chez lequel nous avons déjà vu le staphylocoque blanc (Ohs. 22).

Dans toutes nos observations, portant sur dos enfants normaux soumis à ce genre d’alimentation, nous n’avons plus rencontré de sarcines même à l’examen direct. Elles semblent donc disparaître dans da phase d’itifectjon décroissante ,

Chez les enfants au biberon, leur disparition semble plus tardive. Il est enfin possible d’en trouver chez des diarrhéiques. En tous cas, leur variété et leur inconstance, nous porte à croire qu’il s’agit d’espèces de passage.

B) Sarcina candida (Reinke). — Nous avons rencontré, dans l’observation 22, une petite espèce qui nous semble être identique à la sarcina candida de Reinke. En voici la description :

Dans les selles, elle se présente sous la forme de gros diplocoque ou de tétrades qui semblent entourés d’nne auréole et qui paraissent Ijien différents des antres cocci ou diplocoque plus petits qui les avoisinent.

Dans les cultures en bouillon, on trouve de gros cocci, la plupart du temps disposés par paires et formant parfois des amas. On rencontre pins rarement dos formes en tétrades. Los grains sont souvent inégaux. Les plus gros sembhmt divisés par une fente médiane. Mais on ne rencontre pas sur les milieux solides les paquets cubiques caractéristiques des sarcines.

lis se colorent bien par les colorants basiques. Ils restent également colorés par la méthode de Gram.

Sa vitalité est assez précaire, elle ne dépasse guère 8 à 10 jours. Mises pendant un quart d’heure à C0“, les cultures ne peuvent plus être réensemencées.

Cette espèce pousse très bien sur les milieux aérobies et anaérobies, à la température ordinaire et mieux encore à 37->.

Sur gélose ordinaire couchée, elle donne des colonies arrondies, épaisses, humides, blanches, qui sont adhérentes à la gélose, élastiques. Vues au microscope, elles se montrent d’épaisseur uniforme et avec des bords nets.

Par confluence, ces colonies peuvent former une nappe de

môme couleur à contours polycycliques. L’eau de gélose lie se trouble pas, il’ s’y forme au bout de 2 à 4 jours un dépôt formé de gros grumeaux.

Sur sérum de bœuf les colonies sont petites humides, blanches.

Sur gélatine ensemencée par strie, on voit apparaître de petites colonies blanches qui liquéfient. En piqûres, 24 heures après, ou voit iiii entonnoir de liquéfaction, cette liquéfaction est complète en 48 heures.

La gélatine reste toujours claire, au fond, il y a un dépôt grumeleux et, à la surface, des fragments de colonies très minces.

La pomme de terre donne des colonies peu épaisses, humides, d’un blanc sale, jaunâtre, sans présenter aucune altération.

Ensemencée dans le bouillon ordinaire, il se forme, au bout de 24 à 36 heures au fond du tube, un dépôt de gros grumeaux lilancs, à la surface du bouillon, il existe de petits pellicules minces de meme couleur, mais le milieu ne SC trouble jamais.

Le lait devient acide en trois jours, il se coagule et donne, au bout de huit jours, un caillot rétracté au fond du tube, avec une exsudation abondante d’un sérum clair.

Dans les milieux anaérobies et particulièrement en gélose sucrée, il se forme des colonies blanches lenticulaires régulières dans toute la hauteur des tubes. A la surface de la gélose, 011 voit des colonies arrondies, blanches, élastiques. Il ii’y a pas fragmentation du milieu.

Cette espèce se dilférencie du tétragène par son action sur la gélatine et par sa morphologie dans les milieux liquides.

B) Sarcina minuta (de Baiiv). — Nous avons trouvé chez un

enfant sain de 6 jours, nourri au lait stérilisé, une sarcine extrèniement petite que nous rapprochons de la sarcina minuta de de Bary.

Dans les selles, cette espèce seini)le se présenter sous la forme de tétrades entourées d’une auréole claire. Dans les milieux liquides on voit de gros diplococjues séparés par une fente mince claire. A côté de cette forme, on rencontre des tétrades et des paquets caractéristiques cubiques. Sur les milieux solides ces paquets sont plus rares, les diplocoques sont beaucoiqi plus fréquents .

Ils se colorent bien par la fuschine diluée ou le violet de gentiane. Ils restent colorés par la méthode de üram.

Sa vitalité est assez considérable. Cette espèce reste vivante en culture pendant 15 jours à 3 semaines.

Elle vit très bien dans les' milieux aérobies et anaérobies à la température ordinaire et à 37“.

Ensemencée sur gélose ordinaire, on voit 4 jours après apparaître des petits points d’une grande finesse, gros comme la pointe d’une aiguille, de coloration blanche et opaques, arrondis. L’eau exsudée de la gélose ne se trouble pas. Il se dépose do fins grumeaux sur la paroi du verre. Sur gélose sucrée, f accroissement est plus rapide. Sur la gélatine, en strie, cette espèce pousse lentement, pe+it à petit apparaissent de fines colonies blanches semlilables aux colonies obtenues sur gélose ordinaire. En piqûre, elle pousse très lentement donnant de très fines colonies blanches.

Elle pousse sur pomme de terre, 5 jours après rensemencement donnant des points blancs très petits surélevés.

Le bouillon ne se trouble jamais. Des grumeaux se forment dans le milieu et tombent au fond du vase.

Le lait n’est pas notablement transformé. Cependant au bout de Ü jours, on constate une réaction faiblement acide. Il ne se coagule pas.

En gélose profonde sucrée, cette espèce ponsse rapidement. Il est à remarquer que son développement se fait surtout dans la zone aérée. Elle donne des colonies Anes, régulières, de forme lenticulaire sans production de gaz.

Les inoculations à la souris blanche, à la dose de 2 cc. de bouillon de 48 heures n’ont donné aucun résultat.

Nous avons rapproché cette espèce de la Sardna minuta, nous fondant sur les caractères suivants : Formation de paquets typiques sur les divers milieux non liquéfaction de la gélatine, et pas de trouble des milieux liquides.

G. — Sarcina Garnea (Grubeh). — Nous avons isolé cette espèce chez un enfant soumis au biberon et atteint d’une diarrhée grave (obs. 16).

Dans les selles il a été impossible de la distinguer des autres .cocci qu’elle contenait. Elle a pu être isolée d’un tube couché ayant été ensemencé directement avec les selles, elle se trouvait au milieu de nombreuses colonies du streptocoque de Ilirsch-Libbmann et de colonies de B. •Coli.

Dans les cultures sur bouillon, onvoitdegros diplocoques, dont les grains sont accolés i)ar une surface plane. La dimension de ces grains isolés atteignent 0 iJ.8 à 1 ja. A côté de cette forme, on note des tétrades et des amas dans lesquels cette disposition par quatre est facilement reconnaissable. Dans les cultures, sur milieu solide, cette disposition est plus rare.

Ces cocci se colorent bien par les méthodes ordinaires. Ils restent colorés par la métliode de Gram.

Ils restent vivants sur une colonie vieille de trois semaines à un mois. Ils sont tués dans une culture maintenue à 60“ pendant un quart d’heure.

Ils poussent bien sur des milieux aérobies et anaérobies à 37“ comme à 20".

Sur gélose ordinaire, 24 heures après eusemeucemciit, ou ne constate pas de colonies visibles. L’eau d’exudation de la gélose contient cependant un fin dépôt pulvérulent. (,)uaraute-huit lieures après apparaissent de petites colonies qui progressent jusqu’à atteindre, au bout do cinq jours, le diamètre de 3 millimètres. Ces colonies sont saillantes, humides, régulièrement arrondies, d’une coloration rosée, orangée. Vues au microscope, elles se montrent formées d’un centre épais plus foncé, opaque, entouré d’une zone plus transparente. Tout autour d’une grosse colonie, il n’est pas rare de rencontrer des petites colonies ayant les mêmes caractères, qui donne à l’œil nu un aspect irrégulier à la colonie.

Sur gélatine, soit en strie, soit en piqûre, le développement reste lent. La culture ne se montre qu’au bout de trois jours, de couleur rose chair. Le milieu n'est pas liquéfié.

Sur pomme de terre, les colonies sont petites, surélevées, de même coloration rosée. Elles apparaissent 3 jours après rcnsemeucement. La pomme de terre reste blanche. Quand elle se dessèche, la culture devient squameuse, blanche comme de la craie.

Le bouillon reste toujours clair. Il se dépose après 20 heures des grumeaux très fins. Ce dépôt augmente en 48 heures et devient plus lllanl.

Dans la gélose sucrée profonde, lé développement est rapide, mais se fait surtout dans la zone aérée. Ce sont de hues colonies blanchâtres poussant du haut 'en bas, régulières lenticulaires. Il n’y a pas production de gaz.

Nous avons rapproché cette espèce de la Sarcina Carnca à cause du pigment rose-chair, que prennent les colo-

nies, du caractère de scs cultures eu gélatine c|ui n’est pas liquéfiée.

Entérocoque (Tiiierceuin)

(Micrococcus ovalis (Eschorich)

Esclicrich dans sa monographie de Stuttgard en 1886 avait décrit le micrococcus ovalis auquel iln’attribuait aucun pouvoir pathogène.

Thiercelin le 15 avril, puis le 24 juin 1899, communiqua à la Société de Biologie, la description de l’entérocoque qu’il reconnut être un saprophyte, mais susceptible de devenir pathogène. En comparant ces deux descriptions, nous verrons qu’il est bien probable qu'il ne s’agisse que d’un seul et même microbe.

Cette espèce est plus facile à obtenir sur des milieux aérobies ordinaires que le streptocoque d’IIirsch-Libbmann. Elle se trouve également moins fréquemment dans les selles. Jusqu’ici, nous ne l’avons rencontrée que chez des enfants au biberon, malades ou bien portants, mais jamais chez des enfants au sein. Escherich semble être anuvé à des résultats bien voisins des nôtres sur ce point, car il n’a vu le micrococcus ovalis qu’une fois sur cinq cas d’enfants au sein bien portants.

Dans ses recherches sur le méconium et dans l’intestin d’enfants morts, avec des troubles dyspeptiques, il le décrit très fréquemment.

Dans les selles, il paraît se différencier assez nettement des autres cocci. C’est un diplocoque à grains plus gros, plus allongés, disposés en flamme de bougie, dont les grains sont opposés par leur partie pleine. La plupart du temps, il possède même une auréole, ce qui achève sa res-

TISSSIER 5

seiiiblance avec le pileümocoque, comme l’a bien fait Remarquer Thiercelin.

Dans les cultures jeunes en bouillon, il se présente sous la forme de coccus ovale allongé terminé par des extrémités un peu arrondies. Ce n’ést dône pas un coccus proprement dit, mais un cocco-bacille. Il se groupe en amas en dq^lbcoque, quelquefois en courtes chaînes né dépassant pas 4 à5 éléiheht's.

Cette disposition en amas est même la règle dans les cull'uires sür milieux solides. Les éléments ne sont pas colles les ühs contre les autres, ils semblent séparés par unë substance homogène environnant chaqiié élément. Quand il se présente én dqDlbcoqü'és, les éléments sont allongés et rappellent l'a’ dispbsilion’ du phciimbcoque. Les grains ee font vis-à-vis par leur partie large, ils né peüvent mémo être séparés que pur ü’ùe sünplé lente à peiné visible. Les cliaîhèttés toujbur's courtes et rares' sblit formées lioh dé diplocbqües, niais d'éléments ovales réguliers. Dans les cultures üii' péü viëilliis', lés fbruiës sont plus allongées, alors liëtVëihehtcocéo-bacillairos et même bacillaires. Dans lés milieux ahaérobiés, il ré s te en diplocbccb-bacilles

il se coloré bien par lé violet de gentiane, le tliibiiinb lé lé ziélil dilué, été!

Il reste fortement coloré par la méthode de Grain'.

ir s'é cültiVé 'bién'dkiis lës'milieux' aérobies bu anàémbbies cbihliié à'20'’.

Sur la gélose couchée ordinaire de 24 à 36 'heures a|3rès' l'eilS'Gniéiléeifiéiit aiijîàtaisseut dé filiés colonies gris'-blaiicHàti-e, péü tiàtlispareiites qui'au liliér'oscope montrent dés bbrds'iiets' biéii arrbndis; Elles augmentent ensuite pendant 2 à'3jbüts étcésso'nt'eiisuité de s’accroître. La dimension dés colbîîhes bien séparées' atteint 2 à 3 miillimètres.

Quancï les enseiiieiiccincnts ont été faits largement, il se forme une nappe inince de même couleur légèrement transparente formée de petites colonies agglomérées dont il est didieile do reconhaître 1(îs contours. Quand la culture vieillit, les colonies palissent, deviennent transparentes et s’ciïacont. Qiuuul on rensemenee, une de ses cultures devenues translucides, les colonies nouvelles gardetit pe caractère, ressemblent à des gouttes de rosée et rappellent à s'y méprendre des colonies de pneumocoquesl

L’eau exsudée de la gélose se troulde 24 heures après rensemencement, elle ne commence à se clarifier que 6à8 jours après, formant un dépôt épais iloconneux, visqueux.

Sur gélose sucrée, elles apparaissent plus rapidement, sont plus opaques et plus larges.

Sur gélatine ordinaire couchée, on voit le long de la strie les memes colonies gris-blanchhtres. Elles n’apparaissent qu’au bout de 3G heures. Enpi({ùre, il se forme le long du trait d’ensemenceincnt des colonies arrondies de même couleur. Le milieu n’est pas li(|uéfié. Le milieu n’est pas liquéfié. La gélatine sucrée donne des coloides plus épaisses.

Sur pomme de terre, trois à quatre jours après rensemencement au plus, apparaissent des points gris ternes conlluents formant une nappe mince grise mate.

Dans le bouillon ordinaire, au bout île 24 heures, ou voit uu trouble blanchâtre uniforme persistant avec formalion d’un dépôt filant, visqueux, blanc impossible à dissocier. Six à huit jours après, le bouillon est pins clair et le dépôt augmente, mais il ne redevient limpide que longtemps après. Le bouillon sucré, glycérine, lactose est un meilleur milieu de culture.

Le lait devient acide en 24 heures. Il se coagule en masse rapidement. Le caillot n’est pas rétracté 20 jours après sa formation.

Dans les milieux anaérobies, il pousse également bien et sans ])roduelion do gaz fragmeidaut le milieu. Vingt-quatre heures après, de (lues colonies lenticulaires blanchâtres eiivaliisseid le tube du liant eu bas. Elles sont régulières, lenticulaires, à bords nets.

Les inoculations par voie sous-cutanée d'un bouillon de 24 lieures restent sans action chez la souris et le cobaye, même à des doses de 2 centimètres cubes.

Thierceli n qui a fait sur les animaux un plus grand nombre d’expériences, aurait obtenu avec des doses de 1/2 centimètre cube la mort des souris inoculées. Nous avons comparé la virulence d’un entérocoque ({ui avait été mis à notre disposition par notre collègue Coyon,. avec les échantillons que nous avons pu isoler et nos résultats ont été les mêmes.

Si nous comparons cette description avec celle qu’Esclierich a donné en 1836 de son inicrococcus ovalis, nous voyons (|u’elle est identique. « i\Iicroscopi(juement, il se présente sous la forme de coccus do 0,2 à 0,3 gde diamètre. Sur les préparations ils font l'impression do bâtonnets courts grâce à leur foriiu! très fré([uemment ovale ou allongée. Lorsqu'on les examine de près, les formes ovales de 0,6 à 0,7 de long se présentent sous la forme do coccus allongés au milieu desquels on reconiiait une fente fine. Ces rapports lU' sont appréciables qu’avec un fort grossissemeid. Assez souvent, ils constituent de courtes chaînes dans lesquelles la division se fait ])erpendiculairemeut à l’axe longitudinal. Dans la gélatine, ils se dévèloppent seulement dans l’intérieur de l’orilice en forme de petits boutons blancs, tandis qu’à la périphérie, il se développe sur les bords en forme d’un mince liseré incolore. Les colonies sur plaques restent très petites et ne présentent rien de particulier. Sur pomme de terre, ils forment une petite colonie blanche, assez

riche, mate. La culture sur agar et sérum no présente rien de spécial. Ils poussent bien sur le lait qui se c(jagule au bout do quelques jours. Dans le bouillon lactoséils se développent alroudammeiit et forme uii dépôt Idauc nuageux. «

Ce micrococcus ovalis oti entérocoque est-il identique au streptococcus enteritisy Nous avons étudié parallèlement les deux espèces isolées d’une mémo selle et nous ne croyons pas qu’elles fussent identiques. L’aspect morphologique est bien différent, l’un est un cocco-luicilhî disposé souvent par paires rarement eu courtes chaînes de 4 à 6 grains, l’autre est un streptocoque ayant très souvent de longues chaînes de 10 à 15 éléments. Le premier donne des gros grains eu flamme de bougie, des formes bacillaires, le second doiiue des grains biens plus petits et rarement ovales. L’entérocoque, est auréolé, le streptocmpie ne l’est pas. Les cultures .sont encore plus différentes. En règh> générale, les cultures do l’entérocoque apparaissant })lus rapidement sont plus grosses, plus régulières. Les bords sont régulièrement arrondis. Leur coloration est gris Jjlauche.

Sur gélatine, sur pomme de terre, dans le bouillon, il donne des colonies abondantes.il coagule le lait eu 24 heures. Au contraire, le streptocoque donne d(‘s colonies toujours petites bleutées, à bords souvent découpés, à peine visibles sur gélatine et pomme, de terre, fl trouble à pc'iue le Imuilloii, ne rend le lait acitle et le coagule (fue 4 à 5 jours après l’ensemencemeid.

Nous ne pouvons donc pas être do l’.'vis de Escherich et de Thiercelin qui identifient (!es espèces.

L’entérocoque est peut-être le diplococcus major; le streptococcus eiitéritis, le diplococcus minor que Tavel avait déjà vu dans les selles en 1895. Cet entérocoque paraît différent du streptocoqiu^ Weinberg et Le floy des Barres, qui

semble avoir les mèines caractères de ci^lture, mais qui .est toujoqrs en chaînettes el a tous les caractères morph,ologiques et biologiques des streptocoques.

cocco-BACjLLus ANAEBOBius PERFOETENS (espèce uouvelle)

Cette petite espèce a été isolée dans un cas de diarrhée, chez un enfant au sein, âgé de trois mois et demi (obs.7).

Daiis les selles, il est impossible de différencier des autres cocci si l’on se contente de colorer la préparation avec les colorants basicpies ordinaires.

Mais si l’on emploie la méthode de Gram, la différenciation devient plus facile, car il se décolore par cette méthode. Nous aA'ons vu qu’il existait aussi des cocei et des streptocoques également décolorés. Les cultures seules pourront les différencier.

Il se présente sous la forme d’un petit coccus ovale, allongé, isolé ou groupé par paire. Il ne forme pas de chaînett.es apprécialffes de plus de 3 à 4 éléments.

11 forme quelquefois des amas irréguliers dans lesquels chaque élément conserve sa forme propre. Dans les vieilles cultures, il ne s’allonge pas, il garde constamment sa forme ovale. Sa dimension xmrie 0;j. 8 et 1;j..

11 prend facilement les colorants basiques ordinaires Ziehl dilué, fuschine alcoolicjue violet et gentiane thionine, etc. Il est complètement décoloré par la méthode de Gram.

Sa vitalité est considérable, il a pu être réensemencé provenant de cultures vieilles d’un mois. Une culture mise à G0“ ppndant un quart d’heure n’est plus vivante. Il semble immobile.

C’est un microbe exclusivement anaérohie. 11 ne pousse en outre qu’à 37°.

Sur la gélose ordinaire couchée, il ne pousse pas. Quand le liquide exsudé est abondant, on peut voir au fond de ce

liquide et . entre la gélose et le verre se produire un dépôt très fia seinlilable à une poussière fine et tenue. Il ne pousse pas en gélatine couchée. Sur aucun milieu aéré, sucré ou lactose, il ne donne de colonie.

En gélose sucréeprofonde , laissée à la température du laboratoire ou mise dans l'étuve à 20", on n’obtient aucune colonie.

Dans la gélose sucrée profonde mise à l’étuve à 37®. 48 heures après remsemencement, on voit d’abord apparaître au niveau delà limite inférieure de la zone aérée, un trpuble gris-blanc se terminant brusquement par une limite nette à sa partie supérieure et disparaissant insensiblement et dans la profondeur du tube. Si on examine cette bande au microscope, elle se montre formée d’une multitude de petites colonies très fines, ponctuées régulières. Quelques heures après à ce niveau, la gélose est fragmentée par de fines ljulles de gaz qui s’accroissent rapidement. Dans la profondeur des tubes; les colonies apparaissent plus nettes, plus grosses, sans jamais dépasser le diamètre de un milimètre.

Au niveau de chacune de ces colonies, la gélose se brise et la culture s’étend en surface sur cette partie fragmentée d’où elle peut gagner le paroi du verre. Ces colonies en surface sont petites, nettement arrondies, à bords assez réguliers. Cette fragmentation de la gélose est très active, elle commence très peu de temps après l’apparition de la colonie, elle est produite par un gaz extrêmement fétide dont l’odeur rappelle le sulfure de carbone. Ce gaz n’est pas inflammable. Il infdtrc complètement le milieu. Si l’on fait une piqûre dans la gélose, des quantités de fines bulles se développent le long de la strie.

Au bout de 8 jours, quand les colonies ne se développent plus, la production du gaz cesse, Il se résorbe et disparaît

petit à petit et au bout de 15 jours, la gélose reprend son aspect primitif. Le microbe reste cependant vivant au moins pendant deux autres semaines.

Les colonies sont lenticulaires, régulières, à bords nets.

Dans la gélatine profonde recouverte d’une couche épaisse de gélose, on ne peut obtenir de cultures; cette espèce ne poussant pas à 20".

Dans le bouillon sucré, ensemencé d’après le procédé de Guillemot, il se forme rapidement, en 24 heures, un dépôt fin cçmposé de particules très petites, blanc-grises. Avec du bouillon ordinaire, le développement est plus lent. Dans des tubes de lait profonds, on ne voit aucune modification appréciable.

Les inoculations au cobaye d’une culture en gélose de 48 heures, n’ont donné sous la peau aucune réaction inflammatoire. Il faut dire que les expériences ont été faites avec cultures en gélose, injectée avec le milieu, ce qui paraît atténuer la virulence des espèces.

Les caractères de ce microbe permettent de le différencier facilement des autres espèces anaérobies. Le niicrococcus fœtidus de Veillon est la plupart du temps disposé en chaînettes. Il reste coloré par la méthode de Gram, donne que très rarement des gaz et, dans le bouillon, forme dos grumeaux. Le staphylococcus parvulus de Veillon et Zuber est un coccus très fin, disposé en diplocoqne ou en amas et qui est décoloré par la méthode de Gram. Il pousse à 22, 23“ et donne des colonies caractéristiques dans la gélatine : opaques, granuleuses, brunâtres. En gélose sucrée profonde, ces colonies sont granuleuses, et ne surface il donne également des gaz fétides, mais en petite quantité et enfin il est pathogène pour le cobaye et le lapin. Nous avons pu comparer ces deux espèces et elles nous semblent bien différentes.

BACTÉRIUM COLI

Depuis la publication d’Escherich, eu 1886, donnant la description de cette espèce, une quantité de travaux a paru sur ce même sujet. Toutes les questions qui pouvaient être soulevées, out été étudiées, la morpholog'ie, les caractères de culture, la virulence sur les animaux, le rôle dans les maladies de l’adulte et des nourrissons, les toxines, les réactions du sérum des animaux immunisés.

Les recherches ont été d’autant plus nondu’euses que cotte bactérie est facile à isoler et qu’elle existe dans nomijre d’affections, seule ou associé.

Nous ne pouvons reprendre toutes ces questions, nous nous sommes surtout bornés a étudier les caractères morphologiques et biologiques de celte espèce, à voir s’il en existe plusieurs variétés et à noter leur présence dans les selles normales et pathologiques.

Escherich avait déjà vu (^u’à côté de colonies blanches, on pouvait on trouver d’autres moins opaques, plus bleutées. Lamelle, en 1889, put jmr des passages dans le lait ou dans le péritoine des cobayes transformer les variétés blanclres en variétés transparentes.

Macaigne, en 1892, constate les mêmes variétés. Wurtz et Hermann constatent qu’il existe une variété, commune opaque ou translucide et une variété typhimorphe à bords dentelés décoiqjôs.

Gilbert pousse plus loin la différenciation et décrit à côté du bactérium Coli, cinq variétés paracolibacillaircs. Le premier groupe comprend le bactérium lactis aerogènes et des colonies bleutées et minces. Le second groupe des bacilles ne donnant pas d’indol, le troisième des espèces

n’agissant pas sur la lactose, dans le quatrième des bacilles immobiles ne donnant pas d’iixdol et dans un cinquième groupe les bactéries sont immobiles ne donnent pas d’indol et n’ont aucune action sur la lactose. Szego et Théodor décrivent également deux variétés. Valagussa reconnaît topjours des (lifîérences parmi les espèces variées dp bpctérium Cqü.

Lesage et ses élèves n’attriljuent aucune importance à ces diiïérenciations.

Nous avons trouvé cependant des variétés qui seml)lent bien nettes, nous en donnerons une description succiiite.

ai Variété commune (EsciiERiep)

Cette espèce se présente dans les selles sous la forme d’uii cocco-bacille large, mesurant 1 à 2 [j.. La plupart du temps, il est groupé en amas très nets, faisant contraste avec les autres espèces.

Dans les diarrhées aiguës, cette disposition s’exagère.

Dans les milieux liquides, il coixserve cette forme coccobacillairo, mais dès que la culture vieillit, les formes s’allongent.

Sur les milieux couchés, il reste égalemept court,

ovQïitie.

Pans les cultures anaérobies, les formes sont plus longues, mais toujours larges; les extrémités sont arrondies.

Il se colore bien pur Ips méthodes ordinaires, son centre reste le plvis souvent décoloré.

Il ne prend pas le Gram.

Il est mobile. Ne semble pas donner de spores et est d’une grande vitalité,

Il semble c.epeiyjanl moijis vivace ]e§ miliepx ana.erobjes.

Il pousse à 37“ ou à 20“. .G’est un anaorobie facultatif.

Sur la gélose ordinaire couchée, il donne des colonies arrondies d’abord opalines à reflets irrisés qui ne tardent pas à grossir et à devenir opaques d’un blane grisâtre. Les bords sont réguliers. Le centre un peu surélevé. L’eau de la gélose exsudée est trouble, puis il se forme un dépôt épais filant blanc jaunâtre. Le liquide ne devient jamais clair.

Sur la gélose lactosée, glucosée, gélose We.stheim, il donne rapidement les mêmes colonies. Il eu est de nn'une sur sérum.

Sur la gélatine, les colonies apparajssent rapidenient pp 12 à I§ heur, es; .elles sont plus blanches et ne liquéfipnt pas.

Spr ces milieu^ cqucbés, il est vrai qu’il peut exister des colonies plus transparentes que d’aütres, pjus bJeUfS, plus minces, à bords peut-être un peu miûns pets, inpis cettp disposition dure peu. iVpr.ès quelques réensemencpineiits, elle a, d’ordinaire, disparu.

Sur la pomme de terre, 24 heures après, apparaît uue nappe épaisse, humide de coloration ocre, ayant quel<luefois des bulles de gaz. La pomnie de terre noircit et la culture devient jaune brunâtre.

Dans le bouillon ordinaire, il se développe rapidement en causant un trouble uniforme qui s’épaissit, devient blanc jaunâtre.

he dép.ôt formé est .éppis c|e ipêrqe couleur. Le liquide reste longtemps trouble, Dans le bouillon gluppsé, laetosé,

saccliarosLi, tlextriiiô, etc., le dévelojDpement est ^jliis abondant. Sur la i^aroi dn verre, an niveandela surface du liqnide, il se dépose de lîncs granulations blanchâtres (jiii peuvent flotter sur le milieu.

Le lait est rapuhnnent coagulé en 3 à 4 jours; le caillot se rétracte.

Dans la gélose sucrée profonde, ce bacille pousse rapidement en 12 à 20 heures; le milieu est rempli de fines colonies. Puis de nombreuses bulles de gaz se produisent fragmentant le milieu. Au niveau de ces lacunes, on note souvent un liquide louche acide qui semble provenir d’une liquéfaction du milieu.

Cette fermentation des sucres est, du reste très active. Les milieux sucrés sont ordinairement acides dans les 24 heures qui suivent renscmencement.

Les géloses glucosées ou lactosées au tournesol, virent rapidement au ronge.

Ce bacille produit dë l'indol dans les milieux peptonisés.

Cette description rapide est la description classi([ue. Nous ne ruAmiis donnée que pour montrer la difl'érence qui ('xistc entre cette variété et la suivante.

d' Variété typhimorphe (Hermann et Wurtz). — Si nous avons trouvé la première variété presque dans tons les cas, il n’en est pas de même de la variété typhimorphe.

Nous u’avons vu cette dernière que dans des cas pathologiques ou chez des enfants en convalescence de diarrliée (obs. 9, obs. 14, obs. 10, obs. il, obs. 12, obs. 15). Nous l’avons isolée, en effet, dans deux cas de choléra infantile, deux cas de gastro-entérite chroidqne, un cas de diarrhée grave chez un enfant au soin, et, enfin, chez un enfant au biberon qui venait d’avoir des troubles intestinaux. Nous ne l’avons jamais rencontrée dans les neuf observations que

nous (loiinoiis (renfanls bii'u portant an sein ou à l'aliineii tation par le lait do vache.

Dans les selles, il est pres(pie impossible de la diiréreucier de la variété précédente. Dans les cultures Inpiides, elle se présente sons la forme d’un petit bacille court, moins trapu, moins ovoïde rpie la variété commune. Ces petits bâtonnets sont tantôt isolés, en amas ou diplobacilles. Dans les milieux aérés ordinaires, cette petite forme garde le même aspect et dans les milieux anaérobies, elle n’est guère pluslongue. La longue oscille entre 2 et dij.

Ce baciile se colore bien par les méthodes ordinaires, comme le violet de gentiane, le bleu de méthylène, le zielil dilué, line se décolore ])as par la mélhode de Drain.

Il est mobile, ne semble pas donner despores, car il est tué dans nue culture portée pendant nu ipiart d’heiu’e à 60".

Il pousse à 20" et à 37”. Il est anaerobie facultatif.

Sur la gélose ordinaire couchée, on voit rapidement, 12 iieures après rensemencenient, apparaitre une strie grisbleutée transjiarente à bords dentidés qui envahit le tube dans les 12 heures qui suivent. Il se forme alors une nappe mince, lisse, uniforme, humide de même couleur et de même transparence dont les bords sont finement sinueux, découpés.

Quand on a ensemencé dans la partie la [)lus déclive du tube, on voit la colonie gagner rapidementen snivantle bord de la gélose et envoyant sur le milieu des prolongements élégants, lins, l'amifiés, de même coloration f,[ue la nappe qui recouvre tout le milieu. L’eau exsudée de la gélose est nniformément trouble. Quand la culture vieillit, Ja transparence diminue légèrement, la coloration est toujours bleutée, mais devient plus grisâtre.-

Sur la gélose sucrée, glycérinée, lactosée, etc., le développenumt est encore plus rapide.

Sur la gélaliuè sucrée ou sur gélatiii’e ordînaîre couchée, 48 heures après reiiscmeiicenieii't, ou voit des coloiiiés bien séparées de aièiue lornie, d(' luèiné épaisseur et de uièiiie couleur et ue liquiliaut pas. Mais elles ii’oiit pas une teiidaheé à envahir le tube, aussi marquée que sur la gélose. Éii pi([ùre, il se forme une strie Idaiichdtre Imsseléc le long du. trait. Sur la pommé de terré, 24 lieures apres l’ensemencemeut, apparaît une nappe mince, blanchâtre, mais qui ne tarde pas à devenir saillante, à prendre une coloratioii marron claire et fait noicir la pomme dé terré.

Dans le Ijouillon, en 12 heures, un trouble uniforme blanchâtre se produit. Petit à petit, se forme un dépôt muqueux, épais, (liant, de coloration blanc jaunâtre. Il ne se forme pas de pelliculi; à la surface du milieu in de dépôt sur le verre à ce niveau. Nous n’avons pas pu obtenir avec cette espèce la réaction de l’indol.

Dans le lait, il ne se produit aucune modillcation apparente ; un mois après, le milieu n’est pas acide.

Le petit lait tournesolé ne vire pas au bleu.

Le gélose tournesoléé lactosée n’est pas non plus altérée par là culture, elle reste blevn'.

Dans la gélose siunau' profonde, le développement est rapide, acconipaguée d(! production dé gaz fractionnant le milieu. Cos culturo.s diii due odeur désagréable.

Ainsi cette espèce diffère sensiblement dé la précédente', elle n’àgit pas sur là lactose, mais semblé agir sur le glucose.

Elle ressemble donc à la descrijiüÔh qu’ont donné Petruschky et Fischer du Bacillus foecalis àlcallgènes, mais elle en diffère par son action sur le petit lait tournesolé. Elle ressemble également au bacille typhique.

Ces deux espèces semblent môme assez voisines. Cepien-

clant, le bacillé d’ÈbeiHlV n’a' jamais des côronies aussi eiivaliissant'es', à bbMk aussi' découpés süi la gélose. Les cultures sur pomme de iérre sôiit encore plu's caractéristiques'. II faut éépéiidant reComiaîlVc qué pailbîs eiitrô Ces deux espèces lé diagii’ôsti'c peut' être diflicilé.

Il faüï avoi'r recours à fa réaction agglutinante au moyen d'u'idsérum agissant forténiént sur le bacille typhique. La diliérciiciàtion' est alors facile car lé bacille tÿpbiiriOrplie n’est jamais agglutiné.

Lésaüitéurs qüis'c sont occüpês'dé rechercher dés espèces spécifiques dans la libre ’ inféslin'alé pathologique seiiiblent l’avoir sOuvéïit r'encbiitré a côté de la variété commune et poür la jilupart en oiitfaif line ëspèCe distincte. Le bacillus pybgèiiës dé Passel doinie également' ces colonies en nappe mince et envahissante. Le bacillus néapolitanus d’Emiiierich, le bacillus entiridiss dë ôaertner, le bacille de Gall'ky et Paak, le bacillé aérobic de Van Ermenghen de l’entérite inléctiëusë des veaux, lë babillé dë Kaentschë, celui de lïolst, de Vauglianut Perkins qui oiit été par la süite identifiés au bàctérum Coli lie doivent pas être autre chose que cette variété typhimoiphe.

Bacïéiuum lactis aérooénes (Escherich).

Cette espèce décrite par' Esclierich eii' l'SSfi a été l’objet de nombrëus'ës controverses dë la part des bactériologistes. .Subcëssiveiiiëut ulëntiliéë aiix Bactéries de rinreetioii urinaire pafMdrellë de Louvain, au liacillus lacticus de Pasteur par Wurtz et Leudët, Diniy's et ^lartin, au bactérimn Coli par Macaigiie, Lësagi! et Thiercelin, elle a été daus'ces derniers temps, identifiée au piimunobacilltidc Eriedlànder par Grimbert et LegrÔs. Qiidiquë lit déinbiistratibii dë ces'

auU'iirs lions paraisse très vraisemblable, nous la décrivons encore sons le nom que lui avait donné Eschericbjusqu’à ce que nous eussions vérifié leurs assertions.

Ce liacilie est impossible à différencier dans les selles, du baetérium Coli. Dans les cultures il se présente sous la forme (Idiu cocco-bacille généralement plus petit que ce dernier. Il est rarement polvmorplie et atteint dans les milieux aérés la longueur de 1,5 à 2 \j-. de long. Il parait un peu plus long dans les milieux anaérobies.

11 se colore bien par les colorants basiques ordinaires et reste décoloré par la méthode de Gram.

Il est immobile et ne semble pas donner de spore. Sa vitalité est considérable, il est possible de le récusemencer après un mois. Il pousse à 37° et à 20°. C’est un anaérobie facultatif.

Sur gélose couebée ordinaire, il se forme rapidement 10 il 20 heures après rensemencemeiit descidonies très épaisses formant par leur réunion une nappe saillante, surélevée à bords polycycliques. Elle est lilanche, très opaque. La surface de cette nappe est lisse humide, sa consistance estglaireuse, visqueuse. Elle coule vers la partie déclive et semble former dans l'eau de la gélose, une goutte comparable à du sirop d’orgeat. Sur les milieux sucrés, son développement est plus rapide.

Ce bacille ne liquéfie pas la gélatine, il donne sur ce milieu des colonies semblables à celles de la gélose. En piqûre, il forme le long du trait d’ensemencement une ligue blanche bosselée à la surface, la colonie est surélevée, arrondie et donne l’aspect d’une tète de clou.

Sur pomme de terre, la coloration de la culture est caféau-lait, marron clair. La colonie est épaisse, humide de surface mamelouiiée, elle noircit la pomme de terre.

Le bouillon se trouble rapidement d’une façon uniforme. Sur la surface du milieu, flottent des parcelles blanchâtres qui se déposent à ce niveau sur le verre. Au fond du vase, il se forme un dépôt abondant, blanc-jaunâtre, filant, visqueux. Dans le bouillon peptonisé, il ne donne pas d’Iudol.

Le lait devient acide et se coagule de 36 à 48 heures après rensemencement. Le caillot ne se rétracte pas.

Dans la gélose sucrée, profonde, 12 heures après, appa- •raissent de fines colonies blanches, qui fragmentent le milieu par une production abondante de gaz. La surface est couverte par nue nappe épaisse, visqueuse, blanche.

Ou comprend, d’après cette description, que beaucoup d'auteurs aient cherché à identifier cette espèce avec le B. Coli, et il est évident qu’il y a moins de différence entre ces deux bactéries qu’entre la variété commune et la variété typhimorphe du Coli. L’identité de ce B. lactis aérogènes avec le pneumo -bacille dcFriedlaenderest encore plus probable. L’aspect des cultures, les réactions chimiques vis-à-vis des sucres, l’immobilité sont autant de caractères communs à ces deux microbes.

Nous aA'oiis isolé ce bacille assez fréquemment, soit dans les selles normales, soit dans les selles pathologiques. Il est à remarquer cependant qu’il est rare chez les enfants au sein et presque constant chez les enfants au biberon.

BACILLES ANAÉROBIUS MINUTUS (cSpècC nOUVclle)

Cette petite espèce a été isolée d’une diarrhée grave (obs. 16) chez un enfant âgé de trois mois, mal alimenté. Il avait été nourri, depuis sa naissance, avec du lait ordinaire, sans aucune précaution. Il était malade depuis dix jours et mourut 23 jours après rensemencemeut de ses selles avec des crises diarrhéiques répétées.

Dans les selles, ce bacille se présente sous la forme d’un bâtonnet long de 2 à 4 ul très mince, droit, presque jamais incurvé ou infléchi, à extrémités arrondies.

Dans les milieux liquides, comme l’eau exsudée de la gélose par exemple, il se présente la plupart du temps en forme de diplo bacilles grêles et minces. Dans les cultures vieilles de quinze jours, ces formes s’allongent et peuvent atteindre 6 à 8 [ji.. On ne rencontre presque jamais de chaînes de trois à quatre bâtonnets.

Sur les milieux solides, il est plus petit. Dans les milieux sucrés, comme la gélose profonde, ces bacilles ne dépassent pas, comme dimension, 2 à 4 [x.. Leur disposition la plus fréquente est égalementle groupement par paire. Il est alors possible de voir parfois de courtes chaînes de trois, quatre, six bâtonnets. Nous avons cherché dans de vieilles cultures des formes d’involution et nous n’en avons jamais trouvées.

Il n’existe pas non plus de formes bifurquées. Ce petit bacille est donc remarquable par la constance de sa forme.

11 se colore bien par les colorants basiques ordinaires. Il n’est pas décoloré par la méthode de Gram. Il ne paraît pas donner des spores. Il est immobile.

Sa vitalité est assez considérable, on apu le réensemencer, provenant de cultures vieilles de quinze jours.

Il ne pousse que dans des milieux rigoureusement privés d’air. C’est donc un anaérobie strict. De plus, il ne se développe qu’à 37°.

Dans la gélose sucrée, profonde, laissée soit à la température du laboratoire, soit mise à l’étuve à 20", il est impossible d’obtenir des colonies.

Dans le même milieu, mis à l’étuve à 37", il pousse avec une extrême lenteur. Six jours aj^rès l’ensemencement au

iniiiiinun, on voit le milieu devenir moins transparent. Ce trouble s’arrête à une limite nette à 3 c. de la superficie du milieu, limite de la zone aérée. En examinant au microscope on voit une multitude de fines colonies régulières, rondes ou plutôt ovalaires. L’accroissement continue encore pendant les deux jours suivants et s’arrête. Les colonies sont encore extrêmement fines, grosses comme une pointe d’aiguille. Elles sont blanchâtres, presque transparentes. Elles paraissent toutes semblables de forme et de couleur.

En vieillissant, elles deviennent grisâtres et vues au microscope, paraissent bosselées, irrégulières.

Elles ne produisent jamais de gaz; Le milieu devient acide.

Sur la gélose ordinaire, couchée dans le vide, on n’obtient aucune colonie.

Sur la gélose sulfurée, couchée, et exactement privée d’air, le résultat n’est pas meilleur.

Sur la gélose sucrée, sulfurée et couchée et mise dans les mêmes conditions d’anaérobiose on voit, cinq jours après l’ensemencement, apparaître de petits points bleutés transparents qui ne s’accroîtront que peu et resteront toujours d’une petitesse extrême. En examinant ces colonies au microscope, elles montrent des bords nets et un centre acuminé.

Dans la gélatine sucrée, profonde avec bouchon de gélose, il n’y a pas de développement, cette espèce ne poussant qu’à 37».

Dans les milieux liquides, comme l’eau d’exsudation de la gélose, on voit se déposer, au bout de cinq jours, une poussière fine dans les parties déclives, mais le milieu n’est jamais troublé.

Dans le bouillon sulfuré, privé d’air, mis sous de la gélose par le procédé de Guillemot, on ne voit pas de développement appréciable.

Le bouillon sulfuré, profond, avec couche d’huile de vaseline et Jjleu de méth3dène pour s’assurer de sa privation d’oxj'gène de même que le même milieu sucré ne donnait pas de meilleurs résultats, ce qui tient probablement à ce que les conditions d’une anaérobiose complète ne sont pas absolument réalisées.

Par contre, cette condition peut être atteinte avec du lait sulfuré en tube profond, mis sous une couche d’huile de vaseline stérilisée. Le bacille ensemencé ne transforme pas le lait d’une façon appréciable.

Ce c[u’il importe de noter dans les nombreux essais que nous avons fait pour cultiver cette espèce, c’est que nous n’avons pu obtenir de résultats que dans les milieux sucrés et strictement privés d’air.

L’inoculation sous cutanée d’un centimètre cube de bouillon dans lequel on avait dilué des colonies provenant de gélose sncrée n’a donné aucune réaction locale.

L’animal a maigri, son poil s’est hérissé, mais au bout de 5 à 6 jours tout était rentré dans l’ordre.

Si on fait ingérer à une jeune souris qui commence à manger une ciüture sur gélose, on note un amaigrissèment continu, sans diarrhée appréciable et l’animal meurt au bout de 12 jours, présentant du ballonnement de ventre.

Si on répète les mêmes expériences sur une souris du même âge, en associant à ce bacille nne espèce inoffensive comme le sarcina carnea, il se prodnit un amaigrissement pins rapide, accompagné d’une diarrhée jaune légère et l’animal meurt 5 jours après.

Nous avons examiné les matières fécales recueillies chez ces animaux morts et nous avons constaté dans le second cas la urôsence dans les selles de gros cocci disposés en diplocoques ou en tétrades et des bacilles répondant à la description que nous venons de faire de Bacillns minutus.

Si nous comparons ces selles avec les matières d’une souris normale, nous ne voyons pas ces gros diplocoques et les diplobacilles fins paraissent ne pas s’y trouver, mais il est impossible d’affirmer, sans de nombreux essais de cultures, que cette espèce n’y existe pas.

Cette expérience semblerait prouver une action pathogène de cette espèce, action plus rapide dans le cas où ce bacille est associé à une autre bactérie. Mais nous ne considérons pas ce résultat comme probant, car la flore intestinale des souris est bien différente de celle de l’enfant et nous ne trouvons pas dans des conditions d’expérience rigoureusement comparables.

Ce bacille se distingue facilement de Bacillus fragilis de Veillon et Zuber, Cette espèce pousse dans la gélatine, trouble le bouillon, est pathogène en inoculation souscutanée et se décolore complètement par la méthode de Gram. Le Caducus de Hallé est une espèce plus voisine du notre, mais il est extrêmement peu vivace ; il meurt en 3 à 4 jours. Le bacillus minutus est plus petit et reste vivant dans des cultures vieilles de 15 jours. Il a donc facilement pu être étudié.

BACILI.US BiFiDus cojiMuxis (cspèce nouvellc)

Cette espèce fut décrite pour la première fois dans une communication à la Société de biologie le 2 décembre 1899, sur les rapports du Bactérium coli avec la réaction chromophile d’Escherich. Jusque-là, en effet, on considérait d’après les travaux de Schmidt, en 1892, que dans certains cas,

dans les milieux riches en graisse, par exemple, le Bactérium coli pouvait se transformer et rester coloré par la méthode de Gram. Nous avons montré qu'il n’en était rien, que jamais cette espèce ne pouvait ainsi rester colorée, et que le bacille qui, dans les selles de nourrisson au sein, donnait cette réaction, n’était pas une variété du Bactérium coli, mais une espèce bien différente, un anaérobie strict. L’erreur d’Escherich et de ses élèves provenait de ce qu’ils ne s’étaient servi que de milieux aérés et que, dans ces conditions, leurs ensemencements ne pouvaient donner que le Bactérium coli.

Le Bacillus bilidus communis est une espèce très fréquente dans les selles des nourrissons. Chez les enfants au sein, comme nous le verrous plus loin, il forme la presque totalité de la flore intestinale. Il est aussi possible de le retrouver chez les enfants nourris au biberon, mais en moindre quantité et toujours associé à d'autres espèces. On peut également l’isoler dans les diarrhées, mais avec les plus grandes difficultés à cause de la présence de bactéries faisant fermenter le glucose, acidifiant et fragmentant les milieux.

Dans les matières fécales, il se présente sous la forme de

bacilles assez minces, se terminant par des extrémités effilées pointues. Leur longueur est variable, tantôt petits, longs de 2 à 3 [J.., ils peuvent atteindre le double, mais leur longueur moyenne est de 4 ,u.. environ.

La plupart du temps, ils sont groupés en diplobacilles dont les extrémités péripliériques restent effilées, mais dont les extrémités se faisant face sont renflées. Ils sont séparés par une strie incolore visible seulement avec un fort grossissement. Ils sont placés d’une façon assez particulière. Ils sont rarement enchevêtrés, ils sont plutôt côte à côte, disposé parallèlement à eux-mêmes. Dans les selles normales, il e.st rare de noter d’autres formes, mais dans les diarrhées, on voit à côté de ces formes iiombreüses des formes plus

longues dont quelrpies-uiies se terminent en massue. Les diplobacilles sont alors réunis par une partie plus fine et quelquefois même par une boule centrale ou viennent aboutir les extrémités effdées. L’inverse peut se produire, les parties bacillaires opposées peuvent se renfler et se faire face par une portion plane. L’une peut être concave, 'autre couv'exe et s’emboîter comme une articulation.

Quand les deux corps bactériens ne sont pas sur la même ligne, qu’ils sont disposés en angle plus ou moins obtus, l’aspect général du diplobacille ressemble à un genou. Ces formes géniculées sont assez fréquentes.

On peut voir également cette espèce se bifurquer, présenter une disposition en Y; les branches de bifurcation sont tantôt de même grosseur, tantôt en massue, tantôt terminées par des boules. Ces formes en Y peuvent s’opposer soit par leur corps bacillaire, soit par leurs parties bifurquées.

Dans les cultures, ces dispositions sont encore plus curieuses.

Dans les milieux jeunes , liquides ou solides, on ne trouve guère que des bacilles isolés à extrémités effilées ou des

Fig. 3. — B. Bijidus (culture de 10 jours).

diplo-bacilles semblables, comme forme et disposition à ce que l’on trouve dans les selles.

Plus tard, ces bacilles s’allongent, se renflent en massue, ayant un aspect géniculé, tantôt ces massues sont opposées par leur pointe et on trouve souvent entre ces deux pointes une boule centrale. A côté, on peut voir des formes bifurquées. Elles se groupent de différentes façons, tantôt elles

s’opposent par leur partie divisée, tantôt par leur corps bacillaire, tantôt enfin un corps bacillaire est englobé dans la bifurcation du bacille opposé.

Dans les vieilles ciilLures, ces dispositions s’exagèrent. L.es formes en massue ou géniculée sont encore plus longues. Les formes bifurquées sont plus fréquentes. Les corps bacillaires sont rectilignes ou possèdent en leur milieu une boule. Les bifurcations se produisent soit à une de leurs extrémités, soit aux deux bouts. Les branches de divisions se terminent tantôt d’une façon régulièrement arrondie, tantôt par des boules, tantôt sont renflées eb massue. Elles peuvent môme se diviser à leur tour et donner des ramifications, du 2® degré, formant alors des figures très élégantes. On voit quelquefois au milieu d’une bifurcation, une autre branche, ce qui donne au bacille l’aspect d’uii trident.

Ces dispositions peuvent encore se compliquer par l’adjonction de bourgeons latéraux qui sont susceptibles de se diviser à leur tour. Ces bourgeons naissent tantôt au même point en forme de croix, tantôt d’une façon alternante.

A côté de ces formes, il n’est pas rare de trouver des formes vésiculeuses. Un bacille peut être transformé tout entier en une vésicule qui ne se colore qu’à ses deux pôles, tantôt en double vésicule reliée par une partie mince, tantôt une partie d’égale grosseur est reliée aune vésicule donnant l’aspect d’une raquette. La couleur ne se fixe qu’au centre et aux extrémités du bacille. Les formes bifurquées peuvent également devenir vésiculeuses et seules prennent la matière colorante les trois pointes de Y et la partie centrale avoisinant la bifurcation.

Nous avons cherché qu’elle était la cause des nombreuses modifications de cette espèce.

Dàns les cultures jeunes, le milieu reste alcalin et les colo-

nies sedéveloppontfacileinent. Petit àpetit le milieu s’épuise, devient acide , c’est alors qu’apparaissent les formesbifurquées, les formes en massue. Si nous nous servons de milieux peu nutritifs contenant peu de peptone, ou si même nous laissons des milieux bien nutritifs à la température de 20°, si en un mot nous gênons dès le début, la croissance du microbe, les formes ne s’allongent plus, elles resteront courtes et lesbifiircations seront nombreuses.

Il en est de même si nous forçons cette espèce à vivre en symbiose avec d’autres microbes. Avec certains, les formes resteront petites et bifurquées, avec d’autres, la modification peut être si profonde qu’il se produit une race naine.

Fig. 4. — B. Bifidus (cultuiede 15 jours).

Oette race présente des modifications tellement curieuses qu'il est possible de croire à une espèce différente. Les boules sont très grosses et de ces boules partent en rayonnant des corps bacillaires d’une grande finesse qui se subdivisent. A côté, on voit des formes en raquette en flamme de bougie qui au contraire des formes vésiculeuses restent bien colorées. Ces modifications ne sont que passagères car, en isolant le bacille de l’autre espèce en symbiose, il reprend ses formes longes et caractéristiques.

Si maintenant nous prenons dans nn tube de culture des colonies peu vivaces, petites, les colonies qui se produiront présenteront des formes vésiculeuses à côté d’autres formes typiques. Après 2 à 3 ensemencements, on ne voit jjlus que des formes vésiculeuses. Alors il est impossible de les réensemencer, ce sont des formes mortes.

Ainsi la longueur des bacilles, leurs bifurcations sont en rapport avec le milieu. La vésiculation est en rapport avec la vitalité de l’espèce.

Sa réaction chromophile donne également des indications au sujet de sa vitalité. Les colorants basiques ordinaires agissent sur les formes jeunes et sur les bactéries plus âgées ou moins vivaces, ils n’agissent que sur certaines parties du corps microbien. Dans les selles, dans les milieux

Fig. 5. — B. Bifidua. Formes naines.

récents, les diplobacilles sont bien colorés, snrtont an niveau de leurs parties centrales, les extrémités le sont moins. Elles peuvent môme, dans certains cas, être décolorées surtout quand on s’est servi des matières colorantes peu actives. Dans les milieux âgés, on voit que les corps bacillaires ne sont colorés qu’en certains points, le centre, l’extrémité en voie de bifurcation et les terminaisons de ces

bifurcations. Les formes vésiculeuses ne prennent la couleur qu’en leur point rétréci. Enfin, dans une préparation provenant d’une culture pure, on voit presque toujours à côté des formes bien colorées, d’autres à moitié, d’autres complètement décolorées.

La réaction de Gram montre encore avec pins de netteté ces différenciations. Les formes jeunes restent très bien colorées, les formes moins vivaces le sont moins. Les bifurcations, les points nodaux gardent toujours la couleür. Et si, dans une préparation de culture pure, nous appliquons après la méthode de Gram un colorant de contraste, comme le fuschine alcooliqe, nous retrouvons toutes les particularitée vues par Escherich, c’est-à-dire des bacilles colorés en bleu, d’autres en rouge, d’autres moitié rouges, moitié bleues. Dans une préparation de selles qui ne semble contenir que cette espèce, comme chez l’enfant au sein, cette réaction chromophile est la même.

Beaucoup d’anaérobies ont, il est vrai, une réaction analogue, mais elle est rarement marquée à ce point.

Ce bacille est immobile. Une culture mise à 60“ pendant un quart ddieure est tuée. 11 ne semble donc pas donner de spores.

Sa vitalité est assez considéralde, il à pu être repiqué après trois semaines.

C’est uii anaérobie strict. Il pousse surtout à 37“, mais peut également pousser très lentement à 20“.

Dans la gélose sucrée profonde, trois jours après l’ensemencement, on voit apparaître de fines colonies régulières ovoïdes de coloration blanchâtre et s’arrêtant très nettement à trois centimètres delà surface en formant un anneau.

Cet anneau, vu au microscope, se montre formé de petites colonies égales entre elles, mais qui cinq jours après

rcnsemencemeiit commencent à se différencier. Les unes grossissent, deviennent lenticulaires, les autres restent petites, ovoïdes. Dans le reste du tube, ces colouies se développent d'autant mieux qu’elles sont bien séparées. Mais leur croissance est, comme à l’anneau irrégulier, certaines grossissent plus que d’autres. De nombreux examens et réensemencements nous ont donné la preuve qu’il s’agissait d’une seule et même espèce. Les petites colonies ont simplement des formes plus petites et plus bifurquées. Repiquées, elles redonnent des colonies inégales.

Les colonies bien développées sont lenticulaires, régulières, à bords nets. Sur une des faces de la lentille, on voit fréquemment un petit prolongement.

Elles peuvent quelquefois avoir la forme d’une lentille plan-convexe.

Leur diamètre maximum peut atteindre 4 millim. En moyenne, il ne dépasse guère 2 millim. Leur coloration est blanchâtre et les bords sont nets régulièrement arrondis. 11 ne se produit jamais de gaz daus les cultures.

La forme des colonies varie beaucoup quand elles sont impures. En symbiose avec le Bactérium Coli, ce bacille donne des colonies plates cà centre déprimé, à bords épais, de coloration blanc grisâtre. Avec le cocco-bacillus perfœ tens, les colouies sont très grosses, lobulées, marrouées, bosselées. Elles peuvent atteindre 5 à 6 millim. Avec le streptococcus iutestinalis, ces colonies sont également bosselées. Avec l’acidophilus, elles sont irrégulières et hérissées de piquants.

Quelquefois même, ces colonies impures peuvent pousser dans la zone aérée de la gélose, ce qui n’arrive jamais avec une culture pure.

Daus la gélose sucrée profonde^ laissée à la température

du laboratoire ou mise à l'étuve à 20", il pousse très lentement, donne des colonies petites, peu vivaces, contenant de nombreuses formes vésiculeuses.

Dans la gélose ordinaire profonde à 37° ou à 20°, il ne pousse pas.

Dans la gélose sulfurée non sucrée profonde, dans la gélose acide, il est impossible d’obtenir de cultures.

Dans la gélose glucosée à laquelle on ajoute J /20 de bile

Fig. 6. — B. Dijidus. Formes vésiculeuses.

stérilisée, puis alcalinisée, il donne des colonies fines, apparaissant lentement et peu vivaces.

Dans la gélose sucrée, coulée sur de la caséine, alcalinisée ou non, il ne pousse pas.

Dans la gélatine profonde glucosée avec bouchon de gélose, nous n’avons, malgré des essais répétés, pu obtenir de cultures.

Dans le bouillon sucré, rigoureusement privé d’air, il pousse abondamment.

Au bout de 3 jours, le bouillon est trouble. Il se dépose au fond du vase une masse floconneuse, facilement dissociable, qui envahit tout le tube. Le liquide est trouble, opaque, et

au bout de 8 à 10 jours, il se dépose une masse filante, épaisse, muqueuse, mais le milieu ne redevient jamais limpide.

Dans le lait privé d’oxygène il pousse Lien, sans coaguler le milieu. Sur les milieux divers en surface, il nous a toujours été imi^ossible d’obtenir de cültures. 11 est très sensible à l’action de l’oxygène et dans l’étuve de Wiessnegg ou le vide était poussé jusqu’à 60 millim. de mercure, il n’a jamais pu cultiver.

En outre, son développement ne se fait bien que sur des milieux sucrés. Il agit sur le glucose en produisant un acide qui imprègne le milieu 8 jours après l’ensemencement. Il agit également sur la peptone, car si l’on prend une culture vivace sur gélose, qu’on la porte à 80” pour tuer le bacille, iniis qu’on l’alcalinise, les différentes espèces que l’on peut réensemenser ne poussent pas. Le milieu semble épuisé.

Inoculé sous la peau d’une souris, il ne produit aucun accident.

Chez le cobaye on peut mettre, sous la peau ou dans le péritoine, une culture entière dans la gélose sucrée, l’animal n’en ressent aucun trouble.

Il semble pourtant augmenter la virulence d’une espèce peu pathogène comme le staphylocoque blanc. Si on inocule sous la peau ce dernier microbe seule, la souris meurt en 10 à 15 jours, si on ajoute du Bifîdus, l’animal meurt au bout de 3 jours.

Cette espèce n’est donc pas pathogène.

Parmi les espèces anaérobies connues, nous ne devons le comparer qu’au Bacillus Ramosus de Veillon et Zuber. Le bacillus furcosus des mêmes auteurs est bien différent, il ne prend pas le Gram, ne donne que de très fines colonies. Le Ramosus par contre, ne pousse pas sur la gélatine.

trouble le bouillon et donne quelquéfois des formes bifnr quées. Mais il diffère complètement du Bifidus. Cette dernière espèce est plus grosse que le Ramosus, elle donne non pas des formes ramifiées, mais bifurquées, elle prend le Gram avec des caractères un peu différents du Bacille de Veillon et Zuber qui le prend d’une façon uniforme et régulière. 11 pousse à 20" et donne dans la gélose sucrée des colonies bien plus grosses lenticulaires régulières. Il ne donne jamais de gaz et ne donne pas d’abcès sous-cutané au cobaye. Nous avons pu du reste comparer fréquemment les deux espèces et les différences morphologiques et biologiques se sont toujours montrées constantes.

Bien plus, ces deux espèces semblent ne pouvoir vivre côte à côte. Dans les appendices malades, Veillon et Zuber n’ont jamais pu isoler le Bifidus. Au contraire, récemment, ces deux auteurs ont pu, dans des appendices sains, isoler cette dernière espèce, mais dans ces cas, ils ne trouvaient ni le Furcosus, ni le Ramosus.

Au point de vue -du rang qu’occupe cette espèce dans la la classification générale des bactéries, nous pensons qu’elle doit être mise dans le genre Bacille. Èlle se rapproche des Streptothrix par des bifurquations régulières, ses formes en massue. Elle en diffère cependant en ce sens, que ces divisions ne sont jamais comparables à celle de l’actinomycose et qu’en outre elle ne donne pas de spores. Elle n’en a du reste, aucune des propriétés biologiques. D’autre part, certaines espèces considérées comme bacilles, tel que le bacille de la tuberculose et le bacille de la diphtérie, donnent des formes comparables.

Bacillus agidophilus. (Ernest Moro.)

Ernest Moro publia tout récemment, le 21 janvier 1900, le résultat de recherches faites sur les bactéries qui pren-

lient le Gram dans les selles des nourrissons. Il ensemence dans un bouillon au moult de bière, une émulsion venant d’une selle d’un enfant nourri au sein. Il obtient alors des bacilles semblables à ceux que l’on a vu dans les matières fécales. En mettant le sédiment du bouillon, sur de l’agar au moult de bière, il obtient de petites colonies irrégulières avec des rejetons. Les préparations montrent.des filaments longs, entortillés, en écheveaux où cnnatte. Ils se développent bien à 20 ou à 37”, mais ou ne put obtenir leur développement aéroliie que sur de l’agar au moult de bière. Sur le bouillon, ils forment un sédiment nuageux. Le lait est un moins bon milieu de culture, il devient acide et une coagulation diffuse se produit. Au moyen de cette métbode, cet auteur a également pu isoler ce bacille des selles d’enfant nourri au lait de vache .

Il différencie ensuite cette bactérie du Bacillus bifldus communis.

Mais comme cette dernière espèce prend le Gram d’une façon un peu irrégulière, en ce sens qu’elle peut le prendre par place et qu’à côté des bâtonnets très bien colorés qui sont les i)lus nombreux, il s’en trouve d’autres décolorés eu totalité ou en partie, il éprouve quelque doute sur l’identilication de ce Bifidus avec le diplobacille coloré au Gram, caractéristique, des selles des enfants au sein.

Or, les méthodes que j’ai employées me permettent d’isoler aussi facilement l’uue ou l’autre de ces espèces et au moment de la communication de Moro je possédais déjà le bacille qu’il décrivait. Jamais je n'ai pu trouver chez un enfant nourri exclusivement au sein et bien portant le Bacillus acidopbilus et au contraire, j’ai toujours isolé le Bifldus en grand nombre à côté de rares coli et de quelque Streptocoques. Je dois donc en conclure que le Bifldus

est bien l’espèce que l’on rencontre presque exclusivement clans ces sortes de selles. Elle en a du reste tous les caractères morphologiques.

On trouve le Bacille décrit par Moro dans les selles d’enfants à l’alimentation mixte, au lait stérilisé et surtout au lait ordinaire. 11 existe également clans les diarrhées.

Cette espèce semble se présenter dans les selles sous la forme d’un gros bacille trapus à extrémités arrondies, de longueur très variable. Tantôt court, d’une dimension de 4 à 5 [A environ, il peut atteindre une longueur trois fois plus grande. La plupart du temps il est rigide, il est assez rarement infléchi. Sa largeur est régulière, il ne présente aucune bosselure, ni aucun étranglement. Il est toujours disséminé dans la préparation.

Sur les milieux aérés, il prend une forme coccobacillaire rappelant le Bactérium Coli mais plus gros et plus large. Il peut se grouper par deux ou trois articles, rarement plus ; les extrémités de chacun de ces articles sont alors carrées. A côté de ces formes on peut voir des formes plus longues, légèrement infléchies. Dans les milieux licjuicles, les bacilles sont la plupart du temps longs ou plus courts, disposés en file de 2, 3 ou 4 articles. Dans les milieux privés d’air, les bâtonnets sont beaucoup plus longs, infléchis ou sinueux. Il existe cependant encore cjuelques formes courtes. Dans les vieilles cultures anaérobies, ou quand cette espèce a été maintenue pendant quelques passages en milieux privés d’air, les bacilles prennent alors des formes très allongées. Ce sont dos lîlaments tantôt droits, légèrement incurvés, tantôt ondulés, plissés, qui s’entrecroisent de toute façon. Beaucoup dépassent môme le champ du microscope. Leurs extrémités se terminent soit en spatules, en formes renflées, comme s’ils produisaient une spore. C’est le cas pour les

formes droites ou peu incurvées de largeur égale. Mais les formes onduleuses se terminent par de très fines et très longues pointes qui sont également flexeuses. On ne trouve jamais de bifurcations ou de ramifications. Dans les cultures impures, on symbiose avec un streptocoque ou avec le bacillus exilis on voit des formes petites, droites ou sinueuses. Ces dernières sont alors enroulées, tordues sur elles-mêmes.

Ce bacille est immobile. 11 ne semble pas donner de spores, car si l’on met une de ces cultures à 80“ pendant un quart d’heure et qu’on la remet à l’étuve, il ne produit plus de nouvelles colonies.

Sa vitalité est considérable, nous avons pu réensemencer des colonies vieilles de 2 mois.

Il se colore bien par les colorants basiques ordinaires. Parfois même certains points du filament restent décolorés. Il reste très bien coloré par la méthode de Gram et d’une façon uniforme.

Il pousse également bien à 20" et à 37".

Il semble être un intei’inédiaire entre les espèces anaérobies facultatives et les anaérobies stricts. Il ne pousse jamais bien franchement comme les premières sur les milieux aérés et ne se conduit pas dans les milieux profonds comme un anaérobie vrai.

Nous avons même trouvé une race qu’il a été impossible d’acclimater sur des milieux aérés et qui n’a jamais présenté les caractères d’un anaérobie strict.

Sur la gélose ordinaire couchée, 58 heures après l’ensemencement, 011 voit apparaître des petits points fins, transparents, qui deviennent un peu plus opaques, blanchâtres. Vues au microscope, ces colonies montraient un centre acumiiié, entouré d’une zone granuleuse et ayant des bords finement découpés, irréguliers. L’eau de la gélose présen-

tait, 24 Heures après reiisemcncement, un trouble léger avec dépôt sablonneux. Certaines races ne poussent pas sur ce milieu.

Sur la gélose Weirtheim, les colonies apparaissent 48 heures après. Le développement s’arrête 5 à 6 jours après reusemcncemont. Elles émettent fréquemment des prolongements, ramillées dans la gélose que l’on peut voir au microscope.

Sur gélose sucrée couchée, le développement est plus abondant, les colonies plus grosses et plus blanches. L’eau de la gélose est uniformément trouble.

Dans la gélose sucrée profonde, les colonies sont caractéristiques. 24 heures après rcnsemencenient, des petites colonies se montrent dans le milieu jusqu’à 5 millim. de la périphérie, rarement plus haut. Les colonies grossissent mais d’une façon spéciale. Celles de la profondeur augmentent graduellement de volume et peuvent atteindre 3 millim. quand elles sont bien séparées. Celles du milieu du tube sont un peu moins grosses et celles qui sont dans la zone aérée restent petites, stationnaires. Leur forme est d’abord marronée, lobulée, irrégulière puis, quelques jours après présentent des prolongements, elles paraissent hérissées de piquants, puis ces prolongements se multiplient, se ramifient, elles ressemblent à un paquet de cheveux ou à un paquet de mousse. Leur coloration est jaune-grisàtre. Elles ne produisent jamais de gaz.

Ce bacille pousse également dans la gélose ordinaire profonde et dans la gélose acide profonde, mais son développement n’est jamais comparable à celui qu’il prend dans la gélose sucrée. Dans la gélose à la caséine acide ou alcaline, nous n’avons pas eu de résultats appréciables.

Dans le bouillon ordinaire ou sucré, il pousse mal. Le

milieu reste clair, il se fait un dépôt insiguifiaiit qui s’élève en vrille quand ou agite le milieu.

Dans le lait, sou développement est peu considérable. Le milieu devient légèrement acide au bout de 5 à 6 jours et no se coagule qu’au bout de 10 à 15 jours. Au bout de 2 mois, il était acide et le caillot n’était pas rétracté.

Malgré de nombreux essais, nous n’avons jamais obtenu de cultures sur pomme de terre, simple ou glycérinée.

Il ne pousse pas sur la gélatine sucrée inclinée. Dans la gélatine sucrée profonde, il pousse très lentement et très mal. On peut voir, au bout de 5 à 6 jours, des colonies fines, discrètes, bosselées, irrégulières.

Il est à remarquer que cette espèce peut avoir des variétés plus anaérobies unes que les autres, nous avons eu, comme nous l’avons dit, des races ne poussant que dans la profondeur de la gélose et donnant des anneaux dans la zone aérée.

La plupart ont pu être transformées, devenir des espèces poussant rapidement sur la gélose ordinaire, mais certaines ont gardé leur caractère.

Ce bacille n’est pas pathogène pour la souris et' le cobaye.

Les inoculations sous-cutanées ont toujours été sans résultats. Elles ont été faites avec des cultures en bouillon, dos dilutions provenant de culture en gélose, enfin avec des cultures sur ce dernier milieu.

Les animaux inoculés n’ont présenté aucun symptôme.

Cette espèce est bien différente des espèces que nous venons d’étudier autant par sa morphologie que par • ses cultures. Elle est facilement reconnaissable dans les selles, grüce à son aspect de bâtonnet large et trapu.

La description que nous venons d’on donner est à peu

près conforme à celle d'Ernest Moro. Quoique nous ayons trouvé que les milieux sucrés lui conviennent mieux que les milieux acides, nous lui conserverons le nom que lui a donné l’auteur qui en a publié la première description.

Bacillus exilis (espèce nouvelle) '

Nous aA'ons désigné sous le nom de Bacillus exilis une petite espèce grêle que l’on rencontre fréquemment dans les selles d’enfants soumis à l’alimentation mixte, au lait stérilisé ou au lait ordinaire.

On le rencontre également . dans les diarrhées.

Elle est assez difficile à isoler au moyen des procédés des plaques, des boîtes de Pétri, ou des tubes de gélose inclinée. On l’obtient au contraire facilement par les méthodes que nous avons employées.

Dans les selles, il semble se présenter sous la forme de bâtonnets minces, grêles, toujours rigides, isolés, groupés par paires ou disposés bout à bout en série de 4 à 5 éléments très courts.

Dans les milieux liquides ou dans les milieux jeunes, ce bacille toujours très 1011100, isolé, est le plus souvent disposé en chaîne de 4 à 5 éléments extrêmement courts.

Il est, la plupart du temps, rigide ou à peine incurvé. Ces éléments faiblement infléchis peuvent se disposer alternativement de telle façon qu’un bâtonnet convexe dans un sens, soit bout à bout avec deux autres éléments concaves, dans le même sens, disposition, qui donne à la chaîne ainsi formée, une apparence flexueuse. Dans les cultures plus âgées, on peut noter des formes longues. Les extrémités sont toujours carrées, régulières, jamais effilées, les formes longues ne dépassent guère dix â douze, elles peuvent être légèrement incurvées, mais ne sontjamais plissées, pelotouliçes, recourbées sur elles-mêntes,

Il se colore facilement par la fuschine diluée, le violet de gentiane, le thiouine, etc. Il prend bien la couleur par la méthode de Gram et d’une façon uniforme.

Ce bacille est immobile. Il ne donne pas de spores. Sa vitalité est peu considérable. On ne peut le réensemencer après 10 à 15 jours. Il pousse à 20" et surtout à 37". Il pousse aussi bien sur les milieux aérés que sur les milieux privés d’air.

Sur la gélose ordinaire couchée, 24 heures après ensemencement, l’eau exsudée de la gélose est trouble. Au bout de 48 heures, apparaissent de petits points très fins bleutés. Ces colonies grossissent pendant les deux jours qui suivent, deviennent moins transparentes, blanches, puis se décolorent et deviennent invisibles sur de vieilles cultures. Leur grosseur maxima ne dépasse guère la grosseur d’une pointe d’aiguille. Vues au microscope, elles paraissent d’égale épaisseur et se terminent par des bords nets bien arrondis.

Sur la gélose sucrée, le développement est plus rapide et le diamètre des colonies peut atteindre un demi-millimètre an plus. Elles apparaissent au bout de 24 heures, mais ne sont bien AÛsibles qu’au bout de 48 heures.

Dans le bouillon ordinaire, la culture se fait lentement, le milieu reste clair, il se forme un dépôt fdamenteux blanchâtre.

Le lait se prend lentement, au bout de 8 à 10 jours, en une masse gélatineuse. Le coagulum ne se rétracte pas.

Dans la gélatine en surface on profonde, ordinaire ou sucrée, on n’obtient pas de cultures apparentes.

Il on est de môme pour la pomme de terre ordinaire ou glycérinée.

Dans la gélose profonde sucrée, il pousse bien, 24 heures

après l’ensemencement, on voit de petites colonies occupant toute la hauteur du tube. Ces colonies sont de formes régulières, ovalaires, à bords nets.

Elles restent toujours petites, même quand elles sont bien séparées.

Leur coloration est Ijlanchàtre. Leur forme reste la même, cependant, près de la surface de la gélose, il n’est pas rare de voir dos colonies bosselées. Elles ne produisent pas de gaz.

Cette e.spèce pousse donc surtout sur les milieux .sucrés. Elle ne pousse pas dans les milieux acides.

Elle n’est pas pathogène pour la souris, même à la dose de 2 centimètres cubes de bouillon de 48 heures.

Ce bacille grêle, nous semble bien différent du bacillus acidophilus. Cette dernière bactérie est beaucoup plus grosse, plus large, plus trapue. Elle donne à la fois des formes coccobacilles et des formes longues enchevêtrées bien caractéristi![ues. Ce qui n’existe jamais pour le bacillus exilis, qui conserve sa forme gracile toujours bacillaire, même quand il dispose en séries d’articles courts. Il est donc, contrairement à la première espèce, très peu polymorphe.

Dans les cultures, il se moidre plus facilement aérobie et donne dans la gélose profonde, de colonies régulières et bien plus petites, jamais en paquets de cheveux ou hérissées de piquants. 11 ne pousse pas dans les milieux acides et coagule plus rapidement le lait.

Nous avons donc cru, qu’il était nécessidre de le décrire comme une esjîèce bien distincte.

Levuiîe blanche (Tonda de Pasteur)

Cette espèce semble très rare, dans les selles nonnales ou pathologiqties.

Nous ne l’avons rencontrée qu’une fois sur vingt-quatre examens complets. Le cas ou elle été isolée, concernait un enfant de six jours et demi, alimenté au biberon ou avec du lait stérilisé (ol)s. 28). Les matières fécales avaient été recueillies, avec les précautions ordinaires.

En outre, toutes les selles ont été recueillies, depuis la naissance jusqu'au sixième jour, et nous avons pu constater qu'il existait, dans les préparations des formes ovoïdes analogues à celles que nous avons obtenues en culture.

Cotte espèce, se présente dans les milieux liquides ou solides, sous la forme do corps sphériques réguliers 2 à 4 a de diamètre ou de corps ovo'ïdes. Ils se présentent isolés ou en amas. Dans ce. dernier cas, ils deviennent polygonaux par tassement réciproques.

Fréquemment, les corps ovo'ïdes, possèdent à une de leurs extrémités, des corjîuscules. Le modo de reproduction semble en effet se faire par bourgeonnement.

Ces corps se colorent d'une façon intensive par les colorants basiques ordinaires. Ils restent colorés par la méthode de Gram.

Ils paraissent immobiles et sont tués dans une culture portée à 63", pendant un quart d'heure. Us poussent à 37" et à 20".

Sur la gélose ordinaire, 24 heures après rensemencenient, apparaissent de petites colonies blanches, opaques, humides, luisantes, qui peuvent former, par confluence une nappe de même couleur et de même épaisseur.

Sur la gélose ordinaire, cette espèce forme des colonies non liquélîantes, de même aspect que sur la gélose.

Sur la pomme de terre, elle forme des colonies, grises, sèches, assez minces, et laissant la pomme de terre blanche. Quand ce milieu dessèche, les colonies apparaissent comme des écailles de plâtre sec,

Le bouillon se trouble uniformément, dans les 24 heures qui suivent rensemencement. Il se forme un dépôt blanc muqueux filant.

Le lait devient lentement acide et se coagule, au bout do 15 jours, sans rétraction du caillot.

Dans la gélose sucrée profonde, les colonies se forment surtout dans la zone aérée. Elles sont blanches, arrondies, régulières. Il ne se forme pas de gaz.

En résumé, nous avons isolé dans les selles normales ou pathologiques, IG espèces bactériennes distinctes. Parmi ces espèces, nous en trouvons qui ont été décrites par certains auteurs, ce sont : le staphylocoque blanc, le streptocoque de Vintestin (Hirsch-Libbmann), 3 variétés de Sarcines, la sarcina candida (Reinke), la sarcina minuta (de Bar}’), la sarcina carnea (Grüber), l’enterocoque (Escherich- Thiercelin), le bactérium Coli, variété commune (Escherich), le bactérium Coli typhimorphe (Hermann et Wurlz), le bactérium lactis ae}'ogfenes(Escherich), le bacillus acidophilus (Ernest Moro), mais nous en avons trouvé d’autres qui, croyons-nous n’ont pas été décrites jusqu’ici, le diplococcus griseus liquefaciens, le streptocoque décoloré parle Gram (Cottet et H. l’issier), le cocco-bacillus anaérobius perfœtens, le bacillus anaérobius minutas, le bacillus bifidus communis, le bacillus exilis.

Cependant, nous n’avons pas isolé toutes les espèces et souvent au cours des examens directs nous avons noté des formes assez caractéristiques que nous n’avions pu retrouver dans les tubes de culture. De ce nombre se trouve le bacille de Bienstok qui fut comme nous l’avons vu décrit comme aérobie, puis comme anaérobie sous le nom de pseudo-tétanique par Tavel, puis enfin sous le nom de putrificus Coli

par Bienstok. Cette bactérie se trouve surtout dans le méconium à. la période d’infection croissante. A côté de cette espèce, on note également une grosse bactérie, assez courte, large à espace médian renflé contenant un corpuscule réfringent, brillant, qui semble être une spore. Ontrouve également, dans le méconium des corps ovoïdes à centre décoloré, de longs bacilles en fuseau ressemblant à une espèce qui semble très commune dans les selles de la souris.

Dans un cas de diarrhée chez un enfant au sein nous avons également rencontré de gros filaments mycéliens formés d’articles bien séparés qui prennent la coloration par la méthode de Gram.

Ils portent à une de leur extrémité un corps arrondi prenant mal la couleur qui ressemble à une spore.

Dans des cas de choléra infantile enfin, nous avons vu de très petits bacilles fins, un peu flexueux, décolorés par la méthode de Gram, qu’il nous a été impossible d’obtenir en cultures. Il en est de même des fins spirochètes assez semblables à ceux de la bouche, que l’on trouve dans les diarrhées chroniques et qui ont été bien vus par Escherich et Booker.

Nous devrons enfin mentionner la longue liste des espèces trouvées par les auteurs qui se sont occupés delà flore normale et pathologique. Certaines qui ont été rencontrées dans des diarrhées, sont des variétés rares et ne doivent se trouver que dans des épidémies déterminées, ce sont: le Bacillus sporogenes de Klein, le pyocyanique, le Bacille de Finkelstein, les Amibes et les monocercomonas d’Epstein, le Bacille du lait rouge de Hueppe et Grotenfeld, le Thyrothrix et le Bacille de la diarrhée verte de Lesage. La plupart cependant sont donnés comme faisant partie de la flore normale, et

dovraiont être des espèces fréquentes, ce sont : le snbtilis, le mesentericus, le fluorescent vert liquéfiant, le fluorescent vert, non liquéfiant, le Bacille jaune liquéfiant, le Streptococcus Coli gracilis, le Streptococcus Coli brevis, le Stapliylocoque jaune, le Bacille en voile (Schleier Bacillus), le Streptocoque pyogene, le Porcellancoccus. Les levures rouges, la levure encapsulée, le Monil-ia candida. Le Bacillus pyogenes liquefaciens, lu Microccoccus cœruleus albus, la Sarcina lutea, la Sarcina ventriculi, le Bacillus fœcalis alcaligenes, le Bacille de Scliild et le Proteusde Hauser. Malgré de minutieuses recherches nous n'avons pas rencontré ces espèces.

En ce qui concerne le Proteus nos recherches concordent donc avec celles de Feltz. Ce dernier auteur a, duns un remarquable travail, montré que chez l’homme adulte sain et même chez des individus atteints de troubles intestinaux cette espèce est très rare. Dans 8 cas de diarrhée il ne l’a trouvé qu’une fois. Cette bactérie est donc loin d’être une espèce commune. De notre côté, chez le nourrisson, nous n’avons jamais vu sur 24 cas, une espèce présentant les caractères des Proteus vulgaris , mirabilis ou Zenkeri qu’avait décrit Hauser.