II. — Stroctore du protoplasme cellulaire
J'en arrive maintenant à la texture du corps cellulaire, & celle du noyau et aux rapports qui paraissent rattacher l'une à l'autre les deux parties constitutives de la cellule.
J'ai distingué, dans le corps cellulaire de l'œuf, 1* un réseau auquel se rattache une couche limitante externe et 2^ des éléments remplissant, soit les mailles du réseau, soit, ce qui revient probablement au même, de petites lacunes creusées dans la substance réticulée ou dans celle qui constitue la couche limitante. Ces éléments, qui n'ont qu'une existence éphémère, sont les sphères hyalines, les gouttelettes homogènes et les corpuscules réfringents. Le réseau, je Tai appelé le réticulum protoplasmique ; il est formé par une substance à laquelle je crois devoir réserver le nom de protoplasme.
Les éléments figurés qui remplissent les vacuoles creusées dans ce protoplasme forment ensemble le " deutoplasme. „ Dans mon opinion les éléments deutoplasmiques constituent des produits de l'activité formative de l'ovule primordial ; ils se forment secondairement dans le protoplasme qui, au début, constitue à lui seul le corps cellulaire. A ce point de vue ces
éléments sont comparables à l'ensemble des liquides qui s'accumulent dans les vacuoles des cellules végétales. Strasburger applique à ces liquides, le nom de CytochyUma. On peut encore comparer ces produits secondaires du protoplasme aux substances gélatineuses qui remplissent les mailles du réseau protoplasmique des cellules de la notocorde des vertébrés, des cellules axiales des tentacules des hydroïdes, ou de la cellule axiale d'un Dicyema; aux substances sécrétées qui s'accumulent dans beaucoup de cellules glandulaires, à la graisse qui se dépose dans les cellules adipeuses, etc. A la même catégorie d'éléments se rattache probablement le corps réfringent des zoospermes.
H ressort clairement de l'étude que j'ai faite tant du zoosperme que de l'œuf, aux différents moments de son évolution, que le protoplasme présente lui-même une structure : il se constitue de fibrilles moniliformes et d'une substance interposée entre ces fibrilles.
A première vue l'on ne distingue, dans la substance réticulée ou dans la couche limitante de l'œuf, dans l'hémisphère céphalique et dans la couche superficielle de la queue du zoosperme, que des granules punctiformes plus ou moins brillants, souvent allignés en séries régulières. Handstein a donné à des éléments semblables, reconnus par lui dans le cytoplasme des cellules végétales, le nom de microsomes (Mikrosomaia, Mkrosofnen).M.sis si l'on examine soit le corps d'un zoosperme, soit la substance protoplasmique de l'œuf, au moyen des objectifs homogènes, en s'aidant d'un bon éclairage, on ne tarde pas à constater que ces microsomes sont reliés entre eux par des fibrilles d'une extrême ténuité. De là un treillis souvent très serré que je désigne sous le nom de treillis ou de treillage jyrotoplasmique et quil impoi-te de distinguer des réticulations du protoplasme. Celles-ci sont dues à la présence de grands espaces dans la substance treillissée. Les microsomes sont les nœuds du treillis ; ces nœuds ne sont pas simplements les lieux d'entre-croisement ou de soudure des fibrilles, mais bien, comme l'indique le nom que Handstein leur a donné, de
petits amas de substance^ dont le diamètre est considérable relativement à celui des fibrilles qui les relient entre eux. Les mailles du treillis sont occupées par une substance hyaline, pour laquelle j'adopte le nom de substance interfibriUaire. Le nom de hycdoplasma que Handstein a proposé peut également lui être appliqué.
Nos recherches nous ont montré qu'il existe, dans un même zoosperme, des différences notables dans l'aspect du treillis suivant la région du corps que l'on examine : le volume des grains, leur réfringence, la distance qui les sépare les uns des autres, enfin leur arrangement varient, suivant qu'on examine la couche périnucléaire, la couche corticale de Thémisphère céphalique ou le protoplasme de la queue. Parfois les mailles du treillis ont une forme géométrique régulière : dans l'hémisphère céphalique on distingue une disposition à la fois radiaire et concentrique des grains ; dans la queue leur groupement donne lieu à une double striation à la fois longitudinale et transversale.
On constate aussi, d'un zoosperme à l'autre, des différences notables dans les caractères du treillis, quand on compare une partie du corps protoplasmique d'un zoosperme à la partie homologue d'un autre spermatozoïde : le volume des microsomes, leur réfringence, leur écartement sont loin d'être constants ; la direction des stries auxquelles ils donnent lieu est variable, et ces stries sont plus ou moins apparentes suivant l'état des fibrilles. Parfois même on ne peut distinguer ni grains ni fibrilles et le protoplasme parait homogène. Ces différences ne peuvent être attribuées au mode de préparation employé : on les observe quand on compare entre eux des zoospermes d'une même préparation, traités par conséquent de la même manière ; on les constate tout aussi bien sur les éléments frais, où tous les détails de structure que je signale sont parfaitement visibles.
Il est donc éminemment probable que des variations se produisent, d'un moment à Tautre, dans le caractère du treillage ; et peut-être sont-elles en rapport avec l'état de contraction.
RECnERCHES SUR LÀ FÉCONDATION. 359
Dans les zoospermes, chez lesquels la portion céphalique présente une forme hémisphérique régulière, les microsomes sont le plus souvent allignés en séries radiées et concentriques; les mailles du treillis doivent avoir alors la forme de petits cubes, de prismes ou plus exactement de pyramides à quatre feules et à sommet largement tronqué. Les microsomes occupent les angles, les fibrilles unissantes les cotés de ces solides. Mais il est probable que la forme et l'étendue de ces mailles sont sujettes à variations; car dans certains cas on ne distingue ni striation radiaire, ni striation concentrique; les microsomes paraissent disséminés sans ordre dans l'hyaloplasme. Comme le nombre et le volume de ces grains varient du reste considérablement, il mè paraît probable que deux ou plusieurs microsomes, primitivement distincts, peuvent se confondre en un seul et que la substance des fibrilles qui relient entre eux ces microsomes, participe à la genèse du microsome résultant; enfin, qu'un microsome peut aussi se dédoubler en deux ou plusieurs grains à la suite d'une sorte d'étranglement et sans que jamais une discontinuité réelle puisse s'établir. Nous connaissons de ces concisions et de ces dédoublements alternatifs de microsomes dans la fibre musculaire striée; les fibrilles moniliformes ont une toute autre forme suivant qu'elles sont à l'état d'extension ou à l'état de contraction (pi. XI, flg. 30 et 81).
n est impossible de se rendre compte, sans cette hypothèse, des différences que l'on constate dans l'aspect du protoplasme tantôt finement punctué (pi. XI, fig. 14), tantôt pourvu de microsomes relativement très gros (pi. XI, fig. 15, 16, et 17).
L'hypothèse de la contractilité du treillis, résultant de cette i faculté que possèdent les grains de se rapprocher et même de i se fusionner, rend compte aussi des changements continuels de forme de l'hémisplière céphalique, pendant les mouvements amœboïdes qu'il exécute (pi. XI, fig. 22 à 25). Des chan- j gements dans la forme et l'étendue des mailles du treillis, | des extensions et des réductions doivent être la conséquence i
nécessaire des fusions et des dédoublements des microsomes, \
EDOl'AHD VAN BENEDEN.
de leurs i-approctiement^ ou (le leurs écartemente. Ceux-<à ne peuvent se produire saus des allongements ou des raccoHPciasements de tiliriUes. J'ai donné dans le coui-s de ce travail plusieurs preuves manifestes de la contractilité des Ôbi'iiles monilîformes du treillis protoplasmique.
La substance protoplasmique de l'œuf présente au fond même stnictui'e que celle des zoospermes; seulement elle rendue moins apparente par suite de la présence des élém) deutoplasmiques du vitellus.
Les fibrilles plus apparentes qui donnent an protoplasme'^ sa striation radiaire, celles qui entrent dans la composition de la figui'e ypsiliforme et de la seconde figure pseuâokaryukinètique, les rayons étoiles des astei-s ne sont que des difi'érenciations locales du treiUia protoplasmique. Chaque fois que, suivant une direction donnée, les micrusomes augmentent de volume, les fibrilles unissantes deviennent aussi plus épaisses. 11 en résulte l'apparition d'un filament plus distinct, qui pourra devenii' visible à de faibles grossissements et semblera constituer une foimatioD morphologique spéciale, alors qn'il n'est en réalité qu'un accident du treillis. Plusieurs filaments semblables, réunis en un faisceau unique, sont doués d'i contractilité suffisante pour déformer un corps mou auquel se fixent (pi. XV, fig. 3). Quand de semblables filaments sp] raissent radiairemeut autour d'un centre, ils donnent lien à I formation d'une étoile. C'est ce qui se produit loi-s mation des figures pseudokaryokinétiques ; les asters pol des cellules en voie de division, auxquels se rattachent Itê éléments du fuseau achromatique, doivent être expliqués comme étant le résultat de l'arrangement régulier du treillage protoplasmique autour de certains points. Peut-èti-e consiste' dans une orientation à la fuis radiaire et conceutriqae microsomes antoui- des centres d'attraction.
J'ai eu fréquemment l'occasion de signaler, dans le cours de ce travail, des faits établissant l'identité essentielle des fibrilles moniliformes et des fibrilles homogènes du protoplasme. Bans mon opiidou, toute fibrille appai'aissaut au microscope comi
iVOEI
une simple ligne dépoorvne de toute varicosité s'est formée aux dépens d'une fibrille moniliforme formée de microsomes rattachés les uns aux autres par des segments de fibrilles unissantes. On trouve toutes les transitions possibles entre les unes et les autres; tout aster jeune est formé de fibrilles moniliformes ; plus i tard seulement la substance des microsomes parait se répandre uniformément le long du filament qui devient alors homogène. Ces filaments peuvent eux mêmes se fondre transversalement | entre eux, de façon à donner lieu à de gros cordons homogènes | (pi. XVI, flg. 9 et 11). Puis ces filaments et ces cordons ' peuvent se résoudre de nouveau en microsomes et en fibrilles, de &çon à constituer un nouveau treillis. H ne reste pour ainsi dire rien des figures pseudokaryokinétiques au moment de l'élimination des globules polaires.
H est probable que les propriétés de l'hyaloplasme sont variables; mais je n'ai à cet égard aucune donnée certaine. n m'est impossible aussi de rien dire quant à la genèse des éléments formés du protoplasme. Les sphères hyalines, les gouttelettes homogènes, les corpuscules réfringents du vitellus et le corps réfringent du spermatozoïde sont-ils d'origine interflbrillaire et occupent-ils des mailles du treillis protoplasmique énormément étendues? Sont-ils de la substance interfibrillaire modifiée ou bien constituent-ils des portions différenciées du treillis? Je ne puis répondre à ces questions. D est probable que les deux cas peuvent se présenter. Si la première hypothèse était vraie, il est clair que la structure réticulée ; du protoplasme, résultant de la présence de grandes vacuoles, j occupées soit par des liquides aqueux (cellules végétales) ou \ gélatineux, par des produits de sécrétion ou des éléments j formés, ne serait qu'une apparence particulière du treillis : les I vacuoles ne seraient que des mailles du treillis considérablement distendues. Mais les filaments ou les lames délimitant les vacuoles ne pourraient pas, pour ce motif, être identifiées aux fibrilles; elles présenteraient elles-mêmes une structure treillissée; elles seraient composées de fibrilles et de substance interfibrillaire; mais dans les filaments réticulés leij mailles du treillis seraient extrêmement réduites.
362 EDOIARD VAN BEINEDEN.
Pour trancher ces questions il faudrait de nouvelles recherches sur la genèse des vacuoles et des produits de sécrétion dans leurs rapports avec le treillis.
L'opinion que je viens de formuler sur la structure du protoplasme cellulaire se fonde sur l'étude que j'ai faite du zoosperme et de l'œuf, aux différents moments de sa maturation et aussi sur l'analyse des phénomènes de la division cellulaire, tels qu'ils s'accomplissent pendant la segmentation, chez V Ascaris megalocepluda.
Il me resterait à comparer la conception que je me suis faite du protoplasme cellulaire aux idées formulées par Frommann, par Heitzmann, par Kupffer, par Klein, par Schwalbe, par Eimer, par Leydig et par Flemming à la suite de leurs recherches sur la structure des cellules qu'ils ont étudiées et à comparer les faits que révèle l'analyse du zoosperme et de l'œuf de notre ascaride à ceux qui ont été signalés par ces auteurs. Si je renonce à aborder ici l'historique et la critique des travaux modernes relatifs à la structure du protoplasme, c'est d'abord parce qu'un exposé complet de ces travaux et de ces idées a été fait tout récemment par Flemming dans son beau livre : " Zellsubstanz, Kern und ZeUtheilung „. Je ne pourrais faire mieux que de reproduire l'analyse critique de Flemming ; je préfère renvoyer le lecteur à cet excellent ouvrage. Il serait difficile d'ailleurs, en s'en rapportant exclusivement aux figures et aux descriptions des auteurs, sans s'être attaché à revoir, en suivant les méthodes qu'ils renseignent et en s'adressant aux objets qu'ils ont étudiés, de comparer, entre elles les données actuellement existantes. A quels éléments du protoplasme ovulaire de l'ascaris faut-il rattacher le réseau de Heitzmann, les filaments que Kupffer a le premier signalés dans les cellules biliaires? Sont-ils comparables aux éléments du réseau protoplasmique de l'œuf, ou aux fibrilles constitutives du treillis? Que sont les filaments des cellules du cartilage, des cellules ganglionnaires, des œu& de mammifères décrits par Flemming? Il serait bien difficile de se prononcer sur ces rapports, sans avoir pris connaissance pai* soi-même des objets dont il s'agit.
m. — structure du noyau; ses rapports avec le corps cellulaire; composition de la vésicule germinative.
Les recherches modernes sur la structure des noyaux des cellules et sur les changements qui s'accomplissent dans ces éléments, lors de la division indirecte, ont fait accepter généralement l'expression de noymi au repos, pour désigner l'élément nucléaire des cellules qui ne sont pas en voie de division. J'ai étudié avec le plus grand soin la constitution des noyaux au repos, dans les blastomères de Tascaride du cheval; je les ai ti*ouvés constitués exactement de la même manière que les pronucleus arrivés à maturité. La description des uns s'applique parfaitement aux autres. L'étude de la genèse des noyaux et celle des pronucleus m'a conduit à cette autre conclusion que les uns et les autres se développent, suivant les mêmes processus, aux dépens de deux parties, d'une portion chromatique et d'un corps achromatique. Seule l'origine de ces parties est différente, suivant qu'il s'agit de noyaux ou de pronucleus. Si donc il faut admettre, & raison du caractère unisexué des pronucleus, de l'hermaphrodisme des noyaux, une différence physiologique entre les uns et les autres, il est évident, d'autre part, qu'il n'y a entre noyaux et pronucleus aucun différence de structure. Cette conclusion ressort non- seulement de l'étude de la constitution de ces éléments, mais de celle de leur genèse et de l'examen des changements qu'ils subissent lorsque les cellules dont ils font partie se divisent. La description des noyaux au repos s'applique donc aux pronucleus et vice-versa.
Les noyaux au repos présentent à considérer une membrane, une charpente réticulée et une substance renfermée dans les mailles du réticulnm. J'ai créé, il y a quelques années, le nom de nucléoplasma pour désigner les filaments réticulés que j'avais observés dans la vésicule germinative, tant chez le lapin que chez l'étoile de mer de nos côtes, (AsteracanOiian rubens). J'emploirai ce nom pour désigner l'ensemble de la substance, foimant d*une part la charpente réticulée du noyau,
iU
EDOCAR» VAK BENEDES.
d'autre part la membrane nucléaire. Ces noyaux ne renfer-.ment pas de nucléoles, si l'on entend le mot nncléoles dans le sens qne lui attribuent Flemniing et Retzius. Pour ces auteurs les nucléoles sont des formations morpliologiquemmil définies qai prennent naissance dans le réticulum, mais peuvent être confondues avec lui. Dans ce sens je ne troi de nucléoles ni dans les noyaux des Mastomëres, ni dans pronucleus. Les éléments qni pourraient eu imposer pour nucléoles sont de simples i-enHements, plus ou moins voli neur, des éléments constitutiis du réseau nucléoplasmique.
Aussi bien dans la charpente réticulée que dans la membrane nucléaire la substance nucléoplasmique se montre constituée de deux parties : l'une achromatique, l'autre chromatiqi La substance achromatique se présente sous la forme de l menta, dont les dimensions sont éminemment variables, d'une substance interposée entre ces filaments. Ces filaments sont moniliformes. Non seulement les grains que l'on poun-ail appeler, avec Strasbnrger, les nucUomicrasomes, mais ausa les fibrilles qui les rattachent les ims aux autres et que 1' pourrait désigner sous le nom les nucUofih (nxicleofUa) des dimensions très variables; ils sont tantôt volumini tantôt d'une extrême ténuité; les nucléomicrosomes sont plus ou moins rapprochés les uns des autres; ils forment parfois ensemble des cordons noueux, des amas irréguliers de volume variable, des portions épaissies de la membrane. De même qne l'on observe d'un point k un autre des variations considérables dans les caractères des filaments constitutifs de la charpente réticulée, de même la membrane, formée comme la charpente, de nucléomicrosomes, réunis entre eux par des nncléofils. montre des différences considérables d'un point à un autre de son él due. Je pense que dans la membrane les nucléomicrosoi sont d'habitude très rapprochés les uns des autres, et que nncléofils sont très courts. En effet, le plus souvent la brane se montre constituée de granules très rapprochés ; là ils semblent se toucher; mais ailleurs, ils sont écartés uns des autres et dans ce cas ils sont réimis entre eux par
ces
RECnERGHES SIR LA FÉCONDATION. 365
lignes fines. Quelque soit le volume de ces nucléomicrosomes, toujours ces éléments font plus fortement saillie dans la cavité nucléaire; il en résulte que le contour externe de la membrane est plus lisse que son contour interne. Le fait même de Texistence de ces saillies prouve que dans la membrane, comme dans la charpente réticulée, les grains sont réunis entre eux par des filaments plus grêles que le diamètre des grains et, s'il en est ainsi, il doit y avoir entre ces fiilamente des mailles, des solutions de continuité constituant des perforations de la membrane. Quoique je n'aie pas pu reconnaître directement ces perforations, elles me paraissent résulter nécessairement de l'apparence que présente, à la coupe optique, la membrane nucléaire. Frommann est arrivé, il y a plusieurs années déjà, à la même conclusion, à laquelle se sont ralliés d'autres histologistes et particulièrement Leydig.
La substance chromatique se trouve abondamment répandue dans la charpente et dans la membrane nucléoplasmique. Elle ne forme pas à elle seule ces éléments, elle imbibe les nucléomicrosomes et les fibrilles du nucléoplasme ; elle se trouve surtout accumulée dans les microsomes et, à un moindre degré, dans les nucléofils. Elle est loin d'être uniformément répandue dans toute l'étendue du noyau : elle est surtout abondante à la périphérie, principalement dans la membrane et dans la couche corticale sous-jacente à cette membrane. Sa répartition est très inégale même dans la membrane et dans la couche corticale : certaines parties de la membrane sont fortement chargées de chromatine, tandis que d'autres parties en renferment peu ou en sont même privées. Il en est de même dans la partie corticale de la charpente nucléoplasmique. On y trouve ça et là des trabécules noueux, vivement colorés en rouge, des amas de globules chromatiques, voire même des globules isolés ou réunis en petit nombre, sur le trajet d'un filament incolore. Mais de même qu'une partie des microsomes et des nucléofils qui entrent dans la composition de la membrane sont achromatiques, de même une grande partie de la charpente nucléaire est dépourvue de chromatine. Partout où la chromatine imbibe
abondamment les filaments achromatiques, que ce soit dans la membrane ou dans la charpente, le nncléoplasme se trouve gonflé et les microsomes deviennent de gros globules parfois très rapprochés les uns des autres; ils forment alors des cordons noueux ou des portions d'une membrane chromatique, continue en apparence et relativement épaisse. D'autre fois ils sont plus écartés les uns des autres et ils sont alors reliés entre eux par des nucléofils peu ou point colorés. La chromatine peut cheminer le long d'un filament qui, d'achromatique qu'il était, peut devenir chromatique et vice versa. L'histoire de la maturation des noyaux et des pronucleus montre que la substance chromatique siège, au début, dans une portion restreinte du noyau, primitivement achromatique dans la plus grande partie de son étendue. Elle forme une ou plusieurs masses colorées occupant soit le centre, soit une portion de la périphérie du corps nucléaire acliromatique. Celui-ci se trouve à ce moment délimité par une membrane achromatique treillissée, c'est-à-dire formée de nucléomicrosomes incolores, reliés entre eux par des nucléofils également dépourvus de matière chromophile. Mais bientôt tout le corps achromatique et la membrane elle même sont envahis par la chromatine qui peu à peu abandonne de plus en plus complètement le milieu du noyau pour se localiser à sa périphérie. Lorsqu'il se prépare à la division le noyau se modifie en sens inverse : les éléments nucléoplasmiques de la membrane et de la charpente perdent de nouveau leur chromatine qui s'accumule exclusivement dans quelques cordons nucléoplasmiques. Bientôt une continuité s'établit entre ces cordons d'abord fragmentaires et toute la substance chromatique se trouve dès lors concentrée dans un cordon unique destiné à se segmenter en un petit nombre d'anses; deux s'il s'agit d'un pronucleus; quatre quand il s'agit d'un noyau. Les éléments achromatiques, abandonnés par la chromatine, subsistent sous la forme d'une membrane achromatique et d'une charpente réticulée intranucléaire.
Dans les noyaux que j'ai étudiés la membrane et la char-
pente sont donc des parties d'une seule et même formation. Elles passent successivement, dans le cours de révolution nucléaire par la phase chromatique ou par le stade achromatique, suivant qu'ils s'imbibent de chromatine ou qu'ils abandonnent cette substance chromophile. La membrane achromatique et la membrane chromatique sont une seule et même chose : c'est une partie du corps nucléoplasmique qui peut être alternativement imbibée de chromatine ou libérée de cette substance.
La substance qui remplit les mailles du réticulum nucléaire, c'est le suc nucléaire (Kemsaft). Elle a été considérée d'abord par Flemming comme étant douée d'une certaine afânité pour le carmin et les matières colorantes en général, puis déclarée absolument achromophile par Pfitzner et par Eetzius. Flemming s'est rallié à la manière de voir de ces histologistes. Je ne puis pas partager cet avis. Dans les noyaux et dans les pronucleus mûrs, colorés au carmin boracique le suc nucléaire présente une légère teinte rosée, surtout marquée à la périphérie du noyau. Mais Taffinité de ce suc pour les matières colorantes est surtout bien manifeste au début de la période de maturation, alors que les masses chromatiques n'ont pas encore envahi tout le corps achromatique. La substance qui remplit les interstices de l'éponge chromatique, pendant sa période d'expansion, est nettement colorée en rose; mais la teinte devient de plus en plus pâle^ au fur et à mesure de l'expansion. C'est ce qui se voit encore très bien lors de la division de la plaque équatoriale : la substance intermédiaire, interposée entre les deux disques subéquatoriaux est un liquide chromophile, qui perd son affinité pour les matières colorantes, au fiir et à mesure que les disques s'écartent l'un de Tautre.
Je ne voudrais pas conclure du fait que le suc nucléaire retient le carmin avec une certaine énergie, à la présence, dans ce suc, d'une substance chimiquement identique à la chromatine. L'affinité pour les matières colorantes n'est pas tellement caractéristique de la substance qui imbibe certaines parties du nucléoplasme, de cette substance que Flemming appelle
chromatine, et qui est probablement identique à la nuclêine ou tout au moins contient de la nucléïne (Zaccharias), que Ton puisse conclure du fait qu'une partie de la cellule se colore à la présence de la chromatine dans cette partie. La plupart des substa^nces cellulaires jouissent de la faculté de fixer les matières colorantes, mais à des degrés très divers. De toutes les substances celle qui retient le plus énergiquement ces matières c'est la chromatine. Mais il n'y a cependant entre la chromatine et le protoplasme cellulaire par exemple, au point de vue de leur affinité pour le carmin, que des différences de degré. De même que Ton ne peut conclure du £ut que le protoplasme peut être coloré la conclusion qu'il renferme de la chromatine, de même on ne peut conclure à la présence de cette substance dans le suc nucléaire du fidt qu'elle retient avec une certaine énergie les matières carminées. Cependant rien ne prouve qu'il n'en soit pas ainsi.
Il se présente, non-seulement d'une cellule à l'autre, mais aussi dans une même cellule, d'un moment à un autre, des variations dans la faculté que possède le protoplasme cellulaire de fixer les matières colorantes. Pendant la karyokinèse le protoplasme devient beaucoup plus chromophile; an moment de la copulation des éléments sexuels et après sa pénétra^ tion dans le vitellus, le corps cellulaire du zoosperme fixe le carmin assez énergiquement, tandis qu'il ne se colore pas, tant qu'il est libre. J'ai constaté, en ce qui concerne les spermatozoïdes, que ces changements dans les propriétés du protoplasme coïncident avec des modifications que subit, an moment de la copulation, le noyau chromatique. Cet élément devient moins réfringent et il perd de son affinité pour le carmin. Ceci tendrait à établir qu'une partie de la substance chromatique du noyau peut, à certains moments, se disséminer dans le corps protoplasmique. Si les rapports entre le corps cellulaii'e et le noyau chromatique sont tels, que la chromatine nucléaire peut se répandre partiellement dans le protoplasme, l'on est en droit de supposer aussi que le même fait peut se produire pour le suc nucléaire. Rien ne
s'oppose non plus à l'hypothèse d'après laquelle le phénomène inverse pourrait se produire.
Peut-être la matière chromophile qui se trouve à certains moments disséminée dans le protoplasme ou dans le suc nucléaire peut-elle être ensuite soustraite à ces parties et fixée dans les éléments formés du noyau. H est certain que les cellules produisent de la chromatine. Deux noyaux filles renferment l'un et l'autre, quand ils sont arrivés à leur complet développement, autant de chromatine que le noyau maternel dont ils proviennent. Où se forme cette chromatine? Est-ce dans le nucléoplasme ? Est-ce dans le suc nucléaire? Est-ce dans le protoplasme cellulaire ? Nous n'en savons rien. Le fait que j'ai signalé plus haut, en ce qui concerne les changements presque instantanés qui se produisent dans les propriétés du corps protoplasmique du zoosperme, au moment de la copulation, tend à prouver que de la chromatine peut se répandre dans le corps cellulaire et que des échanges rapides de chromatine peuvent s'opérer entre protoplasme et noyau. L'avenir nous apprendra si la substance chromophile que l'on constate à certains moments de l'évolution de la cellule soit dans le protoplasme, soit dans le suc nucléaire est ou non identique à la chromatine nucléoplasmique.
La quantité de suc nucléaire renfermée dans l'éponge chromatique croît rapidement pendant l'expansion progressive de la masse chromatique : les mailles du réseau d'abord très petites s'agrandissent et dans le noyau mûr il existe, surtout vers son milieu, de grands espaces remplis de suc nucléaire.
En ce qui concerne l'état sous lequel la chromatine existe dans le nucléoplasme, j'ai exprimé plus haut mon opinion. Je ne pense pas qu'elle s'y trouve à l'état d'éléments observables au microscope, de granules par exemple, mais bien sons la forme d'une substance chimique imbibant d'autres éléments formés.
Je tiens à faire observer encore que je ne considère pas les trabécules du réseau nucléoplasmique comme formés chacun d'un filament moniliforme unique; souvent il s'agit de fais-
370 EDOIARD VAN RENEDEN.
ceaux de fibrilles. 11 me paraît certain aussi que des fusions peuvent se produire entre microsomes et fils adjacents, de sorte que, dans de gros cordons nucléaii-es par exemple, il n'existe pas de stiaicture ultérieure, quoique ces cordons puissent représenter, par leur origine, des faisceaux fibrillaires et être capables de se résoudre ultérieurement en microsomes et en fibrilles fasciculées. J'ai signalé une série de fieûts qui prouvent que des cordons homogènes, tout au moins en apparence, et même des globules chromatiques peuvent se dédoubler ou même se résoudre en un grand nombre de parties qui (voir la genèse et la maturation du pronucleus), lorsqu'ils s'imprègnent de suc nucléaii-e, peuvent donner lieu à la formation d'un réticulum.
Flemming pense que toute la charpente réticulée du noyau peut être formée de chiomatine, sans nier toutefois qu'il puisse y exister un substratum non chromatique. Je pense avec Schmitz que la charpente réticulée n est pas formée exclusivement de chromatine et j'ai signalé, dans le cours de ce travail, assez de faits qui justifient cette manière de voir pour considérer ce que Flemming appelle une possibilité comme un fait complètement démontré.
L'opinion que j'ai émise plus haut, en ce qui concerne la discontinuité chromatique dans le réseau nucléoplasmique, n'est pas conforme aux observations de Flemming sur les nombreuses cellules animales et végétales qu'il a étudiées : il ne trouve aucun fait qui parle en faveur de cette discontinuité soutenue, en ce qui concerne les cellules végétales, par Schmitz et par Strasburger. L'étude que j'ai faite des pronucleus et des noyaux des blastomères, chez l'ascaride du cheval, m'a conduit à des conclusions confoimes aux idées de ces botanistes.
J 'ai décrit antérieurement dans les noyaux des cellules de l'ectoderme du lapin mi espace central plus clair que j'ai appelé le corps médullaire du noyau (il vaudrait mieux l'appeler " l'espace médullaire ,.) et une couche corticale plus colorée, travei-sée par des filaments. Ces filaments ne sont autre chose
que les éléments les plus apparents de la charpente nucléophismiqne. L'étude des pronucleus et des noyaux des blastomères de Pascaris m'a conduit, en ce qui concerne les dÎAisions à établir dans le corps nucléaire, à des conclusions ti-ès semblables à celles que j'ai formulées à la suite de mes recherches sur le blastoderme du lapin. Ici aussi se voit d'habitude un espace plus clair occupant le milieu du noyau. Est-ce que, comme je Fai cru d'abord, il s'agit là de rhj^aloïde de Eimer? En labsence de tout élément comparable à un nucléole, au milieu de cet espace, je n'oserais plus aigourd'hui soutenir cette manière de voir.
J'ai décrit plus haut la constitution de la vésicule germinative de l'œuf. La conclusion qui ressort de cette étude c'est que la vésicule germinative est un noyau dont les caractères diffèrent notablement de ceux des noyaux ordinaires. Ce qui la distingue avant tout, c'est que toute la substance chi*omatique de la vésicule germinative s'est concenti'ée en un corps sphéroïdal unique, le corpuscule germinatif, généralement appelé le nucléole de l'œuf. En traitant par le carmin boracique il est facile de s'assurer que la membrane, les pseudonucléoles et tout le contenu de la vésicule germinative, abstraction faite du nucléole, n'ont aucune affinité pour le carmin : les préparations bien traitées n'y montrent qu'un seul élément coloré, c'est le nucléole.
Quant à la substance achromatique de la vésicule germinative elle se montre constituée de deux parties : une zone bien différenciée entourant le corpuscule germinatif, qui se maintient autour de lui pendant tous les stades ultérieurs de la maturation de l'œuf. Je lui ai donné le nom de prothyalosome. L'autre partie, dans laquelle on distingue manifestement une structure treUlissée, je l'ai appelée la portion accessoire. Ces mêmes particularités se rencontrent dans la vésicule germinative d'autres animaux : Cli. Julin a fait récemment d'excellentes préparations d'œufs de Clavelline {ClaveUina Rissoayia). Là aussi nous constatons que de toutes
les parties du noyau de l'œuf le nucléole fixe seul la matière colorante; la membrane et le réticulum nucléoplasmique sont totalement dépourvus de cliromatine et il en est de même du suc nucléaire. Ici aussi un prothyalosome bien délimité, marginalement placé, entoure le nucléole adhérent à la membrane achromatique de la vésicule.
Comment faut-il considérer ce corpuscule qui aussi bien chez la Clavelline que chez V Ascaris megalocepluda concentre en lui toute la chromatine nucléaire ? Doit-on le considérer comme un nucléole et dire alors que la chromatine manque dans le noyau de l'œuf? ou bien faut-il le considérer comme un globule chromatique d'un caractère spécial, propre à l'œuf, équivalent à l'ensemble de la charpente chromatique des noyaux ordinaires et ayant par conséquent une toute autre valeur qu'un nucléole?
Après la découverte de la charpente réticulée des noyaux, après que l'on eut constaté que les nucléoles disparaissent dans les filaments chromatiques lors de la division
cellulaire, qu'ils interviennent dans la constitution de ces filaments, on en est venu à dénier aux nucléoles toute importance morphologique et Klein est allé si loin dans cette voie qu'il les a considérés comme de simples accidents du réseau, comme de simples amas nodaux de la charpente chromatique.
Les études minutieuses auxquelles se sont livrés divers histologistes, parmi lesquels il faut citer en première ligne Retzius et Flemming, ont amené une réaction contre cette tendance. Voici comment Flemming définit les nucléoles : Substamportimien im Kern von besonderer Beschaffenheit gegeniiber dem Oeriist und dem Kemsaft, fast immer von stdrkerem Lichthrechimgsvermogen als beide, mit gUUter Flàche, in Uiretn Umfmig abgesetzt, stets vofi abgenmdeter Oberflàchenform, meist in den Oeriistbalken svspendirt, in manchen FaUen axisserhdlb derselhen gelagert.
Tous ces caractères s'appliqueraient au corpuscule germinatif de l'œuf, n'était que, dans la vésicule germinative, le corpuscule nucléoliforme est adhérent k la membrane nucléaire
et qne, contrairement à ce que Ton observe dans tous Ie$ autres noyaux, il n'existe pas. dans la vésicule germiuative, de réticulum chromatique. La charpente nucléoplasmique est achromatique. Or, c'est dans m\ réticulum chromatique que les nucléoles apparaissent, doués de propriétés spéciales, dans les cellules ordinaires.
Diverses considérations me portent à considérer comme plus probable l'hypothèse d'après laquelle le corpuscule germinatif ne serait pas équivalent à un nucléole de cellule ordinaire, mais qu'il représenterait à lui seul tout le réticulum chromatique, y compris la membrane chromatique et les nucléoles des cellules ordinaires.
H fiiut se rappeler qu'il existe des cellules dépourvues de nucléoles. Je ne trouve de semblables éléments ni dans les pronucleus, ni dans les noyaux des blastomères; les nucléoles manquent constamment, en tant qu'éléments morphologiquement distincts, lors de la division karyokinétique et dans de jeunes noyaux en voie de maturation.
Si l'on en juge par le rôle qu'il joue dans la constitution des figures kaiyokinétiques, l'on peut affirmer que le réticulum chromatique constitue un élément essentiel et par conséquent constant du noyau, tandis que l'absence du nucléole, dans certaines cellules et à certains stades de l'évolution nucléaire, parait devoir le faire considérer comme un élément d'importance secondaire.
Enfin, et c'est là l'argument principal et à mon avis décisif, toute la substance chromatique que l'on trouve dans les figures pseudo-karyokinétiques, dans les globules polaires et dans le pronucleus femelle dérive du corpuscule nucléoliforme de l'œuf. Tout le réticulum chromatique du pronucleus femelle et par conséquent deux des quatre anses de la première figure karyokinétique dérivent du soi-disant nucléole. Or, les anses chromatiques d'un noyau en voie de division se forment aux dépens de la charpente chromatique du noyau maternel. Il est donc rationnel de considérer le corpuscule nucléoliforme de la vésicule germinative comme l'équivalent
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d'une charpente chromatique, alors surtout que nous ne trouvons nulle part ailleurs de chromatine dans la vésicule genninative de Tœuf.
L'on pourrait encore invoquer la constitution même de Télément, formé de deux disques dans chacun desquels on distingue quatre globules chi'omatiques agglutinés entre eux au moyen d'un ciment moins chromophile. Une semblable structure n'est connue pour aucun nucléole; elle fait du corpuscule nucléoliforme de l'œuf un élément d'un caractère tout spécial.
Il y a lieu de faire remarquer ici que, dans la genèse des pronucleus, les dérivés du soi-disant nucléole de l'œuf se comportent exactement comme le petit noyau chromatique du zoosperme. Or rien ne peut nous faire supposer que cet élément soit l'équivalent d'un nucléole, quoiqu'il en ait l'apparence. D n'est pas probable que ce petit noyau spermatique soit un noyau de cellule ordinaire; pour se prononcer sur sa valeur, en connaissance de cause, il faudrait avoir étudié à fond la spermatogénèse; mais il me parait naturel de le considérer, par analogie, comme représentant lui aussi la charpente chromatique du noyau du spermatozoïde.
L'on a désigné anciennement sous le nom de membrane nucléaire le contour net qui sépare un noyau du protoplasme cellulaire. Le caractère vésiculeux du noyau était universellement admis. Flemming a le premier démontré que la couche limitante externe du noj^au peut être colorée et qu'elle se rattache à la charpente réticulée du noyau dont elle forme la limite périphérique. L'emploi des forts grossissements lui fit reconnaîti-e que, dans certains noyaux, la couche chromatique corticale est discontinue, qu'elle présente de petites interruptions; mak pour être perforée cette couche n'en mérite pas moins le nom de membrane. Cependant la question suivante l'essortait de ces premiers résultats de Flemming : n'existet-il pas, en dehore de cette couche limitante du réticulum chromatique, une autre membrane, contre la face interne de
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laquelle se trouverait appliquée la couche chromatique? Pfitzner et Retzius se sont prononcés contre cette hypothèse ; mais Flemming, dans son dernier ouvrage arrive à une conclusion opposée. Il admet qu'il existe, dans certains noyaux, indépendamment d'une couche chromatique marginale une membrane achromatique qui, pour être très fine dans beaucoup de cas, n'en est pas moins une couche particulière. Je suis loin de vouloir émettre le moindre doute sur la réalité de l'existence d'une semblable membrane dans les cellules étudiées par Flemming. Mais pas plus dans les pronucleus que dans les noyaux des blastomères de l'Ascaris du cheval, je n'ai pu me convaincre de l'existence simultanée de deux couches distinctes, l'une achromatique, l'autre chromatique, quand ces éléments nucléaires sont arrivés à leur complet développement. La membrane achromatique primitive de ces noyaux peut s'imprégner de cliromatine et puis abandonner de nouveau cette substance ; membrane achromatique et couche corticale chromatique sont une seule et même formation. Quant à la membrane manifestement achromatique de la vésicule germinative, je la considère comme équivalente à ce que j'ai appelé la membrane achromatique des pronucleus et des noyaux des blastomères. Cette membrane parait, il est vrai, plus régulière, assez résistante pour présenter, à un moment donné, des plis; son double contour est continu et ininterrompu. A mon avis, il s'agit ici d'une fusion des microsomes et des interfils analogue à celle qui se produit lorsqu'un filament moniliforme du protoplasme se transforme en un filament homogène ou lorsque plusieurs filaments semblables se soudent entre eux en un cordon homogène. Ce qui me porte à croire qu'il en est ainsi, c'est le fait positivement établi que lors de la disparition de la vésicule germinative cette membrane se résoud en granulations reliées entre elles; c'est aux dépens de ces granules réimis entre eux que se constituent en partie les fibrilles de la figure ypsiliforme.
Quels sont les rapports morphologiques entre noyau et pro-
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toplasme? constituent-ils des formations indépendantes Tmie de l'autre ou bien, comme Ta soutenu Heitzmann, comme le pensent Frommann et Klein y a-t-il continuité entre les filaments du noyau et ceux de protoplasme? Déjà dans son premier travail Frommann affirme avoir vu des cordonssortir du noyau pour se continuer dans le protoplasme. Klein est arrivé à la même conclusion. Parmi les Mts que j'ai eu l'occasion d'observer j'en ai signalé plusieurs qui plaident en faveur de la notion d'une continuité organique entre les éléments du réticulum nucléoplasmique et les fibrilles constitutives du protoplasme.
1<^ Les microsomes de la membrane achromatique des pronucleus et des noyaux en voie de formation se montrent fréquemment en continuité de substance d'une part avec des fibrilles achromatiques du noyau, d'autre part avec des filaments moniliformes du protoplasme.
2^ Lors de la disparition de la vésicule germinative, la membrane et la portion accessoire de la vésicule germinative se résolvent en une substance granuleuse qui ne se distingue en rien du protoplasme; les rayons des asters de la figure ypsiliforme se forment en partie aux dépens de cette substance d'origine nucléaire, en partie aux dépens du protoplasme ovulaire. Ces fibrilles ne se distinguent en rien les unes des autres.
3^ Loi^s de la segmentation les filaments réunissants, qui sont manifestement d'origine nucléaire, disparaissent à la fin dans le protoplasme cellulaire.
4<^ Les fibrilles du soi-disant fiiseau achromatique se forment en partie aux dépens du protoplasme, en partie aux dépens de la substance achromatique du noyau en voie de division.
5<^ Lors de la disparition du cordon de réunion, qui rattache le second globule polaire au pronucleus femelle, une partie de ce cordon intervient dans la formation de la charpente achromatique du pronucleus, une autre pai1,ie disparait dans le protoplasme.
6^ La stractnre du réseau nucléoplasmique, avant son envahissement par la chromatlne, comme après le retrait de cette substance, est très semblable, voire même identique à celle du protoplasme. De part et d'autre nous trouvons des microsomes reliés entre eux par des interlUs, et formant un treillage dont les mailles sont remplies par une substance interôbrillaire. La membrane achromatique a aussi une structure treillissée. Elle constitue une limite au delà de laquelle le treillage n'est pas susceptible d'être envahi par la chromatine nucléaire. Cette membrane est d'habitude perforée et par ces orifices s'établit une continuité entre le suc nucléaire et la substance interflbrillaire du protoplasme. Ceci s'observe aussi bien avant qu'après l'imbibition des éléments de la membrane achromatique par la chromatine. Les microsomes sont de dimensions très inégales aussi bien dans la membrane que dans les réticulums protoplasmique et nucléaire. C'est en examinant avec attention de gros microsomes de la membrane que Ton peut observer directement la continuité avec les fibrilles du protoplasme d'un part, du noyau de l'autre ; car il y a, dans beaucoup de cas, un rapport entre le volume du microsome et l'épaisseur des fibrilles qui le rattachent aux éléments voisins. Quand, par suite de la fusion de ses éléments constitutifs, la membrane a perdu sa porosité, quand on ne peut plus y distinguer les microsomes, il n'est plus possible de constater la continuité entre le réseau nucléoplasmique et le treillage du protoplasme cellulaire.
