‹ Recherches Sur La Purification De La LaccaseChapitre 60 sur 82 · FIGURE I · texte numérisé non relu

FIGURE I

V. — Adsorption par l’alumine B du suc purifié par le carbonate de sodium et par dialyse.

Continuant toujours notre étude systématique, nous avons soumis à l’adsorption par l’alumine B, des sucs traités par le carbonate de sodium et dialysés pendant trois jours.

La technique utilisée a été toujours la même, c’està-dire la suivante : 10 cm de suc purifié sont agités mécaniquement pendant une demi heure avec le culot de centrifugation provenant de 10 cm° d’une suspension d’alumine. Après centrifugation et séparation de l’adsorbat, la différence d’activité qui existe entre le suc purifié et le suc après action de l’alumine mesure l’adsorption.

— 1h — ESSAIS PRÉLIMINAIRES. — Voici deux expériences préliminaires qui nous ont donné d’excellents résultats (le

pH n’a pas été pris en considération)

1° Expérience.

ATSOLDUON EE CES M Men ae ee As ne Me 80 p. 100 Caractéristiques du suc avant adsorption.

RÉPARER nn Rd Te 5 g.,88 p. 100 Concentration diastasique (U. D. pour 100 cm3)... 1.200 DR NS pue eo de ; 6 Caractéristiques du liquide après adsorption. Eirait SSSR nl nn re 1 g.,20 p. 100 Concentration diastasique (U. D. pour 100 cm3)... 250

2° Expérience.

Effectuée avec un suc différent.

AASOLPHON ES ue Mo TE DT CE 85 p. 100 Caractéristiques du suc avant adsorption.

ERÉRALESE CE ER MT nent e 4 g.,91 p. 100 Concentration diastasique (U. D. pour 100 cm3). 1.160 - Caractéristiques du suc après adsorption.

PXÉRAILES CORRE nee dire à aiere.o ai 1 g.,07 p. 100 Concentration diastasique (U. D. pour 100 cm3... 160

Ces deux expériences nous ayant donné des résultats très encourageants nous avons entrepris une étude approfondie de cette adsorption.

1° Essai d’adsorption par l’'alumine B du suc carbonaté et dialysé.

a) PRÉPARATION DU SUC DIALYSÉ. — Le suc est traité par un volume égal de solution normale de carbonate de sodium et soumis à une dialyse prolongée pendant cinq jours à travers une membrane de cellophane de 1/10° de mm. d'épaisseur environ, en utilisant le dialyseur classique de GRAHAM contre de l’eau distillée renouvelée 3 fois par jour. Nous avons utilisé deux dialyseurs, dans chacun d’eux nous avons placé 50 cm* de suc carbonaté actif. Au bout de cinq jours le liquide recueilli dans les

deux dialyseurs avait un volume total de 300 em. La réaction du milieu qui était alcaline au début, pH 9 était devenue presque neutre, le pH étant de 6,5.

b) OBTENTION DES DIVERS pH. — Nous avons par des essais préliminaires fixé les proportions d’acide acétique ou de carbonate de sodium nécessaires pour pouvoir faire varier le pH dans les plus grandes limites possibles.

Voici les pH que nous avons fixés et qui ont été mesurées colorimétriquement.

10 cm3 suc dialysé + 0 cm3,6 eau distillée.............. ER ee :. témoin 10 cm® suc dialysé + 0 cm3,6 sol CO3NaN...........:.......... pH = 10 em suc dialysé + 0 cmë,3 sol. CO;Na,N + 0 cm$,3 eau distillée pH — 10 cm3 suc dialysé + 0 cm,6 eau distillée ........... ven us Sue

10 cm3 suc dialysé + 0 cmÿ,3 sol. ac. acét. au 1/10 + 0 cm,3 eau. pH = 10 cm8 suc dialysé + 0 cm5,6 sol. ac. acét. au 1/10 ............... pH =

c) MODE OPÉRATOIRE. — À 10 cm de suc carbonaté et dialysé, nous avons ajouté une quantité déterminée de. solution normale de carbonate de sodium ou d’acide acétique au 1/10 pour avoir les différents pH indiqués ci-dessus. Cette solution à pH ainsi déterminée est agitée avec le culot d’alumine, provenant de la centrifugation de 10 cm* d’une suspension d’alumine B.

Après une agitation mécanique d’une heure, nous avons mesuré l’activité du liquide surnageant après centrifugation.

Nous avons d’autre part, mesuré l’activité du suc placé dans les mêmes conditions (témoin) c’est-à-dire 10 cm de ce même suc purifié par le carbonate de sodium et dialysé, auquel on a ajouté 0 cm#,6 d’eau (1). La différence entre l’activité de ce témoin et celle du liquide surnageant après action de l’alumine B, mesurera l’adsorption.

Remarque. — Pour toutes les mesures d’activité on ramène les solutions diastasiques au pH 6,7 avec un

() Ce volume d’eau ajouté au témoin représente le volume de

Re ajouté, dans les expériences précédentes pour ajuster leur pH.

mélange tampon phosphate de sodium, phosphate de

potassium et on opère à la température de 30°, pendant le temps de 10’,

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