HUE
= Fa S.
extrait sec Manganèse en mg, p. 100 cm#
Extrait sec en g.p 100 cm°
Activité C.D.
Titre en Mn
en g. p. 100 cmi
Cendres sulfatées
= © or
Suc dilué au 1/2 - 11,92 Suc carbonaté 14,80 c 0,95 Suc non ultrafiltrable.... [10,040] 4.90! 2. 0,25 Suc adsorbé élué........| 7.027] 5,20| 1 : 0,14
À une partie du suc ainsi purifié, nous avons ajouté 0 mg.,05 de fer sous forme de sulfate ferreux, sans obtenir une augmentation d'activité, à une autre partie nous avons ajouté (0 mg.,05 de manganèse sous forme
de sulfate de manganèse, l’activité est encore restée invariable.
IT. — Purification de la laccase, après défécation au carbonate de sodium, par précipitation au sulfate d’ammonium et ultrafiltration.
1°" essai. — 100 em de suc (Nuoc’Son) dilués sont traités à froid pour 100 cm de solution normale de carbonate de sodium après centrifugation 150 cm? de liquide carbonaté surnageant sont amenés par addition d’acide acétique au 1/10 au pH — 7 puis précipités par une solution saturée de sulfate d’amnionium (1500 cm° à la glacière pendant deux jours). Le précipité recueilli sur filtre de Buchner est dissous dans 60 cm d’eau distillée (première concentration).
Voici lies résultats obtenus
TABLEAU IIl.
[ ce 5 A w È [L £AË El 28 5 = 26 2 S. S Eà E2 20 Æ > S © 2e y À Se Sale le ES— El = £ SA DB me] OS | IE Re à D I ESS CN EN RE MN ES toi M = ME Li #0 re) = LES A to Sn T = g pe Se LR PE 3 5 = | Suc dilué au 1/2...... 3.300! 10,95] 305] 1,175| 22,05| 6,67 SUCrCorDonate rene 3.120] 13,45] 240] 2,850] 2,05] 0,64 Suc précipité par 50; PA RC age 5.100| 41,60! 3.187| 0,012! 0,20! 0,039 Suc non ultrafiltrable.| 7,700] 0,75/10.266| 0,009, 0,05! 0,006
L'activité du suc ainsi purifié n’est pas modifiée par addition de fer (sous forme de sulfate ferreux) ou de manganèse (sous forme de sulfate de manganèse).
Il faut noter que la perte en activité au cours de la purification est considérable, ainsi les 150 cmÿ de suc carbonaté renfermaient avant la précipitation par le sul-
fate d’ammonium 4.680 unités diastasiques ; après préci-
pitation et concentration des 60 cm de suc provenant de la précipitation par le sulfate d’ammonium renferment 3.060 unités diastasiques et après ultrafiltration les 30 cm? de non-ultrafiltrat renferment 2.310 unités diastasiques. On voit qu'après toutes ces manipulations l’activité a baissé de 50 p. 100.
2° essai. — Le suc dilué est traité par un égal volume de solution normale de carbonate de sodium, après centrifugation 120 cm* de liquide carbonaté sont amenés au pH 7 par l'acide acétique dilué au 1/10 puis précipités par 120 em d’une solution saturée de sulfate d’ammonium.
Après deux jours de contact à la glacière, le précipité recueilli sur filtre Buchner, est dissous dans 40 cm* d’eau puis soumis à l’ultrafiltration. Le produit non ultrafiltré est ramené à 20 cm.
Voici les résultats obtenus
TABLEAU IV
TS Le :
A 4 £ | © MOSS) à © © 5 © Æ S28| es |[o?|£s | is À+ Suit ee RE — = £ alQ He logs jan CPR te GIe Fe re] en RENE) MEET ne LE 2 => Se me pe Que Sy [== pp SEA DE T a y ©? a Euc dilué au 1/2...... 3.100/10,400| 298] 1,080! 20 6,45 Suc carbonaté .......| 2.920142,950| 225] 2,650! 14,8 | 0,615 Suc précipité par So, | À Pate ie 4,900! 1,200! 4.083] 0,018] 0,18 | 0,037
Suc non ultrafiltrable.| 7,500! 0,501115,000! 0,011| 0.075] 0,010
La perte en activité est supérieure à 50 p. 100, ainsi les 250 cm de suc carbonaté représentent 3.720 unités diastasiques, les 40 em provenant de la dissolution du
marie
précipité obtenu par le sulfate d'ammonium, représentent 1.500 unités diastasiques.
L'activité du suc purifié n’est pas modifiée par addition de fer ou de manganèse,
CONCLUSIONS
Toutes les expériences décrites ci-dessus ont été réalisées sur le suc préalablement déféqué au carbonate de sodium, les résultats obtenus montrent tout d’abord, une fois de plus l'intérêt très net du traitement de ce suc par le sulfate d’ammonium. Ce traitement, malgré les pertes d’activité qu’il provoque permet de concentrer l’activité diastasique tout en éliminant une portion importante des éléments minéraux. Il est facile de s’en rendre compte en comparant les résultats que donne l’ultrafiltration selon que l’on applique au suc simplement déféqué au carbonate de sodium ou bien à ce dernier, traité ensuite par le sulfate d’ammonium.
Dans le premier cas (tableau [) Pactivité (nombre d'unités diastasiques pour 1 g. d'extrait sec) passe de 260 (suc brut) à 2048 et les cendres pour 100 cm de 3,04 à 0,410 tandis que dans le deuxième cas (tableau IT) l’activité s'élève de 305 à 10.266 et les cendres tombent de 1 g.,175 à 0 g.,009 pour 100 cm.
Les chiffres du tableau III sont analogues : L'activité qui, pour le suc brut était de 305, monte en fin d’opération à 10.266 (soit une augmentation de 1 à 34) malgré une perte qui atteint plus de 50 p. 100 de l’activité primitive. Par contre les cendres s’abaissent pour 100 cm° de 1g.,175 à 9 mg. Enfin la teneur en cendres de l’extrait sec qui était de 1 g.175 pour 10 g.,950 (soit 10,7 p- 100) se réduit à 9 mg. pour 750 mg. (soit 1,2 p. 100) l'élimination est donc de 90 p. 100 environ.
En ce qui concerne l’application de l’adsorption suivie d’élution à la solution soumise à l’ultrafiltration : le tableau I montre que l'opération n’est pas très intéres-
nr
sante pour le but poursuivi par suite des pertes subies et de la nécessité d’éluer par une solution saline la diastase adsorbée.
Quant au fer et au manganèse nos tableaux montrent que l'élimination la plus importante de ces deux éléments est obtenue par action successive du carbonate de sodium et du sulfate d’ammonium. L'action subséquente de l’ultrafiltration, qui permet une concentration intéressante de l’activité, n’amène pas un résultat aussi net au point de vue de l’élimination des métaux lourds. Le taux de fer est réduit à un degré tel que, dans les conditions de nos expériences, il ne peut plus être décelé. Quant au manganèse son taux se maintient aux environs de 0,010 par unité diastasique, ce qui représente (le taux dans le suc primitif étant à peu près de 6) environ 1,7 p. 100 du manganèse primitif.
