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À. Méthode spectrophotométrique dans l’ultra-violet, où l’on mesure l’intensité de l'absorption sélective de la vitamine A à 328 my.

B. Méthode colorimétrique basée sur la réaction de Carr et Price.

Nous avons déjà étudié les grandes lignes de ces méthodes dans la première partie. Envisageons les avantages et les inconvénients

de chacune de ces méthodes rt le dosage du carotène et de la vitamine À du lait.

, à) Carotène.

D’après ScHREwsBuRyY et KRAyBILL [43], le dosage colorimétrique du carotène dans le beurre fondu par comparaison directe avec un étalon au bichromate n’est pas exact. Les résultats obtenus sont plusieurs fois trop forts. D’après ces auteurs, le carotène et le beurre dissous dans l’éther de pétrole peuvent être dosés avec une grande précision par la méthode spectrophotométrique. GOLDBLATT et BARNETT arrivent à la même conclusion : l'intensité de la couleur du carotène dans l’huile est plusieurs fois plus forte que celle d’une égale quantité dissoute dans l’éther de pétrole. Quand une quantité connue de carotène est ajoutée à cet échantillon, la quantité théorique est retrouvée spectrophotométriquement tandis que cette quantité, multipliée par deux, est obtenue par la méthode colorimétrique.

b) Vitamine À.

La méthode spectrophotométrique a été appliquée par BAUMANN et STEENBOOK [38]. Ces auteurs trouvent que les produits qui absorbent dans la même région du spectre que la vitamine A sont des produits d’oxydation des caroténoïdes. Ces substances n’absorbent pas d’une façon appréciable à 325 my quand leur concentration, mesurée par l’absorption à 280 my, est relativement faible. I1 faut donc éliminer toute analyse où l’absorption à 280 my est supérieure à celle à 328 my. GILLAM [44] trouve que l'absorption à 328 my est due principalement à la vitamine A, mais aussi au carotène et aux xanthophylles. OLSON, HEGSTEAD et PETERSON [39] emploient également la méthode physique. D’après Van Bever [40], Ja méthode spectrophotométrique seule n’est pas sûre. CHEVALLIER et MANUEL [42] décrivent une technique basée sur la méthode spectrophotométrique : étude des courbes d’absorption avant et après irradiation. L'examen de l’insaponifiable donne une courbe d'absorption qui montre une inflexion marquée dans la région 320-330 mu. L’irradiation de la solution fait disparaître dans un

temps très court cette inflexion. Une nouvelle courbe étant établie, sa différence avec la première mesure la quantité de vitamine A. initialement présente dans le lait.

Le point délicat de cette téchnique est évidemment d’être sûr

que toutes les substances absorbant 325 my ne sont pas du Ro touchées par l’irradiation. > Cependant, le fait que la différence des DD eness à diverses longueurs d’onde représente une courbe caractéristique de la vitamine À permet de s’assurer que l’irradiation a détruit spécifiquement la vitamine À (CHEVALLIER-DUBOULLOZ-MATHERON). Un autre inconvénient est d’opérer par différence de grandeurs assez voisines lorsque les solutions sont diluées comme c’est le cas

pour le sang et le lait. Cette technique SES Cab néanmoins un test

qualitatif précieux. f

B. Méthode chimique : réaction de Carr et Price.

Rappelons que le coefficient d'extinction à 620 my est Er” Fe 5.000 alors qu’à 328 my il n’est que 1.600.

La sensibilité très grande de la réaction de Carr et Price est ici favorable, en raison de la faible teneur du lait en vitamine A. Cependant la réaction de Carr et Price présente des inconvénients. D’après Boorx et Collaborateurs, la réaction de Carr-Price ne peut être appliquée directement au beurre, en raison de la présence d’un inhibiteur qui présente des variations saisonnières. Cet inhibiteur serait pins abondant quand les bêtes sont au PÉVATRES que lorsqu'elles sont à l’étable.

Il a été établi par GILLAM [44] que, même après saponification du beurre, la valeur obtenue au moyen de la réaction de Carr-Price est inférieure à celle obtenue par la mesure de l'absorption à 328 my. Ce résultat a été confirmé par Van BEvER [40]. :

- Raouz et JANOT [20] ont montré que le calciférol — et ie

généralement les stérols non saturés — peuvent inhiber la réaction.

de Carr et Price mais cette inhibition n'intervient que lorsque

ces substances sont en grand excès par rapport à la vitamine A.

Ce n’est pas le cas pour le lait. D’autre part, les acides gras non.

saturés qui pourraient jouer le rôle d’inhibiteurs sont éliminés par la saponification.

On peut donc admettre que les substances insaponifiables du

lait n’ont pas d’action inhibitrice sur la réaction de Carr-Price. Nous avons: vu également, que depuis les travaux de MEUNIER et RaouL et Raourz et JANOT il est possible de doser séparément le carotène et la vitamine A. On ne peut donc plus reprocher à la réaction de Carr et Price son manque de spécificité.