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Notons enfin que l’intensité de la coloration bleue produite pendant la réaction de Carr et Price suit la loi de Beer.
En résumé, la réaction de Carr et Price appliquée aux insaponifiables de lait et de colostrum donne des résultats qui ne diffèrent pas généralement de plus de 35% des chiffres fournis par la méthode spectrophotométrique.
Les chiffres trouvés pour lé carotène sont plus élevés par la
. méthode colorimétrique que par la méthode spectrophotométrique,
Dans la suite de ce travail, nous avons toujours effectué le
dosage de la vitamine A par la réaction de Carr et Price modifiée
par M£euntrer et Raouz. La technique expérimentale était rigoureusement respectée dans toute la série des dosages. Les résultats
: obtenus sont donc comparables en toute rigueur, et c’est d’ailleurs leur valeur relative plus que leur valeur absolue qui importe dans
les expériences exposées plus loin. Comme, d’autre part, l’accord de la méthode adoptée avec la méthode spectrophotométrique est assez satisfaisant, nous disposons d’une méthode offrant des garanties de justesse. ;
Cette méthode présente également des avantages de commodité et de rapidité. Elle peut être appliquée par un personnel non spécialisé ; l’interprétation de la courbe cinétique est en effet fort simple en comparaison de celle que nécessite la’ méthode spectrophotométrique.
Pour terminer, nous rappellerons le mode opératoire détaillé
que nous avons employé.
Mode opératoire pour le dosage de la vitamine A et du carotène dans le lait et le colostrum.
Nous opérons nos dosages à partir de 50 em* seulement de lait,
Saponification et extraction.
50 cm de lait bien homogénéisé par agitation modérée sont additionnés de 10 grammes de potasse dans 5 cm° d’eau, puis de 50 cm° d'alcool à 96°, dans un Erlenmeyer de 250 cm muni d’un réfrigérant ascendant. On porte au bain-marie bouillant pendant 2 heures. Après refroidissement, le lait saponifié est mis dans une ampoule à décantation de 500 em et extrait par 50, 50 et 50 cmÿ d’éther de pétrole 5 (P. E. 35-60).
Les trois extraits réunis sont lavés en versant cinq fois 250 cmÿ
- d’eau sans agiter par retournement.
On fait passer l’extrait lavé dans un Erlenmeyer de 200 cm° dont le fond est garni de sulfate de sodium anhydre. On abandonne à l'obscurité, et mieux, à la glacière 2-39 pendant plusieurs heures.
On filtre. On évapore au bain-marie sans dépasser 800 et à l’abri de la lumière. 4
Lorsqu'il ne reste plus que quelques centimètres cubes d’extrait, on transvase dans un petit cristallisoir à bec et évapore sous vide (pompe à vide ou trompe à eau munie d’un barbotteur à acide sulfurique), le dessiccateur, étant garni d’anhydride phosphorique: On évapore à sec, puis on laisse sous vide quelques heures à l’abri de la lumière.
On reprend Dane HE Be par du chloroforme rectifié sur chlorure de calcium et recueilli sur chlorure de calcium.
On ajuste en fiole jaugée de 5, 10 ou 20 cm® selon la teneur présumée du lait en vitamine A, de façon à opérer à concentration sensiblement constante.
La réaction s'effectue sur 0 em° 5 de cet extrait, dans la cuve pour microdosage de l’électrophotomètre de P. Meunier (diaphragme 4).
Le mode de calcul a été exposé par MEUNIER et RaouLz [21].
Cas du colostrum..
25 em de colostrum seulement sont nécessaires pour le dosage. Saponifier avec 5 grammes de potasse seulement et RRAAUeE comme précédemment.
Dosage du carotène et de la vitamine A dans le sang.
Le sang est recueilli sur oxalate. Effectuer le dosage sur le plasma selon la technique de RaouL et JANoOT [20].
Additionner le plasma provenant de 20 cm$ de sang de 10%
en volume de lessive de potasse et chauffer une demie heure à reflux au bain-marie bouillant, en agitant de temps en temps.
Refroidir sous courant d’eau, ajouter 5 à 7 em$ d’alcool à 959 et :
extraire par 50, 50, et 50 cmÿ d’éther de pétrole. Nous avons substitué l’éther de pétrole à l’éther préconisé par RAOUL et JANor. Continuer les opérations comme il a été indiqué pour le lait.
