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un coefficient d’erreur de l’ordre de 20 à 30% dans de bonnes conditions expérimentales.

B. Méthode physique

Méthode spectrophotométrique dans l’ultra-violet.

Les produits riches en vitamine A présentent dans l’ultraviolet, à 328 mu, une absorption caractéristique.

Rappelons que la loi de Beer-Lambert régit l'absorption :

log + —"Eel.

E : coefficient d’absorption, Jo : intensité originelle de la radiation, I : nouvelle intensité, 1 : épaisseur, e: concentration.

Pratiquement 1 —.1 c = 1%.

CHEVALLIER et DuBouroz [12] ont proposé une nouvelle méthode de dosage basée sur cette propriété. |

L’appareil utilisé mesure l’intensité de la lumière ultra-violette transmise par la solution. Elle est dispersée par un monochromateur et mesurée à l’aide d’une cellule photoélectrique sensibilisée par un relai fluorescent au salicylate de sodium. Le courant électrique produit est amplifié, puis mesuré.

On peut aussi employer la méthode spectrographique qui consiste à impressionner une plaque photographique par les radiations ultra-violettes. Le spectre est reproduit sur la plaque. Si l’on intercale sur le faisceau incident une substance absorbante, on perçoit les variations du noircissement qui correspondent à l’absorption.

On étudie les spectrogrammes obtenus en mesurant le noircissement de la plaque à l’aide d’une cellule photoélectrique, ou plus simplement par l’emploi d’un photomètre duplicateur gradué directement en densités optiques. |

CHEVALLIER et CHABRE [13] ont observé que l’irradiation, au moment de la lecture de l’absorption avec le dispositif spectrophotométrique est elle-même suffisante pour provoquer des modifications dans la courbe. Les mêmes auteurs trouvent que la présence d’acides libres ou de pigments caroténoïdes peut diminuer. la précision des mesures. Dans ce dernier cas, on peut employer la correction préconisée par DRUMMOND en tenant compte de

LLOE l’absorption à 428 my. Ce facteur n’intervient que lorsque coexistent des quantités importantes de carotène et de vitamine A. CHeVALLIER et DuBouLoz [14] ont étudié la destruction photochimique de la vitamine A en milieu alcoolique. Les auteurs aboutissent à deux conclusions :

1. L’irradiation de la vitamine A par À — 325 my produit une transformation suivant la loi,de Grothus-Draper (la destruction de la vitamine A est proportionnelle à chaque instant à la quantité de lumière que cette substance retient).

2. L’ordonnée représentant l’absorption pour À — 325 my de ce produit est égale, à 1/100€ près, au 2/3 de l’absorption de la vitamine À disparue. Ils soulignent que le dosage de la vitamine A par la seule évaluation de l’ordonnée à 325 my peut entraîner de très grosses erreurs.

L'emploi de cette méthode comporte deux restrictions importantes : on ne peut l’utiliser que si la vitamine A est la seule subsstance détruite par l’irradiation ; on le reconnaîtra à l’invariance des points 365 et 290 ; si ces points se déplacent dès le début de l’expérience, il faut conclure que le mélange contient des substances sensibles au rayonnement ultra-violet : la méthode est inapplicable.

D'autre part, il faut arrêter la destruction photochimique au stade primaire, c’est-à-dire que les produits A’ et B’ résultant de l’irradiation ne doivent se trouver eux-mêmes détruits.

Dans ces conditions, le déplacement de l’ordonnée à 325 mu, multipliée par 3 indique véritablement la teneur de la solution en vitamine A seule. L’irradiation de l’alcool alcalin conduit à des résultats tout à fait différents.

Mais Re DuBouLoz et MATHERON [15] trouvent que la règle des 2/3 n’est pas applicable à la vitamine A'sous la forme alcool. Elle est valable pour les milieux non saponifiés.

Le dosage de la vitamine A sous la forme alcool peut être obtenu en faisant agir un rayonnement ultra-violet continu jusqu’à stabilisation de la courbe d’absorption. Cette opération doit répondre à deux critères :

1. La différence obtenue après stabilisation entre la courbe initiale et la courbe finale doit représenter l’absorption CAS: ristique de la vitamine A.

2. Cette réaction photochimique doit s’opérer avec la vitesse caractéristique de transformation de la vitamine A.

Ces auteurs remarquent qu’on pourrait également, dans le cas de milieux peu absorbants dans la région 250 my, utiliser une particularité de la destruction photochimique de la forme alcool

oO l’ordonnée à 250 my s'accroît, puis s’arrête à une valeur maximum pour ensuite diminuer.

L'écart entre la position initiale et le maximum est considérable. La mesure de cette variation pourrait servir de référence. .

Dosage du carotène

Le 8 carotène présente des maxima d’absorption à 521, 484 et 452 my (dans l’éther de pétrole et le sulfure de carbone). II est à remarquer que la nature du solvant influe sur l’intensité et la position des maxima d’absorption dans l’ultra-violet.

C. Méthode physico-chimique basée sur la réaction de Carr et Price

Le principe de cette méthode colorimétrique est la mesure de l’intensité de la coloration bleue fournie par ce réactif de Carr et Price avec une solution chloroformique d’insaponifiable du

produit étudié. Le coefficient d'extinction à 620 my est E — 5.000. .

Il a l’avantage d’être environ trois fois plus élevé que celui de l’absorption directe à 328 my. Cette réaction fut appliquée au dosage de la vitamine À mais donna bientôt prise à de nombreuses critiques. |

a) La spécificité.

| La réaction de Carr et Price est donnée aussi par de nombreux caroténoïdes, à côté de la vitamine A. D’après RoSENTHAL et ERDELY [16], l’addition de pyrocatéchol permettrait de différencier la vitamine À des caroténoïdes. LEVINE et RICHMANN [17] trouvent que la réaction de Carr et Price est donnée par les composés monohétérocycliques substitués en 5 : pyrrole, thiophène, furanne. La réaction colorée est modifiée et souvent intensifiée par addition d’anhydride acétique. .

Meuxter et RAoUL [5] ont étudié la cinétique de la réaction de Carr et Price.

En présence d’une certaine quantité d’anhydride acétique, seule la vitamine A fournit une courbe rapidement descendante, le carotène ne donnant qu’un plateau.

Grâce à cette réaction, on peut doser commodément, avec l’électrophotomètre de P. MEUxNIER, le carotène à côté de la vitamine À.

La vitamine A dite «cyclisée » donne cependant la réaction de Carr et Price, bien qu’elle soit dépourvue d'activité biologique (Duzou, VinET, MEUNIER [18]).

b) Les inhibiteurs.

RyGx [19] à isolé à partir de certains échantillons d’huile de foie de morue un acide gras non saturé capable d’inhiber la réaction de Carr et Price. EMMERIE arrive à la même conclusion. Le beurre contiendrait une substance analogue.

RaouL et JANOT [20] ont étudié cette question en détail. Ils trouvent que le cholestérol n’a pas d’action inhibitrice.

Le degré de saturation du stérol compte seul dans l’inhibition.

Le calciférol, à la dose de 50 y pour 2 U. I. de vitamine A exerce une nette action inhibitrice. L’ergostérol donne une coloration rose qui cause une légère erreur par défaut.

Les auteurs concluent que, dans le cas du sang, l’inhibition est faible ou nulle et n’en tiennent pas compte.

c) Appareillage.

L'appareil le plus utilisé en France est l’électrophotomètre de MEUNIER dont on trouvera une description complète dans l’ouvrage de Meunier et RaouL [21] et dans les publications antérieures. «ll repose sur le montage en opposition de deux cellules au sélénium et sur la compensation des effets photoélectriques par des procédés purement optiques qui laissent inchangé pendant la durée de la mesure le flux lumineux reçu par chaque cellule. »

Les deux flux lumineux opposés sont réglés avant chaque mesure, de façon que les courants photoélectriques qu’ils engendrent s’annulent. Puis l’on introduit dans l’un des circuits la cuve contenant la solution et l’on compense cette surcharge en déplaçant un coin photométrique à l’aide d’un tambour. L’appareil étant étalonné au préalable en carotène et en vitamine A, la lecture des divisions du tambour permet de calculer facilement la concentration

‘de chacun de ces produits.

d) Calculs.

On mesure les absorptions avec l’écran orangé et avec l’écran bleu des solutions suivantes :

Orangé Bleu

CHCF + 1 goutte d’anhydride acétique ........ a b CHCÉ + 1 goutte d’anhydride acétique + 0 em° 5 de la solution extractive ...... e 10