PRÉPARATION DU MILIEU DE BORDET

C’est un milieu glycériné à la pomme de terre, additionné vingtquatre ou quarante-huit heures avant son emploi de sang frais défibriné. Pour l’obtenir, on procède ainsi :

— Mettre à feu doux, dans une capsule de porcelaine 500 gr. de pommes de terre dans un litre d’eau glycérinée à 4 % jusqu’à obtention d’une purée et retour au volume primitif (1 litre). On décante ou on passe à travers un linge fin, puis on ajoute à la partie liquide du mélange trois fois son volume d’eau salée à 6 %o.

— D'autre part, on lave de la gélose ordinaire préalablement pesée. On l’exprime à travers une gaze et on l’incorpore à l’extrait glycériné dans la proportion de 3 %. On chauffe le tout dans une capsule, de façon à obtenir un liquide homogène.

— Le milieu ainsi préparé est filtré en autoclave Ouvert sur papier Chardin ébouillanté. On répartit en petits ballons de 100 à 300 cm° bouchés au coton cardé et on stérilise pendant un quart d'heure à 120°. Ainsi est constitué un « milieu de base » pouvant se conserver indéfiniment.

— On prélève ensuite aseptiquement du sang de cheval, de lapin, ou du sang humain que l’on défibrine en l’agitant pendant une dizaine de minutes dans un ballon stérile contenant des perles de verre. Le sang doit être frais, recueilli au maximum goixante-douze heures avant l’utilisation du milieu. Au moment de la préparation, le ballon de sang est mis dans un récipient à 40-45°, On fait fondre au bain-marie le milieu

de base et l’on attend qu’il soit revenu à une température de 45° environ. Sang et milieu de base sont alors mélangés intimement en quantités égales : on coule en boîtes de Pétri. Elles doivent être utilisées dans les quarante-huit heures qui suivent.

Certains auteurs ont insisté sur la nécessité d’atteindre un Ph déterminé. OLGA PowrrzxY (20) affirme qu’un milieu de Ph 5 élimine de nombreux germes saprophytes. Malheureusement, la culture du bacille de BoRDET y est aussi beaucoup plus difficile, JULIEN MARIE (21), après divers essais, adopte un Ph compris entre 7 et 7,5. En réalité, ce degré est automatiquement obtenu au moment où l’on ajoute au milieu de base une quantité égale de sang qui agit comme tampon.

D'autre part, Joux Hays BayLEy (0) remplace la pomme de terre elle-même par l’amidon de la fécule. Ce changement favoriserait la pullulation des cultures spécifiques et les ferait éclore plus rapidement. Nous n'avons pas fait d'essais personnels à ce sujet.