PREMIÈRE PARTIE I. — Constitution de l'oeuf non fécondé

La constitution de l'œuf des Salmonidés est aujourd'hui bien connue, grâce aux recherches de Vogt (191), Lereboullet (ll2), (Ellacher (123) et His (82); mes propres observations chez la Truite confirment en grande partie celles de His chez le Saumon.

L'œuf de la Truite, pris dans la cavité abdominale lorsqu'il vient de se détacher de l'ovaire, est assez volumineux, il mesure de 4 à 6 millimètres de diamètre. Sa couleur est jaune citron clair, et il est alors à peu près transparent ; sa consistance est assez molle, mais il devient rapidement dur et très élastique lorsqu'il a séjourné quelque temps dans l'eau. Ce changement de consistance est dû, ainsi que Miescher (118) l'a démontré, aune absorption d'eau qui rend l'œuf turgescent et tend fortement la capsule. Miescher a trouvé, en effet, qu'un œuf de Saumon, du poids de 127 milHgrammes au sortir de la cavité abdominale, pesait 133 milligr. après quelque temps d'immersion dans l'eau; mais nous verrons plus loin que l'eau absorbée ne pénètre pas dans l'intérieur de l'œuf.

Si l'on fait une coupe d'un œuf de Truite, pris dans la cavité abdominale et durci, on trouve en allant de la périphérie vers le centre : 1*^ une membrane épaisse (capsule de l'œuf) ; 2° une zone périphérique protoplasmique ; 3° une masse centrale (vitellus nutritif).

La membrane externe est assez épaisse et mesure de 30 à 33 a; elle est résistante et élastique. Examinée au microscope, elle se montre traversée par des canalicules très fins, qui ont été découverts par J. Millier (l20).

Suivant Stochmann (180), les canalicules de cette membrane

n\iuraient pas des limitos bien nettes et présenteraient une série de dentelures inégales; entre les canalicules se trouve une substance homogène, Owsjannikow (125) admet dans l'enveloppe de l'œuf trois couches : une mince membrane externe finement ponctuée, une couche moyenne striée et une membrane mince et transparente. La surface de l'œuf serait recouverte de très petites proéminences. Malgré Temploi de forts grossissements, je n'ai pu voir les trois couches décrites par Owsjannikow, ni les dentelures des canalicules indiquées par Stochmann.

L'enveloppe de l'œuf a reçu des noms différents suivant les auteurs. Vogt (l9l) Ta ai^-pelée membrane coquUlière, nom évidemment impropre, car cette enveloppe existe déjà dans le follicule ovarien, tandis que la membrane coquillère des œufs des Sauropsides ne se forme que dans l'oviducte. Leuckart(ll4) et Lereboullet (ll2) lui donnent le nom de chorion et admettent qu'elle est une production vitelline. J. Millier (l20)la désigna sous le nom de membrane vitelline. Allen Thomson (l88) l'assimila avec raison à la zone pellucide de l'œuf des Mammifères. C'est aussi sous le nom de membrane vitelline que la désignent Kœlliker (97), Gegenbaur (53), Waldeyer (l92), Ed. Van Beneden (19) et Kolessnikow (95). QEllacher (123) admet que c'est un chorion et décrit une membrane vitelline au-dessous de cette première enveloppe. His (82) appelle la membrane striée, capsule de l'œuf, et C. K. Hoffmann (89) lui donne le nom de 2:oneracJîVe. Nous préférons, ainsi que le fait M. le professeur Balbiani (7), conserver la dénomination ''de His et appeler capsule l'enveloppe externe de l'œuf; ce nom a l'avantage de ne rien préjuger de la nature et de l'origine de cette membrane, qui a été considérée par presque tous les observateurs comme un produit de différenciation du vitellus, mais que Waldeyer regarde comme un produit de sécrétion du follicule ovarique. G. K. Hoffmann, qui a étudié récemment l'ovogénèse chez plusieurs Poissons, se range à l'opinion la plus généralement adoptée et admet que la capsule de l'œuf est un produit du vitellus et est par conséquent une véritable membrane vitelline. N'ayant pas fait de recherches personnelles sur ce sujet, je ne saurais me prononcer en faveur de l'une ou de l'autre opinion.

La capsule de Tœuf présente toujours une petite ouverlure, micropyle, qui a été découverte par Doyère (38), en 1850, sur l'œuf du Syngnathus ophidium et qui a été vue ensuite par Cari Bruch(28), en 1855, chez le Saumon, la Truite, la Carpe et le Brochet. His (82) a bien étudié la forme du [micropyle chez les Salmonidés ; celui du Saumon diffère un peu de celui de la Truite. Cette ouverture est située au fond d'une petite dépression en forme de cuvette, qu'on aperçoit facilement à la surface externe de la capsule surtout sur des œufs qui n'ont pas encore été immergés dans l'eau. A un faible grossissement, le micropyle apparaît au fond de la cuvette comme un petit point noir. (Planches, fig. 1.) Si l'on pratique une coupe à travers la capsule au niveau du micropyle, on constate que la paroi interne de la capsule fait saillie à ce niveau dans l'intérieur de l'œuf. Chez le Saumon, au fond de la cuvette, il existe une sorte de petit cratère assez évasé, qui se termine par un canal très étroit; chez la Truite, ce cratère est beaucoup moins large; ses bords sont taillés à pic, et le canal qui le termine est plus large que dans le micropyle du Saumon. Le micropyle de l'Épinoche se rapproche de celui du Saumon, mais il en diffère en ce que le bord externe de la cuvette présente plusieurs phs saillants.

C.K. Hoffmann(89)amesuréavecsoinlediamètredumicropyle l'œuf de quelques Poissons : il a trouvé pour le Hareng 0,25 \>-\ chez le Crenz7a&ri*s^Hseï^s, l'orifice interne mesure 0,2 i^t; la tête du spermatozoïde du Hareng n'a que 2 (x, d'après Kupffer ; celle du C^^enilaWus mesure 0,17 ^ d'après Hoffmann. 11 ne peut donc passer qu'un seul spermatozoïde à la fois par le canal micropylaire, comme His l'avait déjà établi pour le Saumon.

La position du micropyle est fixe. Cet orifice est toujours situé, sur l'œuf pris au moment de la ponte, au-dessus du germe. Après la ponte, le vitellus se rétracte et peut exécuter un mouvement de rotation dans l'intérieur de la capsule, de sorte que les rapports entre le micropyle et le germe sont changés. Il en est de même dans les œufs non fécondés, qui ont séjourné pendant quelque temps dans l'eau.

Au-dessous de la capsule de l'œuf, se trouve une couche décrite par Lereboullet (112) chez la Truite. «Des œufs coagulés immédiatement après la fécondation offrent, dit cet auteur, la

coinptisition suivante : il existe à riiii des [tôles de l'œuf, une pellicule niendiraueusc, amorphe, fenôLrée, c'esL-à-dire utlVant une multitude de trous que remplissaient des vésicules graisseuses : celles-ci s'échappent pendant la préparation de la pièce, etc. » His(82) a donné à cette zone périphérique le nom de couche corticale et la décrit à peu près comme Lereboullet, mais il a constaté qu'elle entoure complètement le vitellus.

C'est dans la couche corticale, formée par une substance protoplasmique finement granuleuse, que sont contenus les gros globules, rougeàtres chez le Saumon, jaunâtres chez la Truite, qui donnent en partie aux œufs de ces animaux leur coloration particulière. (Planches, fig. 4, h.) Tous les auteurs, jusqu'à His, considéraient ces globules comme étant de nature graisseuse. His ayant vu que les éléments augmentent de volume et pâlissent quand on les met au contact de Tcau, pensait qu'ils étaient formés de lécithine ; mais Miescher (118) a montré qu'ils ne renferment pas cette substance. Les recherches que j'ai faites sur la nature des éléments d'apparence huileuse de l'œuf des Salmonidés m'ont donné les résultats suivants :

Chaque globule isolé est entouré d'une mince couche de protoplasma granuleux, comme His l'avait déjà décrit et figuré; ce protoplasma est le même que celui qui constitue la couche corticale. Les éléments huileux sont beaucoup moins denses que l'eau et plus denses que l'alcool absolu ; ils suffisent à faire surnager un germe durci à la surface de l'eau, lorsqu'ils restent attachés à la face inférieure de ce germe. Ils sont insolubles dans l'eau; leur augmentation de volume au contact de ce liquide est due au gonflement ou à la disparition de leur enveloppe protoplasmique ; ils s'étalent alors sur la lame de verre qui les supporte ; ils prennent le même aspect lorsqu'on les comprime légèrement à l'aide d'une lamelle.

Lorsqu'on écrase des œufs de Saumon dans l'eau on voit surnager à la surface du liquide une couche huileuse, rosée, qui est composée de globules plus ou moins gros. Les globules ne se coagulent pas sous l'influence de la chaleur dans des œufs portés à 100°, ils restent liquides, mais ils renferment alors de fines granulations réfringentes dans leur intérieur.

La matière huileuse est insoluble dans la potasse ; elle n'est

pas coagulée par les acides concentrés; elle est 'soluble clans Téther et le chloroforme lorsqu'on a déchiré mécaniquement la couche albuminoïde qui entoure les globuhs ; elle noircit fortement sous rinfluence de l'acide osmique et plus ou moins rapidement selon le volume des vésicules. Lorsqu'on traite les gouttelettes huileuses par l'alcool absolu, leur matière colorante est dissoute et elles conservent une teinte légèrement jaunâtre. Toutes les réactions que présentent les globules nuileux des œufs de Salmonidés permettent donc d'admettre que ces éléments sont formés d'une matière grasse spéciale. D'après Valenciennes et Frémy (190), cette matière serait une huile phosphorée(4).

Il existe aussi dans la couche corticale des éléments globuleux, pâles, mous, incolores et de dimension variable, que His considère comme des noyaux, en se fondant sur une analyse de Miescher qui prétend que ces corps sont constitués par de la nucléine. Ces prétendus noyaux ne se colorent pas sous l'influence des réactifs employés d'ordinaire pour décider la présence des noyaux des cellules; ils paraissent être des vésicules formées par une substance albuminoïde moins granuleuse que celle de la couche corticale.

Au-dessous du micropyle, la couche corticale présente un épaississement assez considérable, qui constitue le germe. Celui-ci est formé par une substance très finement granuleuse, à peu près transparente, à l'état frais, et très peu consistante; aussi, lorsqu'on l'extrait de l'œuf, il s'étale en diffluant et émet dans tous les sens de nombreux prolongements, qui lui donnent l'apparence d'un Rhizopode. L'alcool et les acides coagulent le germe et la couche corticale qui deviennent beaucoup plus consistants et peuvent alors être extraits de l'œuf; mais tandis que le germe devient opaque, la couche corticale garde en partie sa transparence.

La masse centrale de l'œuf, le vitellus, est constituée par une substance hyaline, homogène et visqueuse, ne renfermant aucun élément figuré. Cette substance, au contact de l'eau pure, de l'alcool et des acides, se coagule immédiatement en devenant blanche et opaque. L'acide acétique cristallisable la

(1) D'après Miescher, l'huile rosée des œufs de Saumon ne contiendrait pas trace de phosphore (V. le Mémoire de His (8 3) p. 7).

coagulo en lui conservant sa transparence, le même acide acétique dilué dans Tcau dissout le vitellus, ainsi que je l'ai déjà indiqué; il en est de même des alcalis, de la liqueur de Mûller et de l'eau fortement salée. L'alcool, qui coagule la substance vitelline lorsqu'il est mis directement en contact avec elle, la durcit sans la rendre opaque lorsqu'il agit lentement à travers la capsule de l'œuf.

Yalenciennes et Frémy (l90) ont trouvé dans le vitellus des œufs de plusieurs Poissons, entre autres du Saumon, une substance particulière, à laquelle ils ont donné le nom d'ichtuline\ sa composition se rapproche de celle de l'albumine, elle contient du soufre et du phosphore. Ce serait l'ichtuline qui occasionnerait en se précipitant l'opacité des œufs des Salmonidés, lorsqu'on les soumet cà l'action de la chaleur, de l'eau, de l'alcool, etc.

L'eau coagulant le vitellus et l'œuf, plongé dans l'eau, absorbant une certaine quantité de liquide, comme le prouvent les pesées faites par Miescher, on doit naturellement se demander pourquoi l'œuf conserve sa transparence après la ponte. Ce phénomène est dû à ce que l'eau qui pénètre dans l'œuf à travers le micropyle et les canaux poreux de la capsule, n'arrive pas jusqu'au vitellus, qui est entouré par une couche protoplasmique. L'eau s'accumule entre la capsule et la couche corticale, ainsi que le démontrent les mouvements de rotation intracapsulaires dont est susceptible la masse de l'œuf après quelque temps d'immersion dans l'eau. Les mouvements de rotation sont au contraire impossibles dans les œufs pris dans la cavité abdominale. Un autre fait qui prouve bien que c'est la couche corticale^ qui protège le vitellus, c'est que, quand cette couche est rompue, ce qui arrive souvent lorsque l'œuf est soumis à une trop forte pression, le vitellus se coagule immédiatement et l'œuf devient opaque et blanc. On observe le même phénomène quand l'œuf est envahi par les moisissures ; celles-ci traversent la capsule et perforent la couche corticale.

Jusqu'à présent nous avons considéré l'œuf pris dans la cavité abdominale ou récemment pondu mais non encore fécondé. Les anciens embryogénistes admettaient que le germe n'existe pas dans l'œuf mûr et qu'il n'apparaît qu'après la ponte. Coste (33) pensait que chez les Poissons osseux les éléments

]ila-;liques et les éléments iiulritifs sont mêlés dans l'œuf jusqu'au moment de la ponte et que, sous Tinfluence de la fécondation, il se fait un départ entre les deux sortes d'éléments, ayant pour effet de rassembler en un point de l'œuf les éléments plastiques qui constituent le germe. Telle était aussi ropinion de Lereboullet (112), du moins pour l'œuf des Salmonidés. Car cet embryogéniste avait très bien constaté que le germe existe avant la fécondation chez la Perche et le Brochet. M. Gerbe (55) a également avancé récemment que ce n'est qu'à la suite de la ponte, après quelque temps de séjour dans l'eau, indépendamment de la fécondation, que le germe se manifeste dans l'œuf des Poissons osseux. His, au contraire, a observé le germe formé, peu visible il est vrai, dans l'œuf du Saumon avant la ponte. Mes propres observations ont confirmé celles de His, et elles m'ont permis en outre de suivre le mode de formation du germe chez la Truite (70).

L'œuf ovarien mûr a une constitution tout à fait différente de celle de l'œuf Y)ris dans la cavité abdominale. Si Ton examine, en effet, un œuf ovarien quelque temps avant la rupture du follicule, on voit, dans la région micropylaire, la vésicule germinative située très près de la surface de l'œuf. Cette vésicule est entourée de petits globules, à contours finement granuleux, qui augmentent de volume à mesure qu'on s'éloigne de la vésicule germinative. (Planches, fîg. 1 et 3.)

Les éléments granuleux sont bientôt remplacés par des vésicules plus grosses, transparentes, renfermant quelques vacuoles et de petits globules réfringents se colorant en noir par l'acide osmique. Les globules granuleux sont les éléments plastiques de l'œuf et les vésicules transparentes constituent la partie nutritive; les éléments plastiques sont donc, dans l'œuf ovarien, distincts des éléments nutritifs et rassemblés autour de la vésicule germinative; on n'en trouve pas dans le reste de l'œuf.

J'ai eu l'occasion d'examiner les ovaires d'un Gymnote mort dans le laboratoire de M. le professeur Marey; les œufs présentaient une structure des plus intéressantes et permettant de saisir la formation des éléments plastiques et vitellins. Leur contenu était formé de petites vésicules de volume et d'aspect variables. Les unes avaient un double contour brillant et ren-

fermaient dans leur intérieur une vésicule }»lus petite, brillante, ne remplissant pas toute la cavité. D'autres vésicules contenaient trois ou quatre petites vésicules secondaires. Les plus grands éléments présentaient dans leur intérieur un grand nombre de petites vésicules secondaires, pressées les unes contre les autre? et remplissant toutes la cavité limitée par le double contour A côté d© ces éléments il y avait des vésicules plus pâles, à simple contour, remplies de granulations très fines et présentant quelquefois un ou deux globules réfringents. (Planches, fig. 5.) Ces derniers éléments ressemblent aux vésicules du jaune de l'œuf des Oiseaux. Enfin on voyait aussi très distinctement dans les œufs ovariens du Gymnote la vésicule germinative et la vésicule embryogène.

Hoffmann (89) a également constaté que les œufs ovariens du Hareng et de quelques autres Poissons de mer renferment de grains et de sphères vitellines simples ou composées, formées aux dépens du protoplasma de l'œuf.

Après la déhiscence du follicule ovarien, l'œuf tombé dans la cavité abdominale présente un tout autre aspect. La vésicule germinative a disparu; les vésicules constituant la partie nutritive se sont fusionnées et ne forment plus qu'une masse visqueuse homogène. Les globules huileux se sont rassemblés à la périphérie de l'œuf et constituent de grosses gouttelettes réfringentes de volume variable, plus nombreuses dans la région micropylaire que dans le reste. Enfin les éléments plastiques se sont aussi fusionnés en une masse finement granuleuse, irrégulièrement étalée au-dessous du micropyle : c'est le germe. (Planches, fig. 2 et 4.) .

En traitant l'œuf par l'acide acétique, on voit nettement apparaître la matière plastique qui devient opaque; on peut alors constater que cette matière est plus abondante autour des gouttelettes huileuses, comme le montre la figure 1 (planches). Après la ponte, la partie plastique se concentre en une lentille biconvexe qui fait sailhe au-dessus du vitellus et, qui se forme dans le voisinage du micropyle, comme l'a décrit M. Gerbe.

Chez rÉpinoche on observe les mêmes phénomènes, mais au moment de la ponte la matière plastique est encore plus étalée que chez la Truite et recouvre presque toute la moitié du vitellus, elle se concentre en une lentille cicatriculaire,

l4 RECHERCHES SUR LE DÉVELOPPEMENT

après la fécondation, par suite de contraction de toute la masse de l'œuf.

Un mode de constitution du genre semblable à celui que j'ai observé chez la Truite a été signalé, en 1864, par M. le professeur Balbiani (6). Dans l'œuf de Grenouille rousse, du Géopliile et dans Tovulede la Femme, il a vu se former autour de la vésicule embryogène des globules dans lesquels apparaissent des granulations très fines. Puis (ces globules se détachent de la vésicule, se désagrègent à la périphérie de l'œuf ?À les granulations forment une couche granuleuse qui constitue le germe. Chez les Pleuronectes, M. Balbiani a constaté aussi que la couche plastique granuleuse se forme également autour de la vésicule embryogène. Dans l'œuf de la Truite, c'est autour de la vésicule germinative que se constituent les globules plastiques; mais n'ayant pas fait de recherches personnelles sur le développement de l'œuf ovarien, je ne m'occuperai pas ici de la genèse de ces éléments.

Les éléments vitellins des Poissons osseux ne se fusionnent pas toujours au moment de la chute de l'œuf pour constituer, comme chez la Truite, une masse vitelline homogène. Hoffmann a vu, en effet, que le vitellus du Hareng conserve son aspect vésiculeux pendant tout le développement de l'œuf. J'ai observé le même fait dans l'œuf du Lcpadogaster ; le vitellus de cet œuf renferme des vésicules transparentes, de volume variable, de forme polygonale par suite de la pression réciproque qu'elles exercent les unes sur les autres, et contenant souvent de petits globules Imileux dans leur intérieur; mais il y a aussi de gros globules huileux libres au centre du vitellus, soUs le disque gcrminatif.

Jusqu'ici je ne me suis pas occupé d'un élément important de l'œuf, de la vésicule germinative. C'est qu'en effet, ainsi que je l'ai dit plus haut, cette vésicule n'existe plus dans l'œuf pondu ; mais on la trouve dans l'œuf ovarien et il me reste à étudier son mode de disparition.

De tous les phénomènes qui accompagnent la mctturation de l'œuf, il n'en est pas qui ait soillevé plus de discussions que celui de la disparition de la vésicule germinative, et les œufs des Poissons osseux ont été l'Objet de plusieurs travaux à cet égard.

DES POISSONS OSSEUX là

Vo£^t(i9l) a vu que, chez la Palée (Coregonus palea), dans l'œuf mûr on ne trouve plus aucune trace de la vésicule germinative « quoique, dit-il, on ne puisse douter de son existence jusqu'à la fécondation. » Il pense que la vésicule se maintient dans le disque huileux et que les nombreuses taches germina- Lives qu'elle contient continuent à se développer après la fécondation et deviennent les premières cellules de l'embryon.

Lereboullet (lll), chez le Brochet, a constaté aussi la disparition hâtive de la vésicule germinative, disparition qui, d'après lui, aurait lieu avant que l'œuf ait atteint sa maturité et ses dimensions ordinaires; il dit avoir cherché en vain la vésicule sur plus de cent œufs, mesurant de 1 millimètre à l™™,^ et provenant de divers individus; mais il a constamment trouvé près de la surface de l'œuf un ou plusieurs amas irréguliers, devenant blanchâtres, par la coagulation, comme la vésicule elle-même dans les jeunes ovules. 11 pense que ces amas sont les débris de la vésicule germinative. « A mesure que l'œuf approche de la maturité, les débris de la vésicule germinative se dispersent sous la forme des flocons jaunâtres dans toute l'étendue de l'œuf et se mêlent aux éléments du vitellus. »

Les observations de Lereboullet (l 12) sur les œufs de la Truite sont intéressantes à rappeler, car j'ai pu en vérifier en grande partie l'exactitude. Dans les œufs mûrs ou presque mûrs, cet auteur a vu la vésicule germinative vidée et ratatinée, tout à fait à la surface. Sur des œufs coagulés, il a trouvé à la surface un petit disque blanc, très apparent, visible à travers le chorion et qu'on pouvait facilement détacher avec des aiguilles. « Le disque mesure 0""",G. En le déchirant on voit qu'il constitue un véritable sac vide, aplati, chiffonné; cependant il contient encore assez souvent des amas de corpuscules celluliformes, granuleux, dont le diamètre varie de 0"''",00o à 0'°'°,16 et dont quelques-uns sont nucléés. « Dans les œufs pondus, Lereboullet n'a trouvé dans le vitellus que quelques lambeaux jaunâtres, composés de vésicules brillantes et qu'il croit provenir des débris de la vésicule germinative.

CEUacher (122), en 4872, a décrit la disparition de la vésicule germinative chez la Truite, et \\ a voulu généraUser les phénomènes qu'il avait observés, en admettant un môme mode de disparition chez tous les Vertébrés. Suivant lui, plus ou moins

16 RECflERCHES SUR LE DÉVELOPPEMENT

tôt avant la fécondation et quelquefois après, la vésicule gcrminalive, qui s'est rapprochée de la périphérie de l'œuf pendant la maturation, arrive au milieu du germe, au-dessous du micropyle. La vésicule s'ouvre alors comme une bourse et s'étale de telle sorte que sa membrane forme une espèce de voile à la surface du germe : ce voile présente des stries très fines perpendiculaires à sa surface; quant au contenu de la vésicule, il s'échappe comme une masse floconneuse. I^es tâches germinatives restent enchâssées dans l'épaisseur du voile.

Pour les Poissons cartilagineux, Schcnk (167^ a vu clu^z la Uaie, la vésicule germinativc disparaître dans la cicatficulc et à sa place il a observé une cavité communiquant avec la surface par un petit orifice. Balfour (8) a observé de son côté à la surface du germe de la Raja hati/s une tâche claire formée par la membrane plissée de la vésicule germinalive : il croit que la membrane est expulsée et que le contour est absorbé surplace par le germe.

Plus récemment, (ialberla(30') a supposé que chezle PcArow/yzon la vésicule germinative disparaissait de très bonne heure dans l'œuf ovarien, au moment de la transformatinu de l'Ammocète en Lamproie , mais Scott (172) a réfuté celle cireur et a trouvé que la vésicule germinative ]iersiste ius(|u';iu iimment (le la ponte.

Salensky (163) a constaté que la vésicule gcrniiiialive de l'o'uf du Sterlet disparaissait dans les premières heures (pii suivent la i)onte. A sa place on aperçoit dans \o gei'iue plusieurs jx'tits îlnts formés par une substance traus[>arcnte et (|ui s<uit (hspersés dans la masse du germe; parleur structure, ils ressemblent à la vésicule germinative parfaite. Les modifications successives de cette dernière sont analogues â celles que Fol (50) a signalées chez les Astéries.

Tel était l'état de la (piestion lorsque j'entriquis mes rech(^rcli(>s sur la disparition de la vésicule germiiiali\(' cliez les poissons osseuv. Peiuliuit ipialre aiuiécs consécutives, au moment de la ponte, j'ai examiné un grand noiidire d'œul's île Truite, pris dans l'ovaire, dans la cjivité abdominale et immédiatement après la ponte. Huels qu(> soient les modes d'observation (pie j'aie em[»loyés, obser\alioii directi». coupes, disso-

DES l'OISSONS OSSEUX 17

cialion, quels que soient les réactifs dont je me sois servi, je n'ai pu élucider cet intéressant problème. Je suis parvenu cependant à me convaincre que la plupart des descriptions données par mes prédécesseurs, et entre autres celle d'Œllacher, sont entachées d'erreur.

Dans tous les œufs ovariens que j'ai examinés au moment de la ponte, j'ai trouvé la vésicule germinative. Sur les œufs frais elle apparaît comme une tache claire, arrondie, mesurant de 0""",45 à 0""",55 et située dans le voisinage du micropyle. (Planches, fig. 1, vg.) Dans son intérieur on voit les taches germinatives nombreuses, réunies en un petit amas au centre. Si l'on traite l'œuf par l'acide acétique, la vésicule devient opaque et beaucoup plus nettement visible. Des coupes pratiquées à travers des œufs ovariens, durcis par l'alcool ou l'acide chromique, montrent la vésicule gcrminative sous forme d'un corps lenticulaire situé à peu de distance de la surface de l'œuf et entouré des vésicules granuleuses que j'ai décrites à propos de la formation du germe. (Planches, fig. 3, vff.) La membrane de la vésicule est encore bien nette et présente un double contour; au centre se trouvent les taches germinatives qui ont quitté la portion périphérique qu'elles occupaient primitivement pour se réunir en un petit amas. Le reste de la vésicule est rempli par une substance très finement granuleuse, résultant de la coagulation du liquide qu'elle renfermait; dans cette substance on observe quelques granulations plus grosses et plus réfringentes, disséminées irrégulièrement.

Lue disposition toute semblable s'observe chez la Grenouille, dans l'œuf ovarien mûr avant la rupture du folUcule, ainsi que llertwig (78) l'a signalé. Seulement, chez les Batraciens, la paroi de la vésicule gcrminative est plissée, tandis que celle des Poissons reste tendue; les taches germinatives sont réunies aussi au centre de la vésicule.

Chez l'Épinochc et l'Épinochette, la vésicule gcrminative présente le même aspectjjuc chez la Truite et se voit nettement au-dessous du inicropTle, dans les œufs ovariens.

Je n'ai pu mnlheureusenuMit assister à la disparition de la vésicule gcrminative; malgré les nombreuses recherches que j'ai faites sur des œufs de Truite, au moment du frai, je n'ai jamais pu suriuvMidrc le moment précis où cette vésicule, si

visible dans Tœuf ovarien, se transforme probablement en noyau de Tœuf. Mes recherches, infructueuses relativement au but que je me proposais, m'ont cependant convaincu que la description donnée par ŒDacher (l22) repose sur une erreur d'observation.

J'ai toujours trouvé la vésicule germinative dans tous les œufs ovariens que j"ai examinés, même dans ceux dont le follicule commençait à se rompre; cette vésicule se présentait avec les caractères que j'ai décrits plus haut. Dès que l'œuf est tombé dans la cavité abdominale, on ne trouve plus trace de la vésicule ; la constitution de l'œuf a subi alors une transformation complète, ainsi que je l'ai déjà dit. C'est donc pendant le temps très court que l'œuf met à être expulsé du follicule ovarien que disparaît la vésicule germinative. Or, Œllacher prétend avoir observé la vésicule germinative s'ouvrir et s'étaler à la surface du germe dans les œufs pris dans la cavité abdominale, dans les œufs pondus et même fécondés. Cette simple affirmation suffit à démontrer qu'CEllacher a pris pour la vésicule germinative un aspect particulier qui s'observe quelquefois dans le germe, 11 arrive, en effet, que sous l'influence des réactifs durcissants , de l'acide chromique principalement, le germe soit soumis à une certaine pression entre la capsule de l'œuf et la masse vitelline. De petites portions du vitellus nutritif traversent alors le germe et viennent s'étaler plus ou moins à sa surface, ou former de petites taches qui pourraient être prises pour des taches germinatives. De semblables dispositions ne se voient que rarement dans les œufs traités par le liquide picroacétique.

Plus heureux que moi, C. K, Hoffmann (89) a pu récemment, sur certains œufs très transparents de Poissons osseux marins, suivre quelques-unes des phases de la disparition de la vésicule germinative. Dans les œufs mûrs de Scorpœna et de Julis^ la vésicule germinative est toujours située contre la capsule, au-dessous du micropyle ; les taches germinatives disparaissent et la vésicule ne renferme plus alors qu'un liquide dans lequel se sont dissous les nucléoles et le réseau. Bientôt la membrane d'enveloppe de la vésicule disparaît et son contenu se môle à celui de l'œuf. A la place occupée par la vésicule, apparaît un fuseau de direction semblable à celui que

Fol (50) et Hcrtwig (78) ont vu se former dans Fœuf des Echinodermcs, au moment do la disparition de la vésicule germinativc. Le fuseau de direction mesure chez le Scorpœna Qmm Q2g dc loug sur 0'"'",0145 de large; son grand axe forme avec celui de l'œuf un angle de io", et l'une de ses extrémités se trouve à Touverture interne du micropyle. Dans l'œuf des Julis, le fuseau est moins net, et dans ceux des Crenilabrus, Heliasis, Gobius, Blennius, Belone et du Hareng, Hoffmann n"a pu l'apercevoir. Le fuseau de direction donne naissance au pronucleus femelle et à un globule polaire; celui-ci ne se produirait qu'après la pénétration du spermatozoïde dans l'œuf. Hoffmann a constaté, comme moi, un changement brusque de structure au moment de la disparition de la vésicule germinative; le germe se concentre au-dessous du micropyle, le vitellus de nutrition devient homogène et les éléments huileux se séparent.

Deux auteurs américains, Kingsley et Conn (93) ont étudié aussi le développement des œufs de quelques Poissons marins, entre autres du Ctenolabrus cœruleus. Ils ont vu qu'au moment de la maturité de Tœuf, la vésicule germinative est alors invisible et que les globules vitellins disparaissent; l'œuf est alors transparent et le germe se concentre à Tun des pôles. Dans le disque germinatif, ils ont constaté la présence d'un aster simple et quelque temps après ils ont vu s'échapper de l'œuf par le micropyle, un petit corps qu'ils considèrent comme un globule polaire. L'observation de ces auteurs vient donc confirmer celles de Hoffmann.

Les faits observés par Hoffmann, Kingsley et Conn relativement à la disparition de la vésicule germinative chez certains Poissons osseux sont tout à fait en accord avec ceux qui ont été vus par un grand nombre d'auteurs chez beaucoup d'Invertébrés, par Bûtschli (29) chez les Mollusques, Fol (50) et Hertwig (78) chez les Échinodermes, etc. Les observations incomplètes d'Ed. Van Beneden (i9) sur l'œuf du Lapin permettent de supposer que chez les Mammifères la vésicule germinative donne aussi naissance aux globules polaires et au noyau de l'œuf. Bien qu'on n'ait encore rien observé de semblable chez les autres Vertébrés, il y a tout lieu de croire que la disparition de la vésicule germinative suit un processu:'

identique chez ces animaux. Chez la Lamproie, Kupffer et Benecke (i09) ont vu se produire à la surface du vitellus un globule polaire avant la fécondation et un autre a])rès la fécondation ; chez le même animal, Calberla (30) a constaté la présence d'un pronucleus femelle à Tendroit où avait disparu la vésicule germinative. D'après Salensky (163), la vésicule germinaLive de Tœuf du Sterlet disparaît dans les premières heures qui suivent la ponte. A sa place on aperçoit, dans le germe, un petit corps arrondi qui serait le pronucleus femelle. En même temps apparaît au pôle actif do Tœuf, à la surface du vitellus. une substance transparente, homogène, analogue au voile que Hertwig (78) a signalé à la surface de Tœuf de la Grenouille. Le corps véliforme est peut-être l'homologue des globules polaires.

La production de globules polaires n'a jamais été constatée chez les Plagiostomes, les Reptiles et les Oiseaux; mais on ne saurait, ce me semble, en conclure que la vésicule gerniinative ne se transforme pas chez ces animaux en noyau de Toeuf et en globules polaires. Il se peut très bien, en effet, que les globules polaires au lieu de se séparer de l'œuf restent inclus dans le germe et échappent à l'observation. C'est ainsi que, dans l'œuf du Moina recti7^osl7^is, Grobben (61) a vu une masse polaire se différencier au pôle actif de l'œuf, mais rester enclnvée dans le vitellus. Le fait suivant que j'ai observé chez la Grenouille viendrait à l'appui de cette manière de voir. Comme je l'ai déjà dit, la vésicule germinative disparait chez la Grenouille de même que chez la Truite, pendant la chute de l'œuf dans la cavité abdominale. Dans un point très voisin de la périphérie de l'œuf, à l'endroit oii a disparu la vésicule germinative, on observe sur des coupes, un espace clair, entouré de ])igment, au centre duquel est un petit corps rond, légèrement granuleux, à bords très nets. Par ses dimensions et son aspect, ce corps ressemble tout à fait au noyau femelle que Hertwig (78) a vu dans le voisinage du noyau spermatique, à l'extrémité de l'une des traînées pigmentaires découvertes dans l'œuf des Batraciens par Van Bambeke (12). Hertwig a très bien décrit et figuré la fusion de ce ïîoyau femelle avec le noyau mâle pour constituer le premier noyau de segmentation. Mais il n'avait pu const.itfi- l'origine du noyau femelle. Souvent on aperçoit auprès du

DKS l'OlSSU.NS OSSKIX IM

noyau l'emeDe, dans l'espace clair, provenant de la disparition de la vésicule germinative, un ou deux autres petits corps réfringents, plus petits que le noyau, moins bien délimités et plus rapprochés de la surface de l'œuf. Ces corpuscules me paraissent être des globules polaires qui restent ainsi dans l'œuf et qui sont plus tard résorbés ou expulsés. J'ai pu voir, en etfet, quelquefois sur des œufs fécondés de Rana temporaria^ au moment de la formation du premier sillon de segmentation, un ou deux petits globules de protoplasma incolore, situés au-dessous de la membrane vitelline, dans le sillon de segmentation. Une observation analogue a été faite depuis par M. Mathias Duval (43) dans les mêmes conditions. Cet auteur considère aussi ces globules comme des globules polaires, lise peut que ces corpuscules ne soient expulsés de l'œuf qu'exceptionnellement et deviennent alors visibles, tandis que normalement ils restent inclus dans le vitellus. 11 en serait de même chez les Poissons; chez certains d'entre eux, tels que ceux qui ont été observés par Hoffmann, Kingsley et Conn, les globules polaires seraient expulsés de l'œuf. Chez d'autres, tels que les Salmonidés, ils demeureraient dans le germe. Si cette hypothèse était confirmée, elle prouverait que les globules polaires n'ont pas une importance aussi grande que le veulent certains auteurs tels que Sedwig-Minot (l73), Balfour (9), Sabatier (162) et Ed. Van Bcneden (20) qui considèrent ces corps comme une partie mâle expulsée de l'œuf, originairement mâle et femelle. Que deviendrait cette substance mâle dans le cas oii les globules polaires persistent dans l'œuf et sont résorbés? Récemment 0. Schultze (I7l) a observé la formation d'un fuseau de direction et des globules polaires chez les vVmphibiens. Ses recherches ont besoin d'être reprises afin d'étabUr si le fait qu'il a constaté est général.

L'œuf pondu et non fécondé présente chez beaucoup de Poissons osseux des modifications qui ont été très bien étudiées par plusieurs observateurs, entre autres par Van Bambeke (il). Cet œuf est le siège de mouvements actifs du germe accompagnés de changements de forme pouvant simuler les premières phases de la segmentation. Dans l'œuf de la Tanche, d'après l'auteur belge, le germe coiffe le vitellus comme une calotte qui prend bientôt la forme d'une lentille biconvexe

22 IlECllERCUES sua LE DÉVELOl'PEiMENT

Les éléments vitellins, globules huileux et globules albuminoïdes, se rassemblent au-dessous du germe; celui-ci émet des prolongements filiformes, semblables aux pseudopodes d'un Rhizopode, qui vont pour ainsi dire pêcher les éléments vitellins pour les accumuler au-dessous du germe. Le noyau vitellin ainsi constitué est formé d'une masse centrale finement granuleuse, entourée d'éléments plus volumineux. Le germe, doué en même temps de mouvements amiboïdes énergiques, change constamment de forme. Suivant Van Bambeke, ces mouvements auraient pour but de mettre les différents points du protoplasma plastique en contact avec les éléments nutritifs. Le noyau vitellin peut être, en effet, momentanément emprisonné en partie par le germe. Le disque germinatif présente des protubérances qui simulent un commencement de segmentation; il se détache quelquefois de sa masse de petites portions qu'on pourrait prendre pour des globules polaires. Les mouvements amiboïdes persistent quatre heures après la ponte. Chez la Lote, les changements de forme du germe sont beaucoup plus lents et moins prononcés. De semblables mouvements du germe, accompagnés de l'accumulation des éléments huileux du vitellus au-dessous du disque germinatif, ont été signalés chez d'autres Poissons osseux : chez le Brochet, par Lereboullet (lll), Reichort (143-144), His (82) et Ramson (134); chez la Perche, par Lereboullet (lllV, chez l'Épinoche, par Ramson (134); enfin chez les Salmonidés, Truite, Saumon et Ombre, par Stricker (186), Rupffer (104), Weil (195), (Ellâcher (123) et His (82).

Dans les œufs assez volumineux, à capsule épaisse et peu transparente, des Salmonidés, la constatation des mouvements du germe est difficile; elle ne peut se faire que d'une manière indirecte, en durcissant rapidement les œufs, comme l'ont fait Stricker et (Bllacher, et en observant à la surface du germe des bosselures, et sur ses bords des irrégularités. En me plaçant dans ces conditions, j'ai pu vérifier les observations de ces auteurs.

Lorsqu'on met dans l'eau un œuf de Truite pondu et non fécondé, on constate au bout de quelques heures que le germe qui était primitivement étalé à la surface de l'œuf, ainsi que je 1 ai dit, s'est concentré et est devenu beaucoup plus visible.

Dans son mouvement de contraclion, il entraîne avee. lui un grand nombre de gros globules huileux qui se trouvaient dans la couche corticale. Le germe ainsi rassemblé devient alors très apparent, c'est ce qui avait fait croire à Coste qu'il ne se formait qu'après la ponte. Chez l'Épinoche on peut suivre par transparence la concentration du germe. Les mouvements qui s'observent alors sont analogues à ceux qui se voient dans l'œuf après la fécondation, et que je décrirai plus tard.

IL — Fécondation.

La fécondation chez les Poissons osseux, sauf chez quelques rares espèces ovovivipares, telles que le Zoarces viviparus, est externe; elle s'opère dans l'eau, le mâle émettant sa semence sur les œufs pondus par la femelle. Aussi la fécondation artificielle est-elle très facile chez ces animaux; pratiquée pour la première fois par Jacobi (1), vers le miheu du dernier siècle, cette opération est devenue tout à fait classique depuis les belles recherches de Coste.

Les spermatozoïdes de Salmonidés sont complètement immobiles dans la laitance extraite de l'animal. Dès qu'il sont mis en contact avec l'eau, ils exécutent des mouvements de trépidation très vifs qui ne durent que quelques instants, puis ils redeviennent immobiles; la durée de ce mouvement ne dépasse pas trente secondes. Coste admet que la vitalité des spermatozoïdes persiste pendant sept ou huit minutes, parce qu'il a pu au bout de ce temps féconder des œufs avec de l'eau spermatisée. Ce résultat tient à ce que la laitance forme une masse assez compacte qui ne se môle à l'eau que peu à peu, de sorte que les spermatozoïdes du centre de la masse ne se

(1) a Vers le milieu du dernier siècle, en 1758, le comte de Goldstein, grand chancelier des duchés de Bergues et de Juliers pour son Altesse palatine, remit à l'un des ancêtres du célèbre Fourcroy un mémoire sur la fécondation arlilicielle des œufs de Poisson et sur l'emploi de ce procédé pour le repeuplement des rivières et des étangs. Ce remarquable travail qu'il tenait d'une personne en qui il avait la plus grande confiance, et dont Jacobi était l'auteur, était écrit en allemand, et M. de Fourcroy. trouvant des difficultés à le traduire, le comte de Goldstein voulut bien le lui donner en latin. La version française fut publiée en entier, en 1773, dans le Traité général des pêches de Duhamel du Monceau, rédigé par ordre de l'Académie des sciences. » Coste, Instructions pratiques sur la pisciculture. Paris, 1853, p. 1.

mettent en mouvement que lorsque les autres sont morts depuis déjà longtemps. On peut constater ce fait en mettant un peu de laitance au contact de l'eau sous le champ du microscope ; on voit alors les spermatozoïdes se désagréger petit à petit autour de la goutte de laitance, et s'éloigner en tourbillonnant dans l'eau; il s'écoule plusieurs minutes avant que toute la laitance soit mêlée à l'eau, et pendant tout ce temps on voit des spermatozoïdes mobiles, et d'autres qui sont morts depuis longtemps. Mais si l'on mélange rapidement la laitance à l'eau, de manière à mettre tous les spermatozoïdes à peu près au même moment en contact avec le liquide, on constate que les mouvements ne persistent que quelques secondes.

Chez l'Épinoche et l'Épinochette, la vitalité des spermatozoïdes est beaucoup plus grande que chez les Salmonidés. En pratiquant des fécondations artificielles d'Épinochette, j'ai vu les spermatozoïdes tournoyer dans l'orifice micropylaire des œufs pendant vingt à trente minutes; quelques-uns même étaient encore mobiles au bout d'une heure et demie. G.-K. Hoffmann (89) a constaté aussi que plusieurs Poissons de mer, pour lesquels il a pu pratiquer la fécondation artificielle, Scorpœna scrofa, S.porcus, Julisvulgaris, Cr^enilabrus pavo et Heliasis chy^omis ont des spermatozoïdes doués d'une assez grande vitalité. Toutefois ils perdent leurs mouvements après un séjour de trente minutes dans l'eau de mer.

Dans une note présentée à l'Académie des sciences, en 1877, j'ai fait connaître les résultats de mes recherches sur la vitalité des spermatozoïdes de la Truite et sur la fécondation des œufs avec de la laitance mélangée à certains liquides (67).

Sur une centaine d'œufs de Truite fécondés avec de la laitance mêlée à l'eau depuis une minute, aucun œuf ne s'est développé. Après quinze secondes de contact avec l'eau, les mouvements des spermatozoïdes sont lents et peu étendus ; un grand nombre même sont déjà immobiles; soixante œufs fécondés avec ce sperme affaibli ont donné quarante-six éclosions. Le sperme peut, au contraire, garder longtemps sa vitalité lorsqu'on le conserve à sec dans un milieu humide. Ainsi de la laitance laissée pendant quatre jours dans un flacon bouché, à une température de 10 à 15 degrés, a pu servir à fécunder quarante œufs, sur lesquels huit seulement ne se sont

pas développés ; j'ai même pu féconder des œufs avec de la laitance datant de six jours.

J'ai pratiqué une série de fécondations avec de la laitance soumise à l'action de l'alcool et des anesthésiques. Des œufs provenant d'une même ponte furent essuyés avec soin sur du papier à filtrer, afin de les débarrasser du liquide péritonéal qui pouvait y adhérer, et empêcher ainsi les mouvements des spermatozoïdes. On mit sur un certain nombre de ces œufs quelques gouttes de sperme, puis on versa sur le tout de l'eau alcoolisée à j^; au bout de quelques minutes, les œufs furent placés dans l'eau courante. On traita de même les autres œufs en les arrosant d'abord avec de la laitance fraîche, puis avec de l'eau alcoolisée à —, de l'eau éthérée, de l'eau chloroformée

et de l'eau pure. Voici quels furent les résultats de ces fécondations :

Eau alcoolisée à — 91 œufs 74 développés.

Eau alcoolisée à — - 59 — 50 —

Eau éthérée M — 42 —

Eau chloroformée 32 — 19 —

Eau pure ,.... 62 — ........ 50 —

Les éclosions ont eu lieu toutes à la même époque, et les petites Truites provenant de ces différents œufs n'ont présenté dans la suite aucune particularité qui pût les faire distinguer des alevins obtenus par fécondation normale.

Ces expériences prouvent que l'alcool et les anesthésiques n'exercent pas une action nuisible sur les spermatozoïdes de la Truite, à des doses suffisantes pour tuer cependant des animaux inférieurs, tels que des Infusoires, Cette innocuité n'est probablement qu'apparente; la vitalité des spermatozoïdes des Salmonidés a une durée si courte que l'alcool et les anesthésiques n'ont pas le temps d'agir sur ces organismes avant leur pénétration dans l'œuf; dès qu'ils sont entrés dans le germe, ils sont à l'abri des substances toxiques. Il est probable que les spermatozoïdes d'autres Poissons, comme ceux de l'Èpinoche qui présentent une vitalité beaucoup plus longue, se comporteraient différemment mis en présence de l'alcool et des anesthésiques, et perdraient leurs mouvements plus tôt que dans l'eau

pure. Je n"ai pu malheureusement faire des recherches à ce sujet.

Les œufs mûrs de la Truite, mis dans l'eau sans être fécondés, perdent aussi assez rapidement la propriété d'être fécondés ; je n'ai pas déterminé exactement la durée de la période pendant laquelle les œufs restent fécondables ; elle ne dépasse pas très probablement une demi-heure. L'œuf absorbe en effet de Teau qui gonfle la capsule, et le micropyle se trouve ainsi fermé. Les œufs pondus, conservés à sec dans une atmosphère humide et à une température ne dépassant pas 12° C. , conservent leur propriété d'être fécondés pendant deux ou trois jours. Des œufs datant de deux jours fécondés avec du sperme frais ont donné trente-deux éclosions sur quarante œufs ; des œufs datant de quatre jours ont donné cinq éclosions sur vingt œufs, et des œufs datant de cinq jours, une seule éclosion sur vingt-deux œufs. L'œuf extrait de l'animal perd donc sa vitalité plus vite que ne le fait le spermatozoïde.

Pour les œufs qui ont un petit volume, comme ceux de l'Épinoche, il est facile de suivre directement, sous le microscope,' les premières phases de la fécondation, c'est-à-dire l'entrée des spermatozoïdes par le micropyle. Pour les œufs des Salmonidés, l'observation est beaucoup plus difficile. Cependant en faisant tomber, immédiatement après la fécondation, des œufs dans une solution d'acide chromique, assez forte, afin de les tuer rapidement, et en pratiquant ensuite des coupes à travers la région micropylaire , on peut voir des spermatozoïdes engagés dans le canal du micropyle. Mais, lorsqu'on veut retrouver les éléments mâles dans l'intérieur de l'œuf, on éprouve une difficulté insurmontable. Le spermatozoïde est tellement petit par rapport à TœAïf qu'il est impossible de le distinguer après sa pénétration dans la masse granuleuse du disque germinatif. J'ai essayé un grand nombre de fois de rechercher le ou les spermatozoïdes dans le germe de la Truite et de l'Épinoche, soit sur des coupes d'œufs durcis immédiatement après l'imprégnation, soit dans des germes extraits de l'œuf vivant. Les réactifs colorants, tels que le vert de méthyle, le carmin aluné, l'hématoxyline, qui ont une grande affinité pour la substance chromatique constituant la tête du spermatozoïde, colorent aussi la totaUté du germe, de sorte qu'ils ne

pouvf'iil servir pour de semblables recherches. De plus, le germe renferme un grand nombre de corpuscules réfringents qui ont tout à fciit les dimensions et l'aspect d'une tête de spermatozoïde. Chez rÉpinoche et l'Épinochette, grâce à la transjjarence de l'œuf, j'ai pu souvent observer les modifications qui suivent l'imprégnation. Quelques minutes après l'entrée des spermatozoïdes dans l'œuf, on voit apparaître, entre la capsule et le vitellus, un espace clair, dû à la rétraction du vitellus et à l'entrée d'une certaine quantité d'eau, ainsi que Miescher l'a démontré pour les Salmonidés. Le germe de l'Épinoche est, comme je l'ai déjà dit, très mal délimité et très étendu dans l'œuf pondu. La couche corticale granuleuse et peu transparente, aux dépens de laquelle se constitue le germe, paraît avoir à peu près la môme épaisseur sur tout le pourtour de l'œuf. Lorsque commence la rétraction du vitellus, la couche corticale s'épaissit sur certains points et forme des bosselures qui donnent au contour du vitellus un aspect irrégulier. Les bosselures changent de forme et de place ; on les voit parcourir la surface du vitellus comme des vagues qui se déplaceraient très lentement à la surface de l'eau. Toute la masse vitelline est animée des mêmes mouvements et on la voit s'étrangler de distance en distance. Les protubérances, formées par la substance finement granuleuse de la couche corticale, deviennent de moins en moins nombreuses et se fusionnent à l'un des pôles de l'œuf. Elles constituent finalement une seule masse en forme de calotte, renflée en son mifieu, et amincie sur ses bords, qui coiffe environ le quart du globe vitellin. (Planches, fig. 6.) Cette masse est encore animée pendant quelques temps de mouvements d'ondulation qui déplacent sa partie renflée, et achèvent sa concentration. Une heure et demie environ après la fécondation, le germe de l'œuf d'Épinoche est définitivement constitué et a pris la forme d'une lentille planconvexe, qui repose par sa face plane sur le vitellus, et se continue par ses bords amincis avec la couche corticale entourant le globe vitellin. Pendant les mouvements de concentration du germe, les éléments huileux, qui étaient disséminés à la périphérie de l'œuf, dans la couche corticale, se sont rassemblés au-dessous du disque germinatif, auquel ils sont quelquefois reliés par des filaments protoplasmiques analogues à

:^8 aECUERCIlES SUU LE DÉVELOIM'EMENT

ceux que Van Bambeke (il) a décrits dans ToBut' de de la Tanche.

Ramson(l34), quia étudié, cliez l'Épinoche, les mouvements que je viens de décrire, pense qu'ils sont dus à une contraction de la couche plasmique de l'œuf. His (82) admet aussi que les mouvements très curieux qui s'observent dans l'œuf du Brochet, se passent dans la couche corticale. Je partage entièrement cette opinion. Le vitellus est constitué, en effet, par une masse albumineuse spéciale qui ne saurait être douée de contractihté, tandis que la couche corticale possède toutes les propriétés du protoplasma et entre autres la contractilité.

Il est probable que dans l'œuf des Salmonidés, il se passe des phénomènes semblables à ceux dont l'œuf de l'Épinoche est le siège, mais l'opacité de la capsule empêche de bien les observer. Stricker (186) et CEllacher (123) en durcissant des œufs de Truite, pris à des moments de plus en plus éloignés de leur fécondation, ont constaté, après avoir enlevé la capsule, des changements de forme dans le germe, se traduisant par des bosselures. De semblables bosselures irréguUères s'observent, en effet , à la surface du germe, quelques heures après la fécondation, mais je les ai trouvées beaucoup moins prononcées que ne les ont figurées Stricker et CEllacher ; cela tient, je crois, à ce que je tuais les œufs plus rapidement que ces deux auteurs, de sorte qu'il ne se produisait pas de contractions irrégulières du germe sous l'influence des réactifs.

Lorsqu'on pratique des coupes à travers des œufs durcis dans les premières heures qui suivent la fécondation, on peut suivre le phénomène de la concentration du germe et voir comment il devient de plus en plus épais, et finalement une lentille plan-convexe. Le germe se présente d'abord sur une coupe médiane, une demi-heure après la fécondation, comme un croissant très mince, qui recouvre à peu près le sixième de la circonférence du vitellus. Une heure et demie à deux heures après, le croissant a diminué d'étendue, et sa partie médiane s'est renflée en forme de lentille biconvexe, dont les bords se continuent avec ceux du croissant. Ce n'est que six à huit heures après la fécondation que le germe a achevé sa concentration; il lui faut souvent un temps beaucoup plus considérable, lorsque la température est basse. Il se présente alors sous la forme d'une masse lenticulaire abords épais dont la face

supériourc libre est convexe, et la face inférieure, mal délimitée par rapport au vitellus sous-jacent, est plus aplatie.

Le germe est constitué par une substance finement granuleuse, au milieu de laquelle se trouvent de petits éléments arrondis, réfringents, homogènes, de nature protoplasmique, et qui sont de plus en plus volumineux de la surface vers la profondeur. Ces éléments se retrouvent dans la couche corticale qui s'étend au-dessous du germe à la surface du vitellus, et qui constitue plus tard le parablaste. On trouve parfois à la surface du germe de petits corps lenticulaires d'une coloration jaunâtre ou brunâtre, d'une réfringence plus grande que celle de la substance germinative et qui semblent enchâssés dans la couche superficielle. Ce sont les petites globules vitellins, dont j'ai parlé et qu'Œllachcr a pris probablement pour les taches germinatives.

J'ai cherché avec soin sur de nombreuses coupes de germes, l'existence des noyaux mâle et femelle et je n'ai jamais pu les rencontrer. Malgré cela, je suis tout disposé à admettre qu'ils existant chez les Salmonidés et qu'ils se comportent comme Hoffmann (89) l'a constaté chez d'autres l'oissons. Cet habile observateur a vu, en effet, que chez les Poissons marins, chez lesquels il a suivi la transformation de la vésicule germinative en noyau femelle et en globules polaires, le spermatozoïde, après son entrée dans le germe, se transforme en un noyau mâle entouré d'un aster. Le noyau mâle et le noyau femelle grossisssent en s'approchant l'un de l'autre et se fusionnent pour former le premier noyau de segmentation.

Dans plusieurs germes de Truite encore largement étalés sur le vitellus, j'ai observé une disposition rayonnante du protoplama autour d'un centre situé sur la ligne médiane du germe ; mais au centre de ce grand aster, dont les rayons atteignent presque la périphérie du disque germinatif, je n'ai pu trouver, avec le plus fort grossissement, ni à l'aide des réactifs colorants, aucune trace de noyau. A la fin de la concentration du germe, quelque temps avant la segmentation, on voit aussi au centre du germe un aster à rayons très étendus, entourant un espace clair qui renferme un noyau à contours mal délimités ; ce noyau est évidemment le premier noyau de segmentation. Waldn(M' (194) n"a pu conslatcr aussi la présence du premier

noyau de segmentation chez la Truite que sept heures après la fécondation : le noyau était situé au milieu du germe, plus rapproché de la surface externe que de la surface interne.

Kupffer (108) qui a étudié récemment la fécondation de l'œuf de Truite, décrit les phénomènes suivants : dans l'œuf non fécondé, sur une coupe pratiquée à travers la région du micropyle, on distingue un petit disque central avec un corpuscule excentrique, solide, se colorant en jaune par le picrocarmin, et une zone externe radiée. Dix minutes après la fécondation, on observe à la surface du germe une membrane délicate, qui vingt minutes plus tard se montre striée perpendiculairement et présente, au milieu d'un bouchon de substance germinative, des disques polaires. Entre le germe et le micropyle, Kupffer a vu de petits corps aplatis, formés d'une substance finement granuleuse, dans lesquels il aurait trouvé deux fois, un noyau colorable, ce sont les cellules polaires. Une heure après la fécondation apparaît, au sommet apical du germe, une figure allongée, composée de quatre petites vésicules et entourée d'une zone claire, perpendiculaire à l'axe de l'œuf. L'auteur n'a pu déterminer si cette sorte de pronucleus était mâle ou femelle. Deux heures et quart après la fécondation, on observe une autre figure semblable, située plus profondément et parallèle à l'axe de l'œuf. Trois heures après la fécondation, le germe présente deux noyaux qui se conjuguent bientôt suivant la direction .de Taxe de l'œuf. Jusqu'à la dixième heure on ne trouve plus qu'un seul noyau. Enfin, entre la douzième et la dix-huitième heure commence la division du premier noyau de segmentation, le plan de division coïncidant avec celui de l'axe de l'œuf.