III. — Segmentation

La segmentation de l'œuf des Poissons osseux, vue pour la première fois en 1836, par Rusconi (152-153) chez la Tanche, a été étudiée et décrite souvent par un grand nombre d'auteurs, de Filippi (46), Vogt (l9l), Aubert (3), Lereboullet (111-112), Kupffer (104), Stricker (i86), QEllacher (l23), OwsjannikoNV (124), Klein (94), His (83), Van Bambeke (il). Van Bcneden (lo), C. K. iiuiïmanu (89), Kingsl^y et Conu (93).

DES >OISSONS OSSEU^i 31

Zicgicr (200), Agassiz et Whitman (i), Ryder (154), Brook (25-26), von Kowalcwski (103), List (ll7) et Fusari (52). Aussi ne m'attarderai-je pas à la décrire avec détail, ni à réfuter certaines erreurs d'observation, telles que celle de Stricker qui croyait que les sphères de segmentation se produisaient par bourgeonnement, erreur qui a été très bien relevée par (EUacher et par Klein. J'insisterai cependant sur quelques points particuliers que j'ai étudiés plus spécialement.

La segmentation chez un certain nombre de Poissons, la Perche, l'Épinoche, etc., suit une marche régulière dont le type est le suivant :

Le germe se divise en deux parties égales par un sillon médian. Un second sillon perpendiculaire au premier partage chacune des moitiés en deux autres, de sorte que le germe est divisé en quatre parties. Deux autres sillons parallèles au second partagent le disque germinatif en huit segments ; mais la disposition de ces segments sur deux rangs parallèles donne au stade VIII des Poissons un aspect particulier; qui ne se retrouve pas dans l'œuf d'autres animaux. Le stade XVI est obtenu par la formation de deux sillons parallèles au premier.

Chez la Truite on retrouve assez souvent ce type réguHcr de segmentation ; mais on peut aussi distinguer un autre type dérivé du premier et se rapprochant plus de celui qui s'observe chez les Batraciens.

Le premier sillon de segmentation, ainsi qu'CEllacher l'a signalé le premier, apparaît généralement sur l'un des bords du germe sous forme d'une petite dépression linéaire plus accentuée à quelque distance du bord libre du germe que sur ce bord môme. Quelquefois la dépression se produit au centre môme du disque et s'étend vers l'un des bords avant de se diriger vers le côté opposé. Le germe, au moment de l'apparition du premier sillon de segmentation, entre la dixième et la vingtquatrième heure après la fécondation, ne présente pas encore un contour bien net, comme il en aura un quelque temps après ; il existe à sa périphérie des encoches et des prolongements ifréguliers, qui semblent être des expansions protoplasmiques fixées par l'action du réactif durcissant. Après la formation du premier sillon, le germe est généralement circulaire, mais il présente souvent une forme elliptique, le sillon correspondant

UECHEHCHES SUR LK DEVELOl'PEMENT

au petit axe de l'ellipse; quelquefois le premier sillon est excentrique et divise l'ellipse en deux parties inégales. (Planches, fig. 25, 26 et 27.)

Sur les bords du premier sillon, ainsi que sur ceux des autres sillons, on observe des plis radiés très fins, identiques à ceux que Max Schultze (170) a si bien décrits et figurés sur les bords des sillons de l'œuf de Grenouille , les plis se voient très bien sur l'œuf vivant de l'Épinoche.

Le deuxième sillon de segmentation est perpendiculaire au premier, et commence vers le centre du germe, soit immédiatement en partant du premier sillon, soit à une petite distance de chaque côté de ce point. (Planches, fig. 30 et 31.) Il arrive très souvent que, lorsque le deuxième sillon est terminé ou quelquefois pendant sa formation, il s'opère des modifications dans la forme et le rapport des quatre segments. Ceux-ci se séparent à leur angle interne, de sorte que deux segments opposés viennent se mettre en rapport suivant une petite ligne droite et que les deux autres se trouvent séparés. Les axes des sillons se trouvent ainsi modifiés, deviennent brisés et ne sont plus à angle droit. (Planches, fig. 34.) Rauber (142), qui a publié récemment un mémoire intéressant sur la segmentation de l'œuf des Brataciens et des Poissons, a appelé l'attention sur cette disposition des deux premiers sillons. Suivant lui, le deuxième sillon ne se formerait pas ordinairement, chez la Grenouille, suivant le schéma classique établi par Prévost et Dumas (l27). Deux petites dépressions viendraient aboutir isolément de chaque côté du premier sillon, à une certaine distance l'une de l'autre, de manière à être reliées entre elles par une ligne de brisure dépendant du premier sillon. Cette disposition qui se retrouve chez les Poissons osseux constituerait le type ranoïde de la segmentation de l'œuf de ces animaux.

La figure décrite par Rauber s'observe souvent, en effet , chez la Grenouille, mais elle semble résulter, comme chez la Truite, d'un déplacement secondaire. Chez les Poissons osseux elle n'a pas été signalée ni par les anciens auteurs, tels que Rusconi, Lereboullet, Stricker, Œllacher et ni par Ziegler, qui dans ces derniers temps a suivi le développement du Saumon. Seul C. K. Hoffmann (89) a figuré (pi. V, fig. 4) dans un œuf de .hilis une disposition du stad*^ IV semblable à celle

quoj'ni observée chez la Truite: mais dans le texte de son mémoire il n'appelle pas Tatlention sur ce sujet.

Le stade VIII de la Truite résulte de la formation de deux nouveaux sillons parallèles au premier. (Planches, fig. 37.) Mais souvent, à partir de ce stade, la segmentation présente de grandes irrégularités. Chaque moitié des deux nouveaux sillons se forme isolément et peut affecter des dimensions très variables. Normalement les deux moitiés d'un même sillon viennent aboutir au même point du sillon diamétral, perpendiculaire, en se plaçant plus ou moins dans le prolongement de l'un de l'autre; mais le plus souvent chaque moitié aboutit séparément au sillon diamétral en convergeant vers le centre ou vers la périphérie du germe. Celui-ci se trouve alors découpé à sa surface en huit segments de forme et de volume dissemblables. L'irrégularité de la segmentation peut être encore plus marquée dès le stade VIII et le germe peut offrir les aspects figurés. (Planches, fig. 35, 36, 38 et 39.)

Le stade XVI se présente très rarement avec la régularité qui s'observe chezl'Épinoche, et dont la figure 41 (Planches) donne un exemple. A partir de ce moment, le fractionnement du germe se fait par des bipartitions égales ou inégales de chaque segment, et les lignes de division peuvent affecter des directions très variables. Certains segments sont quelquefois en retard sur les autres et restent pendant quelque temps plus volumineux; mais finalement toute la surface du germe se trouve découpée en une trentaine de segments qui, primitivement polyédriques, affectent alors une forme plus ou moins sphérique. (Planches, fig. 44 et 45.) La segmentation continue alors à se faire réguhèrement, les cellules devenant de plus en plus petites et de plus en plus régulières.

L'étude de la segmentation sur des coupes, comme l'a fait le premier CEllacher (l23), est beaucoup plus intéressante que le simple examen des œufs en siirface. Lorsqu'on pratique des coupes d'un germe de Truite perpendiculaires au premier sillon de segmentation, on constate à la partie médiane de la surface du germe une petite dépression à laquelle fait suite une ligne claire, très fine, qui s'étend vers le vitellus. Suivant Œllacher et Ziegler, le premier sillon ne s'étendrait pas jusqu'au vitellus, et n'entamerait que les couches superficielles du germe:

Balfour(8) pour les Plagiostomes, Salensky(l63) pour le Sterlet, Sarasin (164) pour les Reptiles, ont signalé le môme fait. Au contraire Coste (33 bis), Hffickel (63), Van Beneden (19), HotTmann (89), ont figuré et décrit, chez d'autres Poissons osseux, le premier sillon divisant et traversant le germe dans toute son épaisseur. Mes propres observations m'ont démontré qu'il en est de même chez la Truite.

La ligne très fine qui fait suite à la dépression superficielle du premier sillon peut être suivie jusqu'au contact du vitellus, du moins sur les coupes qui passent exactement par le centre du germe. Cette ligne est bordée de chaque côté par une petite bande claire nettement différenciée du protoplasma voisin. A l'aide d'un grossissement assez fort on constate que ces bandes claires sont traversées par des lignes très fines, parallèles entre elles et perpendiculaires à la ligne médiane; les lignes radiées se perdent dans le protoplasma des deux segments et semblent converger vers les deux premiers noyaux de segmentation. Cette disposition rappelle celle qui s'observe dans les cellules végétales, au moment oii se forme la plaque cellulaire quand se constitue la cloison de séparation des deux cellules filles. (Planches, fig. GO.)

Les premiers segments du germe possèdent-ils une membrane d'enveloppe ? Je crois pouvoir répondre à cette question par l'affirmative. 11 arrive, en effet, quelquefois comme le montre la figure 60 (Planches), qu'il se détache à la périphérie du segment des lambeaux très minces qui ont tout à fait l'apparence d'une membrane de cellule. Cette membrane se continue avec la ligne qui indique la séparation des deux segments ; celle-ci me semble donc être une cloison se formant aux dépens d'une figure radiée analogue à celle des cellules végétales.

Œllacher (l23) a signalé le premier l'existence d'une bande claire indiquant la formation des sillons de segmentation, mais il ne paraît pas avoir vu la ligne qui occupe le milieu de la bande claire et qui représente, je crois, la membrane de cellule. Nuel (l2l) admet aussi une membrane autour des sphères de segmentation du Pctromyzon Planeri. << La membrane existe,

dit-il, au complet dès qu'une cellule s'est divisée en deux

Elle ne pénètre pas entre les deux cellules qui viennent de se

foriiicrpar division, mais une nouvelle lamelle naît ici au moment môme de la division, par un processus analogue à celui qu'on a si bien observé dans les plantes. » (P. 416, en note.)

OEllaclier et plus récemment Ziegler ont décrit sur le trajet des premiers sillons de segmentation, chez la Truite, des vacuoles ou des aniVactuosités. Ralfour (8) a signalé le même fait chez les Plagiostomes, et Sarasin (164) chez les Reptiles. Je n'ai pu observer qu'exceptionnellement ces anfractuosités et je ne les ai pas trouvées sur des germes qui avaient été traités par l'acide osmique ou le liquide de Kleinenberg. J'ai lieu de croire que ces productions ne sont pas normales et se produisent sous l'action de certains réactifs durcissants. On ne les observe pas lorsqu'on suit la segmentation sur des œufs transparents, comme ceux de l'Ëpinoche; Van Beneden, Hoffmann, Kingslcy et Conn ne les ont pas vues non plus dans les œufs transparents qu'ils ont examinés.

L'étude des coupes du germe de la Trmte, montre qu'il se produit de bonne heure, dés le stade YUI, des sillons parallèles à la surface qui détachent des segments, dans la partie superficielle, pour constituer les premières sphères de segnu'ntation. 11 se produit en môme temps dans la profondeur du germe, au-dessous de ces premières sphères, des sillons perpendiculaires à la surface ou légèrement obliques. Ces sillons moins nombreux que les sillons superficiels ne pénètrent jtas jusqu'au vitellus ; ils découpent des segments beaucoup plus gros que ceux de la surface et qui son( reliés entre eux inférieuremeiit par une masse indivise de proto})lasma. Tous ces faits ont été très bien décrits et figurés par Œllacher (123).

Lorsque le germe est partagé en un certain nombre de segments irréguliers et polygonaux, de telle sorte qu'on en compte environ une dizaine sur une section médiane, la segmentation continue à se faire d'une manière plus régulière par une bipartition répétée des cellules ; les cellules profondes restant toujours plus volumineuses que les autres.

Les cellules, qui mesurent à ce moment, sur des pièces fixées par le liquide de KleiniMiberg, environ O'""',04 de diamètre, prennent une forme sphéroïdal(> et présentent entre elles des lacunes plus ou moins grandes et irrégulièrement distribuées. Cependant les cellules superficielles du germe sont plus rap-

prochécs les unes des autres et constituent déjà une couche spéciale qui se différenciera de plus en plus pendant le développement ultérieur du germe. His (83) a bien représenté (PI. 1, fig. 2, 3 et 4) cet état lacuniaire du germe, mais il a figuré aussi (PI. l, fig. 3 et 4 et PL II, fig. 4) des chaînes de cellules unies entre elles, sous forme de cordons protoplasmiques, moniliformes, pliirinucléés. Je n'ai jamais observé une disposition semblable.

La multiplication des cellules marche de plus en plus rapidement, au fur et à mesure qu'elles deviennent de plus en plus petites, et finalement la masse totale du germe se trouve divisée en un grand nombre de petits éléments qui ont un volume à peu près uniforme, sauf ceux de la couche superficielle, qui restent toujours plus petits et pressés les uns contre les autres, tandis qu'il existe de nombreuses lacunes entre les autres éléments.

Noycuix des sphères de segmentation. — J'ai déjà dit que le premier noyau de segmentation, dont Lorigine m'est restée inconnue chez la Truite, est nettement visible dans le germe avant l'apparition du premier sillon. Ce noyau a été signalé pour la première fois par (F.llacher (123), en 1872; il ne La vu qu'une seule fois sur une coupe, et il le décrit comme un corps granuleux mesurant 0'"™,08 et renfermant un petit corps de 0"'"'.04. Ce noyau était légèrement 'excentrique et])lus rapproché de la surface que de la base du germe (1). Il a été, au contraire, très bien observé par C. K. Hoffmann (89) dans les œufs transparents du Julis vulgaris, du Scorpœna et de quelques autres Poissons marins, oîi il se présente entouré d'un aster très net.

Chez la Truite, ce premier noyau est très difficile à observer; il ne peut se voir que sur des coupes et dans les quelques cas 011 j'ai pu le découvrir, sa présence ne se révélait que par une })etitc tache un peu plus foncée que le reste du protoplasma et entourée de lignes rayonnantes très étendues. Dans un germe divisé en deux, il est beaucoup plus aisé de voir dans chaque i^egment un noyau également entouré d'un aster. Œllacher

(1) Dans la ligure 17 de la planche XXXIII de son mémoire, ŒJlacber représente ce premier noyau plus près de la base du germe que de la surface ; il y a probablement une erreur dans le texléi '

a vu ces noyaux et les décrit comme constitués par des amas de corpuscules situés dans une lacune proplasmique luultiloculaire. Ces corpuscules mesuraient de 0"'™,004 à 0"'"\009 de diamètre, et se coloraient d'une manière plus intense que le reste du protoplasma par le carmin et le chlorure d'or. CEllacher s'est demandé si cet amas de corpuscules représentait un noyau unique, ou si chacun de ces corpuscules constituait un noyau. Il a observé une semblable dispositon dans les sphères de segmentation à un stade plus avancé. Chaque noyau était formé par un amas de petites vésicules, et au moment de la division de la sphère, l'amas vésiculaire se divisait lui-môme en deux. (Ellacher pense que les noyaux ont une membrane plissée formant des lobes, qui sur une coupe optique représentent une série de vésicules placées les unes à côté des autres. Cet auteur rappelle que Remak (146) a décrit une disposition semblable du noyau dans les sphères de segmentation des Batraciens et Lang (lio) dans les cellules cancéreuses.

Depuis (Ellacher, Hertwig (78) a signalé, comme Remak, dans les sphères de segmentation de la Grenouille, les jeunes noyaux se formant par la réunion de vacuoles qui résultaient elles-mêmes du gonflement des grains de chromatine (granules de Biitschli); Fol (50), dans les œufs du Toœopneustes lividus, a vu également, à un certain moment, les noyaux constitués par un amas de sphérules, et il dit s'être assuré que ces corpuscules dérivent directement des renflements intranucléaires ou granules de Biitschli. Trinchese (187) a décrit et représente une disposition semblable dans les globules polaires des Èolidiens; mais, suivant lui les filaments chromatiques du noyau mère deviendraient, par la réunion de leurs deux bouts, des anneaux qui se réuniraient entre eux et qui, par l'adjonction d'une nouvelle substance nucléaire, se transformeraient en nouveaux noyaux. Bellonci (17), dans les sphères de segmentation de l'Axolotl a observé aussi la constitution vésiculaire du noyau à un certain stade de la cytodiérèse (1). D'après cet au-

(1) J'ai proposé le mot de cytodiérèse (■/.•jxoa, cellule, Staipsat;, division) pour remplacer celui de kariokynèse et j"ai exposé dans une note spéciale les raisons qui me paraissent devoir fdire adopter ce terme. Voir Note sur la division cellulaire ou cytodiérèse, dans les Comptes rendus de l'Association française pour Vavancement des sciences, Congrès de la Rochelle, 1882.

leur, les éléments chromatiques s'imbiberaient de suc nucléaire pour devenir des vésicules, qui se fusionneraient entre elles afin de constituer les noyaux-filles. Enfin von Kowalewski (103) a reconnu que les noyaux des sphères de segmentation du Carasslus auratus sont, à Tétat de repos, constitués par des amas de petites vésicules arrondies et transparentes.

J'ai vérifié les observations d'CEllacher, chez la Truite et celle de Bellonci, chez l'Axolotl; il est certain que les noyaux se présentent à certains moments comme formés par un amas de vésicules; mais avant d'exposer mes recherches à ce sujet je résumerai celles que j'ai faites sur la division cellulaire dans le germe de la Truite.

Le processus de la cytodiérèse est très difficile à suivre dans les premières sphères de segmentation, à cause de l'épaisseur des cellules et de leur état granuleux; de plus, on ne peut arriver à colorer convenablement les noyaux. Si l'on soumet, en effet, un germe de Truite, non segmenté ou seulement segmenté en un petit nombre de sphères, à l'action des réactifs colorants, tels que le carmin, le picrocarminate d'ammoniaque, le carmin aluné ou borate, le vert de méthyle, l'hématoxyhne, la safranine, etc., on constate que tout le protoplasma se colore fortement en prenant une teinte uniforme; les noyaux sont à peine un peu plus colorés. Plus les sphères de segmentation deviennent nombreuses et diminuent de volume, moins le protoplasma se colore et plus les noyaux, au contraire, retiennent fortement la matière colorante. J'ai observé le môme fait dans les œufs des Batraciens, Grenouille, Triton et Axolotl. Il me semble résulter de ce fait que la substance chromatique de Flemming, dont la présence se traduit dans les noyaux par leur affinité élective pour les matières colorantes, est d'abord à peu près répandue également dans la protoplasma des cellules embryonnaires. Cette substance se sépare graduellement du protoplasma par une sorte de condensation de la substance nucléaire au fur et à mesure qu^ les noyaux se multiplient.

Cette oyervation que j'ai consignée dans une communication préliii|inaire à l'Académie des sciences, en 1882 (71), a été confirmée Viepuis par A. Sabatier (161). « Pour ma part, non seulement, dit cet auteur, je puis confirmer les observations d'Henneguy, mais j'ajouterai que dans l'étude que je poursuis

depuis plusieurs années des éléments repruducteurs, j";ii élé souvent frappé par la difficulté de bien délimiter par la coloration les noyaux dans les ovules mâles ou femelles pendant leur première période de grande activité, c'est-à-dire alors que vont se produire les éliminations destinées à déterminer la sexualité de l'élément (p. 447) ». Ed. Van Beneden (20) a remarqué aussi dans l'œuf de ÏAscatHs megalocephala, que pendant la cytodiérèse la protoplasma devient beaucoup plus chroraophile. « Ceci tendrait à établir, dit-il, qu'une partie de la substance chromatique du noyau peut, à certains moments, se disséminer dans le corps protoplasmique. Si les rapports entre le corps cellulaire et le noyau chromatique sont tels que la chromatine nucléaire peut se répandre partiellement dans le protoplasma, l'on est en droit de supposer aussi que le môme fait peut se produire pour le suc nucléaire. Rien ne s'oppose non plus à Fhypothèse d'après laquelle le phénomène inverse pourrait se produire (p. 584j. »

C'est dans un germe du troisième ou du quatrième jour après la fécondation, qu'on peut suivre le mieux la division des cellules embryonnaires. Celles-ci sont alors constituées par un protoplasma finement granuleux; leur noyau est assez volumineux et se colore facilement par les réactifs. Je ne ferai que rappeler brièvement le résultat de mes recherches à ce sujet.

Le noyau d'une cellule à Tétat de repos contient un réseau formé de petites granulations se colorant fortement sous l'action des réactifs colorants; il ne contient pas de nucléole distinct, mais on observe souvent une ou deux granulations plus volumineuses que les autres. 11 est rare d'observer dans un germe, tué rapidement par les agents fixateurs, des cellules au repos; elles se présentent presque toutes à Tune des phases de la cytodiérèse. 11 existe, en effet, autour du noyau un espace clair, duquel partent en divergeant des lignes très claires qui vont presque jusqu'à la périphérie de la cellule et dont l'ensemble constitue un aster. Cet aster ne tarde pas à s'allonger et à prendre une forme elliptique , le noyau s'allonge aussi dans la môme direction. L'aster se divise et ses deux moitiés vont former chacune un nouvel aster aux extrémités du grand axe du noyau. Flemming (47), en se basant sur ses observations sur l'œuf des Échinodermes, n'admet pas l'existence d'un

aster unique entourant d'abord le noyau; pour lui, Taster est primitivement dicentrique. Je ne saurais partager cette manière do voir et les nouvelles observations que j'ai faites sur ce sujet ne me laissent aucun doute sur la réalité du premier aster unique.

Au moment de la constitution de l'amphiaster, on voit la membrane du noyau se plisser aux deux extrémités de son grand axe, en face des espaces clairs de l'amphiaster; puis la membrane ne tarde pas à disparaître en ces points et les rayons des asters pénètrent dans l'intérieur du noyau. Bobretsky (24) a observé le môme fait dans l'œuf de la Nassa, et Fol (50) dans celui du PterotracMa autour de la vésicule germinative. Flemming, au contraire, nie la pénétration des rayons des asters dans le noyau; suivant lui, les filaments achromatiques du fuseau prennent naissance aux dépens du noyau. Mes propres observations sont identiques à celles de Strasburger, qui fait provenir toute la figure achromatique du protoplasma cellulaire.

Pendant que se passent les phénomènes que je viens do décrire, le réseau chromatique du noyau s'est fragmenté en plusieurs petits corps homogènes, dans lesquels on no distingue plus les granulations, se colorant plus fortement que celles-ci par les réactifs et ayant la forme de bâtonnets plus ou moins flexueux ou de virgules. Ces petits corps viennent se placer aux extrémités des rayons des asters qui ont pénétré dans le noyau etsedisposent en une ou plusieurs rangées, pour constituer la plaque équatoriale des auteurs. La membrane du noyau disparaît complètement et l'on voit alors nettement dan3 la cellule la figure bien connue du fuseau avec l'amphiaster. Les éléments de la plaque équatoriale se séparent en deux rangées de petits bâtonnets qui se dirigent chacune en sens contraire, en suivant le grand axe du fuseau, vers chacun des deax asters. 11 m'a été impossible, môme en employant les meilleurs objectifs, tel que le j^ à immersion homogène de Zeiss, de constater la division longitudinale des bâtonnets chromatiques, décrite pour la première fois par Flemming et constatée depuis par un grand nombre d'observateurs. Cela tient probablement à la petitesse des éléments chromatiques chez la Truite: la scission longitudinale des filaments se voit en

DES POISSONS OSSEUX -i 1

cH'cL Irt'^s bien dans les gros noyaux des larves de Batraciens urodèles.

Arrivés aux extrémités du fuseau, qui a pris alors la forme d'un rectangle et dont les filaments sont parallèles, les bâtonnets chromatiques, qui ont diminué de nombre, mais dont le volume s'est augmenté, se groupent de manière à constituer une figure pectiniforme. Lors de mes premières recherches sur le cytodiérèse, je croyais que les éléments chromatiques se fusionnaient entre eux, en commençant par leurs extrémités périphériques. Flemming- a réfuté avec raison cette interprétation ; j'ai reconnu depuis que les éléments chromatiques restaient libres, tout en se rapprochant cependant par leurs parties périphériques, et s'ils paraissent souvent fusionnés, c'est qu'ils ont été agglutinés par le réactif fixateur, ou bien parce qu'on ne les examine pas avec un grossissement suffisant.

Le corps de la cellule ne commence à s'étrangler en son milieu, qu'après la division du noyau; les rayons des asters ont alors en partie disparu; mais les filaments connectifs qui réunissent les deux moitiés du noyau persistent jusqu'à la séparation complète des deux nouvelles cellules.

D'après Flemming, le nouveau noyau de la cellule fille parcourrait en sens inverse, pour arriver au repos, les mômes phases que le noyau-mère. Il est difficile de suivre, dans les cellules du germe de la Truite, les transformations du noyaufille ; mais les faits que j'ai observés dans les cellules de segmentation de l'Axolotl et du Triton et qui corroborent tout à fait ceux que Bellonci a décrit dans ces mêmes cellules, tendent à me faire croire qu'il en est de môme chez la Truite et que le noyau-fille se forme d'une façon différente de celle admise par Flemming. Dans les sphères de segmentation de l'Axolotl et du Triton, les filaments chromatiques, qui doivent constituer le noyau-fille, sont disposés en anses à peu près parallèles dont les extrémités libres sont dirigées du côté du plan de séparation des deux cellules. Les anses sont formées par deux filaments parallèles très déliés. Bientôt les extrémités libres de chaque anse se rapprochent de manière à former un anneau ; le filament interne disparait et à sa place on voit des granulations accolées à la face interne de l'anneau. Les anneaux augmentent de volume, se rapprochent les uns des autres et s'accollent sur

kl RECHERCHES SUR LE DÈVËLOl'PEMENT

certains points. Gomment les anses chromatiques se transforment-elles en vésicules, ainsi que Fa vu Bellonci, c'est ce que je ne puis dire actuellement; mais il est certain qu'à un stade un peu plus avancé, le noyaii-iille est formé par raggiomération des vésicules qui se fusionnent petit à petit et constituent finalement le noyau définitif avec son réseau intérieur.

Je ne veux pas insister ici sur cet intéressant phénomène, je ne l'ai décrit sommairement que pour pouvoir expliquer la disposition signalée par Œllacher dans les premières sphères de segmentation delà Truite, disposition dont j'ai vérifié l'existence, ainsi que je l'ai dit plus haut. L'amas formé de plusieurs petites vésicules, qui constitue le noyau de ces sphères, n'est qu'un stade de transformation du noyau-fille. Il est probable que le même processus doit avoir lieu dans les cellules plus petites, mais le faible volume des éléments chromatiques n'en permet pas la constatation.

ParaUastc. — Les phénomènes qui se passent dans la couche sous-jacente au germe, au moment de la segmentation, sont très intéressants à suivre et présentent une grande importance au point de vue de l'embryologie générale. Cette couche, qui a reçu des noms très différents suivant les auteurs, ne parait être qu'un épaississement de la couche corticale, qui enveloppe le vitellus, et que j'ai déjà décrite dans l'œuf non fécondé. Je rappellerai brièvement les opinions émises sur cette couche.

Lereboullet (lll et 112), qui la signala le premier, lui donna le nom de feuillet muqueux; il constata son existence chez le Brochet, la Perche et la Truite, et décrivit les transformations qu'elle subit pendant l'extension du germe sur le vitellus. Cette couche renfermerait, d'après lui, des cellules provenant de la transformation des globules vitelHns.

Kupffer (104) a vu chez l'Épinoche des séries régulières de noyaux au-dessous du germe et des cellules prendre naissance par formation lilre autour de ces noyaux. Aussi a-t-il donné le nom de zone nucléaire (Kernzone) à la couche située au-dessous du germe.

Owsjannikow (124) a remarqué aussi sous le germe du Coregonus lavaretus une couche protoplasmique dans laquelle apparaissent des cellules qui prennent part à la formation de l'embryon.

Van Bambeke (il) a constaté, dansVoduî dnGa.Tdon (Leuciscus rutllus), que le germe segmenté est séparé du vitellus par une couclie particulière, plus épaisse à la périphérie qu'au centre, cette couche mterwiédialre est formée par un protoplasma à granulations nombreuses, plus grosses que celles des cellules de segmentation. Le bourrelet périphérique renferme des noyaux ovalaires à grosses granulations, qui se colorent plus facilement que les noyaux des cellules. 11 existe aussi des noyaux dans la partie centrale amincie. Van Bambeke pense que cette couche provient du germe et que les noyaux qui s'y trouvent dérivent peut-être du premier noyau de segmentation; « les cellules, dont ils constituent les centres, résultent aussi du processus de segmentation, se faisant ici avec plus de lenteur que dans le germe proprement dit. » Suivant lui, la couche intermédiaire se constitue aux dépens de la couche protoplasmique qui entoure le vitellus de l'œuf arrivé à maturité, et il ajoute que <* lorsque la couche intermédiaire existe, le manteau protoplasmique a positivement disparu autour du globe vitelHn. »

Weil (195) et CEllacher n'admettent pas de couche intermédiaire dans l'œuf de la Truite. Cependant (Ellacher a bien vu et figuré une couche renfermant des cellules au-dessous du germe, mais seulement à un stade déjà avancé, lorsque le blastoderme s'est étalé et soulevé au-dessus du vitellus; suivant lui, il se détacherait alors du toit de la cavité sous-germinative des cellules qui pénétreraient dans le vitellus et s'y multiplieraient, mais ne joueraient aucun rôle. QEllacher 'regarde le germe comme étant en continuité avec la membrane vitelline (couche corticale); celle-ci se composerait de deux couches, Tune superficielle, dépourvue de graisse, l'autre profonde, charges de gouttelettes huileuses ; le germe serait compris entre ces deux couches, il a vu quelquefois au-dessous du germe une couche mince grossièrement granuleuse, et ressemblant au protoplasma germinatif.

Klein (94) a bien étudié la constitution de la couche intermédiaire chez la Truite et lui adonné le nom de paraMaste par opposition à ^«rc/^^■^^^a.s^e qui, pour lui, constitue le germe; mais il a reconnu que le parablaste et le germe sont en continuité. Il a décrit avec soin les noyaux qui se forment dans cette couche

et il admet que des cellules prennent naissance dans le parablaste pour venir s'ajouter au germe segmenté. Klein assimile l'œuf des Poissons osseux à une cellule graisseuse : le parablastc représente le manteau protoplasmique, de la cellule ; le vitellus est le globule graisseux.

His (82) donne au parablaste le nom de rempart germinatif (Keimwall) ; les noyaux qu'il renferme préexisteraient à la fécondation et viendraient des leucocytes qui ont pénétré dans l'œuf ovarien.

Hœckel (63) semble avoir méconnu complètement le parablaste dans les œufs transparents qu'il a examinés. Gœtte (58) et Calberla (3J) ont, au contraire, constaté l'existence d'une zone nucléée au-dessous du germe de Poissons osseux.

Ed. Van Beneden (19) a décrit une couche intermédiaire dans l'œuf d'un Poisson marin indéterminé de la famille des Gadidés. Dans cette couche apparaissent par voie endogène des noyaux entourés de stries rayonnantes et qui deviennent les centres de formation de cellules, qui s'ajoutent à celles du germe segmenté.

Hoffmann (89) a retrouvé le parablaste dans tous les œufs de Poissons marins qu'il a examinés, et il a pu dans ces œufs découvrir l'origine du premier noyau du parablaste. Après la formation du premier noyau de segmentation, résultant, comme on sait, de la fusion du noyau spermatique avec le pronucleus femelle, ce noyau se divise en deux, perpendiculairement à la surface du germe ; l'une des moitiés reste dans le germe et devient l'origine des noyaux des sphères de segmentation, l'autre moitié émigré dans le parablaste et donne naissance aux nombreux noyaux qu'on observe dans cette couche. Suivant Hoffmann, à chaque bipartition successive du noyau du germe, correspond une semblable bipartition du noyau du parablaste; de telle sorte, que, au moins au début du développement, il y aurait autant de noyaux dans le parablaste qu'il y en a dans le germe. Les noyaux parablastiques se multiplient comme ceux du germe par division indirecte, en présentant les phases que j'ai exposées plus haut.

Ziegler (200) a constaté aussi récemment l'existence du pa rablastc dans l'œuf des Salmonidés et dans ceux du Rhodcus amarus et du Syngnathe- Enfin, Kingsley et Conn (93), Ryder

(154\ Agassiz et Whilman (1), etc., l'ont décrit dans plusieurs espèces marines. Ryder donne à cette couche le nom iV/ii/jxihlaste mtellin (Yelk-Hypoblast). Agassiz et Wliitman celui de périblaste. Le terme de parablaste ayant été adopté par la plupart des auteurs, c'est le nom que je conserverai à cette couche importante.

L'œuf des Salmonidés est favorable pour l'étude du développement du parablaste, cette couche ne devenant bien apparente qu'à un stade avancé de la segmentation. Dans un œuf non segmenté et pendant les premiers stades du fractionnement, le germe repose directement sur le vitellus, dont il est séparé, ainsi que je Tai déjà dit, par une ligne très nette. Sur des œufs durcis par Tacidc chromique, on peut facilement enlever le germe au moyen d'une aiguille, en exerçant une légère pression au-dessous de lui; il se détache alors avec une petite zone circulaire de la couche corticale. Il en est de môme dans les œufs traités par l'acide osmique ou le liquide picro-acétique ; on ouvrant l'œuf dans l'eau acidulée, la masse vitelhne restée fluide se dissout et le germe se détache entouré d'une zone présentant une consistance plus grande que le reste de la couche corticale. (Planches, fig. 64.)

Des coupes pratiquées sur des germes ainsi détachés et colorés montrent que les bords du disque germinatif se continuent avec une zone protoplasmique, finement granuleuse, ayant le même aspect que le germe et présentant sous l'influence des réactifs la même coloration que lui. Cette zone est à la surface du vitellus et n'existe qu'à la périphérie du germe oîi elle présente son maximum d'épaisseur ; elle va en s'amincissant pour devenir à peu près invisibl^e à une distance qui correspond au quart environ du diamètre du germe. Cette zone, qui est formée en somme par une expansion du protoplasma germinatif, est l'origine du parablaste ; je la désignerai sous le nom de zone périphérique; elle se continue avec la couche corticale enveloppant le vîtellils. Elle ne diffère de cette dernière que par son épaisseur plus grande, et la consistance qu'elle prend sous l'influence des réactifs coagulants.

Pendant les premiers stades de la segmentation, lorsque les cellules profondes sont encore volumineuses, la zone périphérique ne subit aucune modification ; elle reste en continuité

avec le germe. Dès que les cellules profondes commencent à se délimiter nettement les unes des autres, la zone périphérique se sépare aussi du germe. C'est à ce moment qu'apparaissent dans cette zone des noyaux semblables à ceux des cellules de segmentation. Ces noyaux, d'abord rares et très rajjprochés de la périphérie du germe, sont souvent entourés d'un aster. Bientôt on les voit se multiplier par division indirecte en présentant toutes les phases qui s'observent dans les cellules provenant de la segmentation du germe ; presque tous ces noyaux présentent simultanément les mêmes phases de la division. C'est vers la fin du troisième jour et le commencement du quatrième, que le phénomène est le plus visible. A ce moment, la zone périphérique pénètre au-dessous du germe et s'étend, comme l'a très bien vu Van Bambeke (il), de la périphérie vers le centre ; elle finit par former au-dessous du germe une couche continue qui constitue le parablaste.

Le parablaste, une fois diff'érencié, est donc une couche protoplasmique plurinucléée, ayant la forme d'une sorte de cratère à bords très nets dans lequel est enchâssé le germe segmenté. En dehors de celui-ci, il continue à s'étendre sur le vitellus jusqu'à une certaine distance, comme le faisait la zone périphérique. Du côté du vitellus, le parablaste est mal délimité ; il s'enfonce plus ou moins entre les globules huileux accumulés sous le germe; il se mélange aux grosses granulations et aux glor)ules albumineux de la couche corticale.

On peut bien apprécier la forme du par;iblaste en chassant avec le pinceau les cellules du germe sur un œuf durci ; il reste alors une cupule arrondie qu'on ])eut examiner par transparence, après l'avoir montée dans le baume de Canada. (Planches, fig. 04.)

Le parablastr éprouve vis-à-vis des réactifs colorants les mêmes modifications que le protoplasma du germe. Au fur et à mesure que les noyaux se multiplient, le protoplasma parablastique se colore de moins en moins; la substance chromatique, d'abord dilTuse, se concentre de plus en plus dans les noyaux.

Les premiers noyaux du parablaste ont le môme aspect que ceux des cellules de segmentation, et ils conservent cet aspect tant que dure leur multiplication i)ar voie indirecte ; mais ce

mode de division ne dure que peu de temps ; à partir de la fin du quatrième jour, il m'a été impossible de trouver dans le parablaste un seul noyau i»résentant des figures cytodiérétiqu<'s. Du reste, à partir de ce moment les noyaux ont changé daspect ; ainsi que Fabien vu Klein (94), ils sont beaucoup plus volumineux que ceux du germe, leur contour est irrégulier, et ils renferment un réseau chromatique très net et à larges mailles. Balfour (8), chez les Plagiostomes, n'a vu aussi des figures cytodiérétiques dans le parablaste qu'au début de la segmentation.

Le parablaste, comme nous le verrons bientôt, suit l'extension du germe à la surface du vitellus et finit par occuper une large surface; il renferme toujours de nombreux noyaux, qui se multiplient alors par division directe, et subissent plus tard, dans certaines régions, d'intéressantes modifications que je décrirai à propos du développement de l'embryon.

L'origine des noyaux du parablaste aux dépens du premier noyau de segmentation, établie par Hoffmann pour les œufs de certains Poissons marins, est tout à fait inadmissible pour la Truite, puisqu'il n'existe pas trace de parablaste au-dessous du germe, pendant les premiers stades de la segmentation. On serait donc tenté d'admettre, comme l'ont fait les premiers observateurs, entre autres Rupffer(l04), Klein (94), Van Beneden (19), que les premiers noyaux du parablaste apparaissent par formation libre ; mais on sait, d'après tous les travaux récents sur l'origine et la structure des éléments cellulaires, que la formation libre de noyaux ou de cellules est un fait très rare, si toutefois il existe, et les histologistes modernes ont établi d'une façon à peu près certaine que tout noyau provient d'un noyau préexistant. 11 me semble donc plus logique d'admettre que les premiers noyaux parablastiques de la Truite viennent des noyaux du germe. Il est probable que, lorsque la zone périphérique se sépare du germe, des noyaux provenant des cellules de segmentation limitrophes pénètrent dans son intérieur ; il il se passe là, à un stade ultérieur, le môme phénomène que Hoffmann a observé avant le début de la segmentation. Mais tandis que, chez certains Poissons, le parablaste se sépare de très bonne heure du germe et sur toute son étendue, chez les Salmonidés il ne se différencie que plus tard et seulement d'à-

bord à la pcripliérie. Ce fait ne saurait nous surprendre, puisqu'on observe souvent un phénomène semblable en embryogénie. On sait, en effet, qu'un même organe peut apparaître plus ou moins tardivement chez différents animaux, sans que pour cela l'évolution de l'embryon soit modifiée.

Le parablaste doit donc être considéré comme une portion du germe qui ne prend pas part à la segmentation, et dans laquelle la multiplication des noyaux n'est pas suivie immédiatement de la division de la masse protoplasmique. Je dis immédiatement, parce qu'en effet on voit apparaître, à un moment donné de véritables cellules dans le parablaste.

Kupffer (104) le premier constata que dans l'œuf de l'Épinoche il se forme des cellules autour des noyaux du parablaste, et que ces cellules viennent s'ajouter à celles du germe. Klein (94) a vu aussi des cellules naître dans la couche parabl astique, et, d'après lui, elles formeraient l'endoderme. Van Bambeke (il) pense également que l'endoderme provient de cellules formées dans la couche intermédiaire. Ed. Van Beneden (19) admet une formation endogène de cellules dans la couche parablastique ; la striation rayonnée du protoplasma autour des noyaux prouve, d'après lui, la formation de cellules. Du reste, il a vu des cellules engagées dans le parablaste faire sailHe dans la cavité germinative. Balfour (8), chez les Plagiostomes, a vu aussi, audessous du germe segmenté, dans le vitellus, des noyaux en voie de division; ces noyaux deviennent des centres de formation de cellules, qui pénètrent dans le germe et entrent plus tard dans la constitution de l'endoderme. QEllacher (123), ainsi que je l'ai déjà dit, tout en reconnaissant l'existence des cellules dans le vitellus sous-jacent au germe, pense que ces cellules proviennent du germe et ne jouent aucun rôle- Hoffmann '89), à rencontre des auteurs cités précédemment, admet, aussi bien pour les Plagiostomes.que pour les ïéléostéenSj que toutes les cellules du germe dérivent de l'archiblaste et que le parablaste ne participe en rien ;\ leur formation.

Les recherches nuiltipliées que j'ai faites sur l'évolution du parablaste, m'ont conduit aux mêmes conclusions que Kupffer, Ed. Van Beneden et Balfour. C'est sur les œufs d'Épinoche vivants, examinés par transparence, qu'on peut le mieux suivre la genèse des cellules parablastiques. Environ vingt-cinq heures

DES POISSONS OSSEUK 49

après la fécondation, lorsque la segmentation est déjà assez avancée, on voit nettement au-dessous du germe, la zone nucléaire de Kupffer. Dans cette zone les noyaux les plus rapprochés du germe sont entourés de lignes claires, radiées, séparées ])ar des lignes formées de grosses granulations protoplasmiques. Autour de quelques-uns de ces systèmes, on voit une ligne de contour très nette, qui correspond à une membrane cellulaire: certains d'entre eux ne présentent la ligne de contour que du côté du germe et sont encore engagés du côté opposé dans la masse protoplasmique, comme l'a très bien décrit Ed. Van Beneden. Si Ton traite l'œuf par Tacide acétique dilué, on voit apparaître immédiatement dans la zone périphérique du parablaste des figures cytodiérétiques plongées dans le protoplasma; plus près du germe, les noyaux sont à l'état do repos, mais ils sont entourés d'un aster; c'est autour" de ces noyauxque s'organise une membrane cellulaire. Il résulte de cette disposition qu'il n'y a pas de limite nette entre le g^erme et le parablaste ; cette limite est constituée par les cellules en voie de formation qui se détachent du parablaste pour s'ajouter au germe.

La genèse des cellules parablastiques ne paraît pas durer longtemps; dès que le germe commence à s'étaler à la surface du vitellus, que la cavité germinative s'est constituée et que les feuillets blastodermiques se différencient, on ne voit plus de cellules prendre naissance en dehors du germe.

Chez la Truite, il est impossible de suivre directement les phénomènes que je viens de décrire, et c'est seulement sur des coupes qu'on peut voir, comme le montre la figure 6.S (Planches), des mamelons, renfermant chacun un noyau entouré d'un aster, faire saillie au niveau du bourrelet parablastique, et proéminer parmi les cellules marginales du disque germinatif. De même que chez l'Épinoche, la formation des cellules parablastiques aune durée très limitée et ne s'observe guère que pendant le stade représenté figure 44 (Planches). Les cellules d'origine })aral)]astique ont un aspect identique à celui des cellules de segmentation; dès qu'elles sont mêlées à celles-ci, on ne peut plus les distinguer. Il me semble donc impossible de détenniiier leur destinée ultérieure et de dire si elles prennent pari ]»lus spéeiainnejit à la i'onnation d'uw feuillet em-

bryonnaire. Pour ma part, je suis tout disposé à croire que ces cellules ne jouent aucun rôle spécial dans le développement embryonnaire. Elles sont d'abord peu nombreuses relativement aux cellules archiblastiques, de plus elles sont constituées par la même substance que les éléments du germe, puisque le parablaste n'est qu'une portion du disque germinatif; enfin leur mode de genèse, difTérent en apparence de celui des cellules embryonnaires, n'est qu'une continuation du processus de segmentation. Les premiers segments se détachent, en effet, du disque germinatif de la même manière que les cellules parablastiques se séparent du parablaste ; dans le premier cas, les cellules sont très volumineuses par rapport à la masse parablastique, dans le second cas, elles sont beaucoup plus petites.

Von Kowalewski (103) ost arrivé à formuler une manière de voir analogue d'après ses recherches sur différents Poissons. Il a vu que la segmentation peut commencer de bonne heure, lorsque le disque germinatif ne comprend encore qu'une partie du protoplasma de l'œuf; la concentration du protoplasma se continuant longtemps dans le parablaste, celui-ci donne naissance à un grand nombre de cellules qui s'ajoutent au germe. Si la concentration du protoplasma est au contraire terminée au début de la segmentation, très peu de cellules se formeront dans le parablaste.

Depuis la note préliminaire dans laquelle j'avançais ces faits (72), Ziegler (200) a observé aussi des saillies du parablaste parmi les cellules profondes du germe; mais il n'a pas constaté l'existence de noyaux dans ces mamelons, et il doute qu'il y ait là formation de cellules. Kingsley et Conn (93) ont figuré des cellules en Voie de formation dans le parablaste autour des noyaux dans un œuf de Merlucius. G. Brook (27) a observé le même fait chez le TracMnus inpera. Plus récemment Agassiz et Whitman (l) ont vu chez le Ctenoladrus^ les noyaux du parablaste provenir, ainsi que je l'ai indiqué pour la Truite, des cellules de la périphérie du germe. Von Kowalewsky (103) a fait la même observation sur le Carassius auralus. Wenckebach (197) fait dériver aussi du germe les noyaux du para= blasle, mais ils peuvent avoir pour origine, aussi bien les noyaux des cellules périphériques du germe que ceux des ccl-

liilos qui tombeni du toit de la cavité germinative. Enfin List (116) a constaté également chez le Crenilahus pavo que ces noyaux avaient pour origine les noyaux des cellules marginales du germe.

Il est intéressant de rapprocher les phénomènes qui s'observent dans le parablaste de ceux qui se passent dans le sac embryonnaire des végétaux. On sait que chez les Angiospermes, après la formation de l'oosphère, des vésicules synergiques et des vésicules antipodes, et lorsque l'oosphère est fécondée, le noyau définitif du sac embryonnaire se multiplie par division indirecte et donne ainsi naissance à un grand nombre de noyaux contenus dans la couche protoplasraique, qui revêt la face interne du sac. Plus tard seulement ces noyaux deviennent des centres de formation des cellules ; il apparaît entre eux des filaments connectifs sur le milieu desquels se forment des plaques cellulaires et des cloisons cellulosiques, qui délimitent les cloisons du futur albumen. Dans le revêtement pariétal du sac embryonnaire de certaines Légumineuses, d'Ot'obus et de Pisum, et dans le suspenseur des embryons de ces mêmes plantes, Guignard (62) et Strasburger (185) ont vu que ces noyaux, qui s'étaient multipliés par division indirecte, subissent une fragmentation ou une division directe, sans devenir des centres de formation de cellules. La même succession de faits s'observe dans le parablaste. Les noyaux s'y multiplient d'abord par division indirecte, puis autour de certains d'entre eux se différencient des cellules, enfin plus tard les autres noyaux subissent seulement des divisions directes ou des fragmentations, comme nous le verrons, à un certain stade du développement de l'embryon. Ce fait est important au point de vue de la biologie cellulaire; il prouve, en effet, que chez les animaux comme chez les végétaux, la division du noyau et celle de la cellule sont deux phénomènes qui, bien que généralement intimement liés l'un à l'autre, sont néanmoins indépendants.

Lorsque le parablaste est constitué au-dessus du germe, et autour de lui, il continue à s'étendre en même temps que le blastoderme et finit par recouvrir entièrement le vitcllus; j'indiquerai plus loin les transformations qu'il subit et le rôle qu'il joue pendant le développement de l'embryon.

Camtè (jerminative. — J'ai laissé le germe au moment oîi

il est constitué pur un amas de cellules nombreuses, semblables entre elles, excepté à la surface où elles forment une couche déjà nettement différenciée. La forme que présente alors le disque germinatif. lorsqu'on l'observe sur une section médiane, présente des variations. Le plus souvent le germe fait saillie au-dessus du vitellus sur lequel il repose par une base à peu près plane; d'autres fois, au contraire, il est situé dans une sorte de cuvette creusée dans le vitellus, de telle sorte que sa face profonde est convexe et sa surface libre presque plane. C'est sous cet aspect que certains auteurs, entre autres Ziegler (200), ont représenté en coupe ce stade de la segmentation chez les Salmonidés. Cette disposition n'est pas normale, on ne l'observe jamais sur les œufs transparents dont on peut suivre le développement à l'état vivant; elle est due à une compression exercée sur le vitellus par la capsule lors du durcissement, compression qui a pour effet de déformer le germe et de le faire pénétrer dans le vitellus.

Vers la fin du troisième jour après la fécondation, le germe commence à s'étendre sur la masse vitelline. Jusque-là son plus grand diamètre, mesm'é sur des œufs durcis par Tiicide chromique, était depuis le commencement de la segmentation d'environ 1™'",2 à l™",o. Au quatrième jour, le germe mesure 4""", 9; au cinquième, 2"^™, au sixième, 2'"'", 7, au septième, 3"°™. En même temps que sa surface augmente, son épaisseur diminue. Avant d'aborder la description des transformations que subit alors le germe, je dois dire quelques mots d'une question sur laquelle les embryogénistes sont loin d'être d'accord.

Lorsque le parablaste s'est étendu au-dessous du germe de manière à former sous lui une couche continue, on voit la face profonde du disque germinatif se soulever au-dessus du vitellus ; le soulèvement commence à une petite distance des bords, ceux-ci et le centre du germe continuant à reposer sur le parablaste; il en résulte un espace circulaire vide de cellules qui occupe toute la périphérie du germe. Bientôt le centre du germe s'amincit, probablement par migration de cellules vers le bord, et se soulève au-dessus du vitellus; il existe alors entre le vitellus et le germe un espace vide qui est le commencement de la cavité g Cî'minat ire.

Cette cavité a été vue chez les Poissons par la plupart des auteurs, Stricker (186), Rieneek (147), Weil (195), QEUacher (123), Klein (94), Owsjannikow (124), Van Banibcke (11), Van Beneden (195), His (83), Hoffmann (89), Ziegler (200), etc., mais quelques-uns d'entre eux ont admis en outre dans l'épaisseur du germe une autre cavité qui correspondrait à la cavité de segmentation des Amphibiens, des Ganoïdes, des Plagiostomes etdes Cyclostomes. C'est ainsi que Lereboullet(ll 1-112), décrit le germe du Brochet, de la Perche, et de la Truite comme une vésicule creuse, et il pense que le fait est général pour les Poissons. Kupffer (104), a vu quelquefois une cavité dans le germe coagulé du Gobius mmutus, mais il s'est demandé si ce n'était pas là le résultat des réactifs. Van Bambeke (11) a observé, chez le Gardon, vers la fin de la segmentation, dans l'épaisseur du germe, une cavité qui, sur des coupes, présentait la forme d'un croissant à courbures sensiblement parallèles à celles du germe, et à parois irréguliéres. Il a trouvé constamment cette cavité de segmentation et la considère comme normale.

Depuis Lereboullet, le seul observateur qui ait décrit une cavité de segmentation, chez les Salmonidés, est Ziegler (200). Dans un germe de Saumon mesurant l'"'",o de diamètre, il a trouvé une cavité de O^'^'iS de diamètre et de 0""",2 de hauteur; elle était située excentriquement et son toit était formé par un petit nombre de couches de cellules, tandis que son plancher était beaucoup plus épais. Ziegler décrit aussi une cavité de segmentation dans le germe de la Truite, du Rhodeus amarus et du Syngnathe. Plus tard cette cavité s'élargit vers le vitellus et les cellules qui formaient son plancher s'écartent, de sorte que la cavité de segmentation repose alors sur le vitellus et devient cavité germinative.

J'ai cherché l'existence d'une cavité de segmentation sur un grand nombre de coupes de germes de Truite à différents stades. Je n'ai vu qu'une seule fois, sur un œuf durci par l'acide chromique, une cavité répondant à peu près, par sa forme et par sa situation, à celle qui a été décrite par Van Bambeke et par Ziegler. Sur tous les autres germes que j'ai examinés, il n'y avait pas trace de cavité interne. Mais à un stade peut avancé de la segmentation, tel que celui représenté figure 63 (Planches), j'ai

trouvé quelquefois un espuce irrégulier, vide de cellules, qu'on pourrait considérer comme une cavité de segmentation. Son existence étant loin d'être constante, je crois pouvoir dire avec la majorité des auteurs, qu'il n'y a pas de cavité de segmentation chez la Truite. Il est possible qu'il en existe une chez d'autres poissons, chez le Gardon, le Rhodeus amarus, le Syngnathe etc., mais rabscnce ou la présence de cette cavité ne me paraissent pas avoir une grande importance, ainsi que je le démontrerai lorsque je comparerai le développement des Téléostéens à celui des autres Vertébrés.

Si l'existence d'une cavité de segmentation est encore douteuse chez les Poissons osseux, celle d'une cavité germinative, c'est-à-dire d'une cavité située au-dessous du germe, est admise par tous les embryogénistes. Certains auteurs cependant ont confondu les deux cavités ; ainsi Stricker, Klein et Hoffmann appellent cavité de segmentation, la cavité placée sous le germe,

La formation complète de la cavité germinative coïncide avec le commencement du développement de l'embryon. On peut, en effet, faire remonter à ce stade l'apparition des premiers feuillets embryonnaires. Quand le germe segmenté s'est étalé à la surface du vitellus, et que la cavité germinative occupe toute la portion centrale, le toit de la cavité est formé par cinq à six couches de cellules situées au-dessous de la couche superficielle, qu'on peut appeler co^fc/ie enveloppante ou, avec (Ellacher, couche om^née. Ainsi que je l'ai déjà dit, les bords du disque germinatif reposent sur le vitellus, ou du moins sur le parablaste; ces bords constituent le bour7^elet get^minatif qui se distingue très bien sur des germes vus en surface et montés dans le baume du Canada, où il parait plus opaque que le germe. Ce bourrelet est formé par une masse cellulaire qui, de très bonne heure, est plus épaisse et plus large d'un côté du germe que de l'autre. Il en résulte que le centre de la cavité germinative ne correspond pas à celui du germe.

La partie épaissie du bourrelet germinatif est celle sur laquelle va se développer l'embryon. Elle est déjà très nette sur des germes mesurant 2""°, 8 de diamètre à la fin du sixième jour. Une coupe diamétrale du germe, faite perpendiculairement à la partie épaissie du bourrelet, montre qu'en ce dernier point les cellules profondes du germe s'avancent dans la cavité germi-

DES POISSONS OSSKUX 55

nalivc d'une manière irrégulière (Planches, fig. 89). Un assez grand nombre de ces cellules se séparent du bourrelet et sont disséminées sur le plancher de la cavité. Pour employer une comparaison qui rend bien l'aspect du germe à ce stade, vu sur une coupe, on peut dire que le disque germinatif représente une voûte très surbaissée, dont les piliers se seraient en partie écroulés et dont les pierres formeraient un talus à la base des piliers. Des pierres de ce talus auraient roulé sur le plancher de la voûte jusqu'à une certaine distance. Cette image correspond du reste à peu près à ce qui se passe dans le bourrelet à ce moment ; mais comme ce processus correspond à la formation des feuillets embryonnaires, j'exposerai brièvement, avant de donner les résultats de mes recherches à ce sujet, les principales opinions qui ont été émises par les auteurs sur cette question, la plus controversée de l'embyrogénie des Poissons osseux.