VI. — FORMÂTIO?^ DES FEUILLETS BLASTODERMIQUES

A l'exemple de Gœtte (58) et de Van Bambeke (11), qui a fait un très bon historique de la question, on peut diviser en plusieurs groupes les opinions des embryologistes relativement à l'origine des feuillets enibryonnaires des Poissons.

On peut d'abord établir deux grands groupes : dans le premier se rangent tous les auteurs qui font provenir du germe segmenté les trois feuillets du blastoderme ; dans le second groupe, ceux |qui n'en font provenir que deux, le troisième feuillet dérivant du parablaste. Chacun de ces groupes admet des subdivisious qui comportent les différentes opinions émises sur le mode de formation de chaque feuillet.

I. — Les premiers auteurs qui ont abordé l'embryologie des Poissons osseux, Ratlike (135) et von Baer (4), n'ont étudié les œufs qu'à l'aide de méthodes tout à fait imparfaites, et malgré cela ils sont arrivés à des résultats qui concordent à peu près entièrement avec ceux des auteurs les plus récents. Les deux célèbres embryologistes admettaient que le blastoderme se partage d'abord en deux feuillets, l'un superficiel, ou feuillet séreux (ectoderme), l'autre profond, feuillet muqueux (endoderme); de ce dernier se sépare plus tard le feuillet moyen ou vasculaire (mésoderme).

C'est à cette opinion que se sont rangés plusieurs observateurs. Stricker, Rieneck, (EUacher, His et Hoffmann font, en effet, dériver les trois feuillets du germe. Après la différenciation de la couche superficielle, membrane enveloppante, la masse du germe se sépare en trois couches qui sont les trois feuillets; ces auteurs diffèrent cependant entre eux sur des points secondaires. Ainsi Stricker, Rieneck et Weil admettent que des cellules tombent de la voûte de la cavité germinaave sur le plancher et émigrent ensuite vers le bourrelet périphérique. CEllacher pense au contraire que ces cellules pénètrent dans le vitellus, s'y multiplient et forment les noyaux du parablaste ; j'ai déjà démontré l'erreur d'CEUacher à ce sujet.

D'autres embryologistes, qui font provenir également les feuillets blastodermiques du germe segmenté, assignent à la formation de ces feuillets un mode différent de la simple différenciation adnnse par les auteurs cités précédemment. Gœtte(60), le premier, observa qu'après la formation de la couche superficielle (Beckschicht), la couche fondamentale du germe (Grundschicht) ou couche blastodermique primitive (primitwe Keimschicht), se recourbe sur ses bords dans l'intérieur de la cavité germinative et donne naissance h une couche blastodermique secondaire (secunckvr'e Kcmischicht). La partie non réfléchie de la couche blastodermique primitive constitue l'ectoderme ; la partie infléchie se sépare plus tard en deux autres couches, dont l'une est le raésoderme et l'autre l'endoderme.

Telle est aussi l'opinion d'Hseckel (63). Pour lui, l'endoderme résulte d'une invagination des bords du disque germinatif; quant au mésoderme, il aurait une double origine; il viendrait en partie par délimination de l'ectoderme et en partie parla migration de cellules amiboïdes de l'endoderme.

Dans une note présentée à la Société philomatique, en 4880, je faisais connaître le résultat de mes recherches sur le développement des feuillets blastodermiques chez les Poissons osseux, et je me rangeais complètement à l'opinion de Gœtte(69).

Depuis lors, deux auteurs américains, Kingsley etConn (93), ont vu aussi la réflexion du disque germinatif pour donner naissance à l'endoderme, dans des œufs de Poissons marins (Ctenoladrus, Merlucius); mais, contrairement à ce que j'avais avancé, ils admettent que la couche superficielle (membrane

enveloppante) prend seule part à la rétlcxion. Ziegler (200) a reconnu récemment la réflexion des bords du germe chez le Saumon, la Truite et le Rhocleus amarus. Goronowitscli (57) admet également la réflexion de Tectoderme, sans participation de la couche enveloppante.

II. — Les embryologistes du second groupe, ceux qui font dériver le feuillet interne du parablaste, sont moins nombreux que ceux qui font provenir tous les feuillets du germe segmenté : ce sont Vogt (191), Lereboullet (111), Kupfl'er (104), Owsjannikow(l24\ Klein (94), Van Bambeke (11), Ed. Van Beneden (19), Agassiz et Whitman (1), et Brook (27).

Vogt qui, dans son travail sur l'embryologie des Salmoncs, n'attachait pas une grande importance à la distinction des différents feuillets, est peu exphcite sur l'origine de ces feuillets; parlant des cellules qui forment l'intestin, il se demande si elles sont baignées par le liquide vitellaire ou si elles en sont séparées par une membrane. Lereboullet est beaucoup plus affirmatif et admet que le feuillet muqueux n'a dans l'origine aucune connexion avec le blastoderme. Kupffer rapproche la zone nucléaire (parablaste), qu'il a observée chez l'Épinoche, du feuillet muqueux de Lereboullet, mais il ne se prononce cependant pas catégoriquement sur l'origine véritable, ni sur l'époque d'apparition de l'endoderme. Owsjannikow admet que des cellules sortent du parablaste et viennent se disposer entre le germe et le vitellus en une rangée régulière qui semble constituer un feuillet spécial, sur la nature duquel il ne se prononce pas. Van Bambeke est plus précis dans ses conclusions ; pour lui, il apparaît d'abord deux feuillets blastodermiques primaires ou fondamentaux : le feuillet primaire externe (ectoderme) et le feuillet primaire interne (endoderme). Le premier se différencie de bonne heure en une couche cellulaire simple (lamelle enveloppante), puis plus tard en feuillet sensoriel et en mésoderme. Le feuillet interne vient du parablaste et peutêtre concourt-il à former la lamelle vasculaire de von Baer. Klein assigne aussi à l'endoderme une origine parablastique, tandis que les deux autres feuillets sont archiblastiques.

Pour Ed. Van Beneden, le germe donne naissance à la membrane enveloppante et au feuillet ectodermique destiné à se subdiviser ultérieurement en un feuillet sensoriel et en un

58 liEGHERCHES SUR LE DÉVELOPPEMENT

feuillet moyen externe. Le parablaste produit le feuillet endodermique destiné à former plus tard le feuillet moyen interne, qui fournira les éléments du sang, les vaisseaux et le tissu conjonctif, et à donner naissance à Tépithélium du tube digestif.

Dans un premier travail paru en 4884, Brook (25), d'après ses observations sur le TracMnus viper^a, se rangeait à ma manière de voir, quant à Torigine de Tendoderme. Mais il admettait aussi que le parablaste pouvait prendre part à la formation da tube digestif. « My observations, dit-il, appear to confirm those of Henneguy, that the invagination observed in optic section in the living egg is an inward folding of the lowerlayer cells of the epiblast, and that aftenwards the alimentary tract is built up frora this layer, together \\\ïh material derived from the intermediary layer (parablaste). This point cannot, howerer, besettled definitely, \vithout a careful examination of sections of this stage. » Plus récemment Brook (36), après avoir étudié le développement du Motella Tnustela et pratiqué des coupes d'œufs de Trachinus vipera, est revenu sur sa première opinion. Pour lui, il se forme, tout autour du germe, des cellules dans le parablaste ; ces cellules, plus grosses que les cellules de segmentation, viennent se placer au-dessous de l'ectoderme, pour constituer l'endoderme : « The hypoblast is not derived from the archiblast at ail, but from the periblast and the yolk by a procès of ségrégation. »

Enfin je ^citerai l'opinion de Balfour (9), qui admet que, dans les œufs des petits Téléostéens, l'endoderme provient entièrement du parablaste, tandis que chez les Salmonidés ce feuillet, de même que chez les Plagiostomes, ne serait formé que partiellement par des cellules dérivant du parablaste. Du reste Balfour n'a pas fait de recherches suivies sur ce sujet.

Mes propres observations ont porté sur la Truite, la Perche et l'Épinoche; chez ces deux derniers Poissons, on peut suivre la réflexion du disque germinatif sur l'œuf vivant et sans l'aide d'aucun réactif; chez la Truite ce n'est que sur des coupes que le phénomène peut être observé.

Les germes de Truite traités par l'acide osmique, puis par la liqueur de Mûllor et l'alcool, ou par le liquide picro-acétique, sont les plus favorables pour l'étude de la réflexion du blastoderme. Sur les germes durcis par l'acide chromique, la réflexion

est beaucoup plus difficile à apercevoir, ce qui explique qu'elle ait été méconnue par la plupart des auteurs qui ont abopdé l'embryogénie des Salmonidés, car ils ont généralement employé Tacide chromique.

Une coupe pratiquée à travers un germe traité par l'acide osmique, vers le sixième jour de l'incubation, montre nettement les différentes couches qui constituent le disque germinatif. La couche superficielle, couche enveloppante, formée par une seule rangée de cellules cylindriques, en palissade, s'étend sur toute la surface du germe et s'arrête brusquement au niveau du bourrelet parablastique ; c'est ainsi que la représentent la plupart des auteurs. Au-dessous de cette couche se trouve le toit de la cavité germinative, qui, dans la région médiane, est encore formé par un petit nombre de rangées do cellules. Cette seconde couche, que je désignerai dorénavant sous le nom à'ectoderme, est plus épaisse sur ses bords au niveau du bourrelet germinatif. En ce point se trouve une troisième couche, en continuité sur le bord avec l'ectoderme, mais séparée de lui un peu plus loin par une fente très nette qui communique avec la cavité germinative. Le bord du disque germinatif est arrondi et il est facile de constater en cet endroit la continuité entre Tectoderme et la couche inférieure, que je désignerai sous le nom à'endodet'me primaire. La couche enveloppante, le bourrelet parablastique et le bourrelet germinatif circonscrivent un espace triangulaire qui fait le tour du germe. Cette sorte de canal ne se voit bien que sur les germes traités par l'acide osmique ; ce réactif ratatine en effet les cellules, dessine et exagère les cavités; normalement le bourrelet germinatif remplit à peu près le canal dont je viens de parler. Les cellules marginales de la couche enveloppante sont plus développées que celles qui constituent le reste de la couche. Souvent elles donnent naissance à des cellules qui font saillie dans le canal périgermitatif et tendent à le combler. Ces cellules, peu nombreuses chez la Truite, ont été bien vues par von Kowalewski chez un GoMus, et il leur attribue un rôle important pour la formation de la vésicule de Kuptfer. Je n'ai pu constater leur existence chez la Truite qu'au moment de la réflexion de l'ectoderme, et il m'a été impossible de suivre leur évolution ultérieure. Je crois que leur présence indique seulement un point d'accrois-

sèment de la couche enveloppante, qui suit l'extension du blastoderme à la surface de l'œuf. Dans les pièces durcies par l'acide chromique, le canal disparaît parce que les cellules sont gonflées ; il en est de même de la fente qui sépare Tectoderme de sa portion réfléchie; cette fente est alors remplacée par une simple ligne, comme CEllacher l'a très bien représenté Planche I, fig. 4 et o. Les germes traités par le liquide picro-acétique me paraissent se rapprocher le plus de l'état naturel ; ils montrent le canal à peine marqué, mais suffisamment cependant pour qu'on saisisse très bien la courbure du bord du disque germinatif. Quant à la fente, elle est aussi seulement indiquée et sépare nettement les deux premiers feuillets blastodermiques. La fente de séparation s'élargit vers l'intérieur de la cavité germinative; là, l'endoderme primaire n'est pas nettement délimité; il est constitué par des cellules irréguHèrement disposées, dont les plus internes sont isolées et reposent sur le plancher de la cavité germinative. La partie externe de l'endoderme primaire fait suite immédiatement à l'ectoderme; au niveau de la réflexion, on trouve souvent en abondance des cellules en voie de division ; ce fait prouve qu'il se produit en ce point une multiplication cellulaire très active. Au contraire, dans le parablaste sous-jacent au bourrelet germinatif, on ne voit aucun indice de formation cellulaire ; les noyaux conservent leur aspect caractéristique, et le protoplasma n'est le siège d'aucun aster indiquant une organisation de cellules, comme cela s'observe à un certain stade de la segmentation. (Planches, fig. 89.)

La partie invaginée de l'ectoderme s'étend beaucoup plus loin dans la cavité germinative du côté où se formera l'embryon que du côté opposé.

Les œufs de Perche et d'Épinoche, placés sur le côté, sous le champ du microscope, et légèrement comprimés, montrent facilement, à l'état frais, les faits que je viens de décrire chez la Truite. On peut constater sur eux l'existence réelle du canal circumgerminatif et celle de la fente qui se trouve entre l'ectoderme et sa partie réfléchie. (Planches, fig. 88.)

On doit se demander par quel mécanisme se fait la réflexion de l'ectoderme pour former l'endoderme primaire. L'extension du germe à la surface du vitellus et la formation de la cavité

DES l'OISSONS OSSEUX 61

germinative ne peuvent s'expliquer que par un déplacement des éléments constitutifs du germe : c'est-à-dire des cellules embryonnaires. Ce déplacement est produit, selon toute vraisemblance, par un mouvement amiboïde des cellules qui émigrent du centre vers la périphérie, et de la profondeur vers les parties supérieures et latérales du germe. Il n'est pas possible d'observer directement les changements de forme des cellules chez la Truite; peut-être pourrait- on les apercevoir dans les œufs très transparents et à développement rapide de certains Téléostéens; je n'ai rien vu de semblable dans les œufs de la Perche et de l'Ëpinoche, oii le développement se fait trop lentement.

Un autre facteur important intervient dans l'extension du germe; c'est la multiplication cellulaire. Cette multiplication se faisant principalement. dans les parties marginales du disque, on comprend que ces parties s'épaississent. A un certain moment, la migration des éléments se ralentit, tandis que la prolifération augmente dans le bourrelet germinatif. 11 en résulte que les éléments nouvellement formes sont repoussés vers la cavité germinative et qu'il se produit ainsi une réflexion du blastoderme. Cette invagination me paraît être plutôt due à une prolifération cellulaire qu'à un véritable reploiement de la couche ectodermique ; mais, quel que soit le mécanisme de ce processus, le résultat est le même : la couche endodermique primaire est formée aux dépens des cellules ectodermiques. Tel est du moins le cas des œufs que j'ai étudiés, c'est-à-dire ceux de la Truite, de la Perche et de rÉpinoclie.

L'accroissement de la couche enveloppante ne se fait que par multiplication des cellules, et, dès qu'elle est différenciée, je ne crois pas que de nouveaux éléments viennent s'y ajouter.

Lorsque la réflexion de l'ectoderme s'est produite au niveau du bourrelet germinatif, le blastoderme continue à s'étendre sur le vitellus. La migration des éléments cellulaires continue à se faire du centre vers la périphérie, mais d'une manière inégale, c'est-à-dire qu'elle se fait i)lus activenKmt vers la région embryonnaire que du côté opposé. Le toit de la cavité germinative s'amincit de plus en plus et finit par être réduit à une seule couche de cellules, recouverte toujours par la couche enveloppante, dont les cellules sont devenues alors pavimcnteuses.

L'ectoderme s'épaissit au niveau de Técusson embryonnaire, et Tendoderme primaire s'étend de plus en plus au-dessous de lui, dans la cavité germinative. Ce dernier feuillet s'épaissit également dans sa portion initiale. Sur le reste du bourrelet germinatif les deux feuillets restent au contraire assez minces, formés seulement de deux ou trois couches de cellules, et Tendoderme ne s'étend que peu dans la cavité germinative.

La cavité germinative, en s'agrandissant par suite de l'extension du germe sur le vitellus, diminue de hauteur, de telle sorte que son toit est presque en contact avec le parablaste, dont il est cependant séparé par une petite quantité de liquide.

L'extension du parablaste suit celle du germe ; cette couche présente son maximum d'épaisseur au-dessous de l'écusson embryonnaire ; c'est aussi en ce point que les noyaux qu'elle renferme sont les plus nombreux.

Le mésoderme ne commençant à apparaître qu'assez tardivement, lorsque l'embryon est déjà différencié à la surface du blastoderme, je ne m'occuperai du développement de ce feuillet qu'à propos de l'évolution de l'embryon.