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dance extrême de leucocytes. Les parois des veines en sont absolument infiltrées ; polynucléaires et mononucléaires sortent également des vaisseaux sanguins, auxquels il forment de véritables gaines, de là ils de dirigent vers le foyer d'infection par traînées épaisses.
L'épiderme, les endothéliums sont intacts ; les fentes lymphatiques sont vides. Cette coupe, d’une lecture extrêmement facile, nous montre donc que le foyer vibrionien a été circonscrit immédiatement par les leucocytes polynucléaires qui ont ainsi opposé aux microbes une barrière infranchissable. L’englobement et la destruction de ces microbes sont déjà avancés. Nous assistons également ici au début d’un processus secondaire caractérisé par l’arrivée des leucocytes mononucléaires accumulés maintenant en grande quantité sur les limites de la zone infiltrée et sortant en foule des vaisseaux sanguins où ils sont aussi nombreux que les polynucléaires.
Cobaye vacciné. Injection de 1/5 de culture âgée de 24 heures. Guérison.
$ LEUCOCYTOSE LEUCOCYTOSE DE L'EXSUDAT HEURES TEMPÉRATURES DU SANG PAR MILEIM. CUBE Avant l'injection....... 380,4... 926007" 0 L'HEUTE APPOR IA NEC MUNOSN SES 16.000... 9.000 2 heures et demie après 38°,9.... FONUOO EE 31.000 4 heures après ...... MN SERRE MATTER 67.000 Bb — A OL SOS Tr TR 2 0 OO 95.000 10 — FRE Er elérete NE (00 DT an 1E AUOT 350.000
L'exsudat recueilli 1 heure après l'injection contient un très grand nombre de vibrions libres. Les leucocytes, polynucléaires, renferment tous des vibrions en très grand nombre. Quelques hématies.
Au bout de 4 heures, le nombre des vibrions libres est excessivement faible. Parmi les leucocytes, il y a 1 mononucléaire, pour 7 polynucléaires et 1 pseudo-éosinophile sur 5 polynucléaires. Tous sont bourrés de vibrions : certains en contiennent jusqu’à 70 et 80. Beaucoup de ces vibrions sont réduits en granulations. Pas de leucocytes dégénérés.
Au bout de 10 heures, l’exsudat est absolument purulent; 1 mononueléaire pour 6 polynucléaires. Pas de lymphocytes. Beaucoup de pseudo-éosinophiles. Tous ces phagocytes sont distendus par les microbes englobés. Les vibrions libres sont tout à fait rares et se colorent bien.
Il à été impossible de recueillir d'exsudat après 10 heures. Nous voyons qu'à ce moment la presque totalité des vibrions est englobée; notons également la aible réaction fébrile, ainsi que la faible leucocytose du sang.
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Cobaye vacciné. Injection de 1/3 d'une culture âgée de 20 heures.
Guérison.
É LEUCOCYTOSE LEUCOCYTOSE DE L'EXSUDAT HEURES TEMPÉRATURES DU SANG PAR MILIMIL. CUBE
Avant l’injection....... 281 US 0006 0 Une demi-heure après.. 380,7... 8.000.... 6.000
4 heures après... ..... Bo great TT 80 000 7: 300.000
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Ainsi donc : léger mouvement fébrile ; leucocytose du sang faible, la proportion de leucocytes étant déjà fort élevée dans le sang avant l'injection. Réaction leucocytaire locale très énergique. Au bout de 4 heures, le nombre des vibrious libres est déjà minime ; les phagocytes, presque tous polynucléaires, en sont bourrés. On ne trouve plus de vibrions libres au bout de 10 heures. Beaucoup de pseudo-éosinophiles. Au bout de 26 heures, c'est à grand’peine que nous réussissons à nous procurer une goutte d’exsudat qui nous permet de faire une préparation sur lamelle. À ce moment, au niveau du point d’inoculation, on sent une petite tumeur bien délimitée, non fluctuante. L’exsudat contient relativement peu de leucocytes : la moitié de ceux-ci est représentée par des polynucléaires lous bourrés de granulations pseudo-éosinophiles. Quelques-uns, rares à la vérité, renferment des vibrions prenant le bleu. La seconde moitié se compose de quelques lymphocytes et surtout de mononucléaires à noyau vésiculeux : plusieurs contiennent dans leur protoplasma des masses se colorant énergiquement par le bleu et provenant, peut-être, de leucocytes ingérés. Pas de vibrions libres. L
Nous voyons done que les mononucléaires n’ont apparu dans l'exsudat que fort tard, entré la dixième et la vingt-sixième heure; que, d'autre part, on ne trouve plus à ce dernier moment que des pseudo-éosinophiles, fort rares au début du processus inflammatoire.
Cobaye neuf. Injection de 1/15 d'une culture âgée de 30 heures. Injection dans le péritoine de ? c. c. 1/2 de teinture d'opium. (Poids de l'animal : 750 gr.) Mort au bout de 11 heures.
; -LEUCOCYTOSE LEUCOCYTOSE DE L'EXSUDAT HEURES TEMPÉRATURES DU SANG PAR MILLIM. CUBE Avant l’injection....... 380,6... 6.000... , 0 Une demi-heure après.. 350,7.... 272000" 0 1 heure et demie après. 34°,2.... PARTNER UE 0 MR VEN 256 CE CPAS OO 0 T — — — DORA AT DOUTE 11
11 heures après....... Mort.
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AUTOPSIE. — Dans le péritoine, épanchement peu abondant, teinté légèrement en rouge. Viscères très hyperhémiés ; estomac distendu de gaz,
Examen de l'æœdème local. — Leucocytose nulle. Les vibrions fourmillent ; nombreuses formes spirillaires. Quelques hématies.
Examen de l’'épanchement péritonéal. — Leucocytose nulle. Quelques hématies. Vibrions cholériques en assez petit nombre, tous libres, Etude des coupes. — Dans le tissu cellulaire sous-cutané, au niveau du
point d'inoeulalion, siège un foyer de nécrose très étendu, limité par du tissu conjonctif sain. Dans l’intérieur de ce foyer fourmillent les vibrions. Ceux-ci ont envahi le derme tout entier, remplissent ses mailles, les espaces Iymphatiques, les follicules pileux, ils sont accumulés en grand nombre sous l’épiderme.
Au niveau du foyer d’inoculation, de même que dans le derme, la leucocytose est absolument nulle; dans l’intérieur du foyer, on trouve cependant de très rares lymphocytes, dont quelques-uns contiennent des granulations basophiles.
Au contraire, les veines, les capillaires du tissu cellulaire sont entourés d’une gaine de leucocytes émigrés; ces éléments infiltrent également la paroi des vaisseaux, et se trouvent en très grande abondance à leur intérieur. Ce sont à peu près exclusivement des polynucléaires; ils ne dépassent pas le voisinage immédiat des vaisseaux. Un grand nombre d’entre eux contiennent des vibrious ; mais la plupart de ces phagocytes présentent des signes de dégénérescence; beaucoup sont réduits au noyau. Ils ne contiennent pas de granulations acidophiles, ainsi que ie montre la coloration par le mélange de Biondi. Ainsi done, au stade étudié, commence la diapédèse des leucocytes, nulle jusque-là; ces éléments n’ont pas encore infiltré les tissus envahis; seuls les vibrions les plus voisins des vaisseaux ont été englobés; encore la plupart des phagocytes ont-ils succombé après celte ingestion. Remarquons en outre que linjection de teinture d’opium à déterminé la mort d’un animal ayant reçu une dose non mortelle de vibrions cholériques. | :
Cobaye vacciné de 700 gr. Injection de 1/6 d'une culture âgée de ?h heures. Injection dans le périloine de 2 c. c. 1/3 de teinture d'opium. Mort au bout de 13 heures. |
Un cobaye témoin de 690 gr. reçoit dans le péritoine la même dose de teinture d'opium, sans injection sous-cutanée de vibrions cholériques. Guérison. :
LEUCOCYIOSE LEUCOCYTOSE DE L'EXSUDAT HEURES TEMPÉRATURES DU SANG PAR MILLIM. CUBE Avant l'injection. ...... 380,4... 5.600... RO 1 heure après........ 3402... 33.000... et 3 heures — :1:.4.. DARRESS ES AN TITRE EE RTE 0 LE OT SRG RO Te LOS L'OE Ée CURE do SRE dE BARRES SES, men SEE LE OL 4150 TORRENT ET ARE NE do, US Lo NNI ER 42,000
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Ce qu'il faut d’abord remarquer ici, C’est l’apparition tardive des leucocytes, bien que l'animal fût vacciné ; puis leur rapide augmentation numérique dans l'exsudat entre la cinquième et la dixième heure. L'animæ commence à sortir du sommeil narcotique 3 heures après l'injection de teinture d’opium. Il est à peu près réveillé au bout de 4 heures. C’est à ce moment que les leucocytes commencent à apparaître daus l’exsudat ; aucun vibrion n’est encore englobé.
Au bout de 5 heures, les leucocytes ont très légèrement augmenté de nombre; tous sont des polynucléaires ; 1/4 de ces éléments contiennent des vibrious ; la plupart présentent des signes-de dégénérescence : les bords du protoplasma sont déthiquetés et le noyau se colore souvent mal.
10 heures après l'injection, l’exsudat présente une abondante leucocytose, composée de polynucléaires. Tous les leucocytes contiennent des vibrions en grande quantité. Le nombre des globules dégénérés est faible. On trouve beaucoup de vibrions libres et se colorant énergiquement par le bleu. L'animal meurt au bout de 13 heures. Le péritoine contient un peu d'exsudat d’aspect louche ; il renferme une quantité de polynucléaires bourrés de vibrions. Quelques vibrions libres. ;
Cultures sur plaques. — Les cultures faites avec les exsudats sous-cutané et péritonéal ont donné des colonies innombrables. Le sang est stérile.
Ce qui résulte tout d’abord de cette série d'expériences, c'est la connexion très étroite qui existe entre la guérison de l'animal d'une part et l'abondance des leucocytes contenus dans l’exsudat de l’autre. Les cobayes neufs auxquels nous avons injecté des doses très élevées de vibrions cholériques ne présentaient, au moment de la mort, que 570, 400, 57 leucocytes par millimètre cube de l’exsudat local; vient-on à diminuer la dose, aussitôt le nombre des leucocytes augmente dans le liquide de l’œdème : on en compte alors 17,500, 8,200, jusqu’à 85,000 par millimètre cube. Si enfin l’animal doit guérir, la leucocytose locale est d’une abondance extrême (le processus leucocytaire est le même, que l'immunité de l’animal soit naturelle ou acquise) : on trouve alors 350,000, jusqu'à 700,000 globules blancs dans un millimètre cube de l’exsudat.
Un autre fait remarquable est la rapidité avec laquelle se produit l'afflux leucocytaire lorsque l'animal doit résister. Cette leucocytose locale est déjà sensible une demi-heure après l’inoculation; chez les cobayes vaccinés elle se manifeste plus vite que chez ceux qui ont simplement l'immunité naturelle; nous avons observé chez les premiers 6,000, 9,000 leucocytes par millimètre cube dans l'heure qui a suivi l'injection. Au contraire, chez les cobayes qui succombent, ces éléments n'apparaissent que plusieurs heures après.
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La même connexion existe entre le nombre de vibrions englobés par les phagocytes et la guérison du cobaye. Le phagocytose est tout à fait minime che#les individus qui succombent à des doses élevées de virus; au contraire, chez ceux qui survivent, la totalité des vibrions a été, au bout d'un petit nombre d'heures, ingérée et détruite par les globules blancs.
Remarquons qu’il existe descas, comme dans l'observation IX, où l'animal meurt, malgré une réaction énergique de la part de ses leucocytes ; il nefaut point oublier, en effet, quela résistance individuelle aux toxines microbiennes est un élément infiniment variable.
Il est donc bien clair que la résistance d’un cobaye au vibrion de Massaouah inoculé sous la peau est due à l'intervention de ses phagocytes et à elle seule. On ne peut, en effet, parler ici d'état bactéricide des humeurs ; en effet, nous verrons plus loin que l'injection de teinture d'opinm, qui paralyse pour un certain temps l’afflux des leucocytes, a pour résultat la suppression de l’immunité, en permettant aux vibrions de pulluler dans l'organisme et de cultiver abondamment dans ses humeurs.
L'injection des vibrions sous la peau des cobayes s'accompagne toujours d’une augmentation du nombre des leucocytes dans le sang. Chez les cobayes neufs, cette leucocytose est d'autant plus intense que les chances de guérison sont plus grandes. Le sang des vaccinés est normalement plus riche en leucocytes que celui des cobayes neufs ; mais le nombre des leucocytes intravasculaires augmente, après l’injection de choléra, infiniment moins chez les premiers que chez les seconds.
Voici le processus anatomo-pathologique de l'invasion et de la défense tel qu'il ressort de nos expériences. |
L'animal a-t-il reçu une dose très forte de virus, il y a, peu après, leucocytose du sang ; localement, la leucocytose est nulle ou faible ; la phagocytose également. Les vibrions envahissent les tissus avoisinant le foyer d’inoculation, pénètrent dans les lymphatiques, envahissent la cavité péritonéale et souvent finissent par pénétrer dans le sang. La température rectale monte au début de la maladie, puis descend au-dessous de la normale, et l'individu meurt intoxiqué et infecté tout à la fois.
Avons-nous affaire à un cobaye possédant l’immunité naturelle ou
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acquise ? Les leucocytes polynucléaires sortent en foule des vaisseaux sanguins de la région infectée, se dirigent par traînées vers le foyer d'inoculation, englobent les vibrions et circonscrivent le foyer d'une épaisse barrière, tendant de plus en plus à en atteindre le centre. Au bout de quelques heures, la totalité des vibrions est englobée par les phagocytes et digérée par eux ; plus la digestion intra-cellulaire se trouve à un stade avancé, plus les phagocytes contiennent de granulations pseudo-éosinophiles. À une période tardive, alors qu'il n'existe plus de vibrions libres, tous les polynucléaires sont transformés en pseudo-éosinophiles. Nous avons pu deux fois assister au début d'un processus secondaire caractérisé par l'arrivée des mononucléaires à gros noyaux vésiculeux. Ces macrophages sortent des vaisseaux sanguins ; leur diapédèse est des plus nettes sur les coupes décrites dans l'observation XII. Ici, la guérison est due à la rapidité avec laquelle les vibrions sont englobés, et cela avant d'avoir eu le temps de sécréter une quantité de toxines suffisante pour tuer l’animal. Chez les cobayes bien vaccinés, la réaction fébrile est à peu près nulle.
Si, à un cobaye immunisé, en même temps qu'une dose non mortelle de choléra, nous injectons une dose non mortelle de teinture d'opium, nous observons : un abaissement rapide de la température rectale : une leucocytose marquée du sang. Tant que l'animal n'est pas sorti du sommeil narcotique, aucune diapédèse n'a lieu: les vibrions pullulent, envahissent l'organisme par voie lymphatique et l'intoxiquent. Plusieurs heures seulement après l'inoculation commence l’infiltration du tissu infecté eten même temps la phagocytose. Les phagocytes sont tout d’abord tués par les microbes ingérés, d'où l'abondance de leucocytes dégénérés que l'on trouve à ce stade. À un stade ultérieur, cette phagocytose atteint une réelle intensité, mais l'animal déjà intoxiqué meurt.
Nous nous arrêtons à cette conclusion : contre la pénétration souscutanée du vibrion de Massaouah, l'unique mode de défense c'est la réaction phagocytaire ; supprimons-la ou retardons-la par l'injection de teinture d’opium, nous supprimons du même coup l'immunité. On ne saurait invoquer l'état bactéricide des humeurs, car, dans l’organisme narcotisé d'un cobaye vacciné, les vibrions pullulent. En outre, G. Sanarelli, dans son intéressant mémoire sur les moyens de
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défense de l'organisme contre les microbes, a prouvé que l’on peut, après plusieurs jours, retirer des vibrions virulents du corps d’animaux traités par le sérum préventif. Cet auteur, qui, dans ses expériences, s’est servi du vibrio Metchnikovii, arrive aux mêmes conclusions que nous, relativement au mode de défense de l'organisme contre l'invasion du vibrion par voie sous-cutanée.
