RE RE

résumer l'état actuel de nos connaissances relativement aux rapports qui s'établissent entre le vibrion du choléra et l'organisme réfractaire.

Et d'abord existe-il un microbe pathogène qui soit réellement l'agent spécifique du choléra ?

Koch, en 1883, recueillit constamment dans les déjections cholériques un micro-organisme allongé, recourbé en arc, souvent renflé à une extrémité, qu'il désigna sous le nom de bacille-virgule et considéra comme l'agent spécifique du choléra. En réalité, cet organisme est un vibrion. Au cours des épidémies qui, depuis cette époque, se sont succédé en Europe, ce vibrion fut retrouvé dans les selles de presque tous les individus atteints de choléra, mais avec des caractères très variables quant à la forme extérieure, la virulence, la mobilité et la manière de végéter dans la gélatine.

Le vibrion isolé à Massaouah est grêle, spirillaire ; le vibrion du choléra d'Angers (1889) ou de Hambourg (1892) est incurvé, épais ; Friedriech a signalé à Shangaï une forme droite, baciilaire ; à Malte, il isola un vibrion semblable à un coccobacille.

Certaines formes (Massaouah) liquéfient la gélatine avec une rapidité très grande ; d’autres, signalées par Koch lui-même, ne la liquéfient pas : leurs colonies se présentent alors sous forme de boucliers.

La réaction indol-nitreuse n’est pas davantage un caractère constant et le vibrio Metchnikovii ne la fournit point.

La virulence pour les animaux est également très variable ; le vibrion de Paris (1884) possède une virulence minime; celui de Massaouah tue rapidement le cobaye en injection intrapéritonéale.

Même variabilité dans le nombre et le groupement des cils.

Il existe donc diverses variétés de vibrions cholériques, se rapprochant plus où moins du type décrit par Koch, reliées entre elles par une infinité de termes intermédiaires, mais qu'il est impossible de grouper sous une même caractéristique morphologique.

L'observation directe permet de constater l'extrême instabilité morphologique de ces organismes. Une culture pure sur gélose d’un vibrion cholérique renferme au bout de quelques jours les formes les plus diverses : spirilles, bacilles, cocco-bacilles, coccus, formes d’involution étranges.

Un vibrion isolé à St-Cloud, par Sanarelli, liquéfiant rapidement la gélatine, présentant la réaction indol-nitreuse, très pathogène pour

SET je

le cobaye et pouvant être considérécomme un véritable vibrion cholérique, au bout de trois mois de séjour au laboratoire se montra dépourvu de toute action pathogène pour les animanx ; à ce moment il ne présentait presque plus la réaction indol-nitreuse et ne liquéfiait que très lentement la gélatine.

Des vibrions de Courbevoie et de Hambourg (1892) ingérés à l’institut Pasteur par deux expérimentateurs, puis retirés de leurs selles liquides, manifestèrent une virulence infiniment moindre qu'avant leur passage par l'organisme humain. Au contraire, des vibrions de Paris (1884), inoffensifs pour les animaux, présentèrent une virulence considérable après avoir traversé l'organisme d’un troisième expérimentateur.

Le vibrion de Koch est done susceptible d'un pléomorphisme extrême.

À part quelques exceptions, on trouve l’une ou l’autre de ses variétés dans tous les cas du choléra. Karlinski rapporte l'observation d'un malade atteint de choléra asiatique et dans les selles duquel on n'avait jamais pu déceler de vibrions. À l'autopsie, on trouva dans un cul de-sac du cæcum un liquide clair contenant des vibrions en culture pure.

La présence à peu près constante du vibrion de Koch dans Fintestin des cholériques ; sa présence dans les eaux d’une région frappée par l'épidémie; l'apparition des symptômes du choléra survenant après l'ingestion d’une eau contenant cet organisme (cas de Hambourg, de Montévidéo, de Prades, etc.) sont autant de faits tendant à prouver que ce microbe est bien l'agent pathogène du choléra.

1 manquait, pour entraîner la certitude absolue, la preuve expérimentale. Elle fut fournie en 1893. L’ingestion d’une culture du choléra de Paris (1884) provoqua, à l'institut Pasteur, chez un jeune homme de 19 ans, un cas typique de choléra asiatique, avec diarrhée riziforme contenant des vibrions en quantité, vomissements, hypothermie, crampes dans les mollets et anurie. 3,

Le doute n’est donc plus possible. Le choléra est bien dû à l’action spécifique du vibrion de Koch, organisme hautement pléomorphe et qui devient pathogène pour l'homme dans des conditions non déterminées jusqu'ici. ;

Abordons maintenant l'analyse des recherches entreprises pendant

ces dernières années dans le but d'élucider le mécanisme de l'immunité cholérique.

En 1889, N.Gamaléia publia un travail sur la vaccination chimique contre le vibrio Metchnikovii. I lobtient en imjectant à des cobayes, des pigeons et d'autres animaux, des doses répétées d'un bouillon stérile dans lequel a cultivé le microbe en question. Il put alors constater que les animaux ainsi traités deviennent absolument réfractaires à l'infection par le virus vivant; mais il ne se produit chez eux (cobayes, pigeons) « aucune accoutumance à l'effet du liquide toxique ». Il ajoute : « Par de nombreuses expériences comparatives entre les cobayes déjà intoxiqués et les cobayes neufs, j'ai constaté que leur réceptivité reste toujours la même. »

Certains animaux au contraire (poulet, chien, mouton, lapin) s’accoutument rapidement à l'effet toxique. Mais, fait remarquable, le lapin, particulièrement résistant à l'intoxication chimique, n’est pas susceptible d'acquérir, par ce procédé, une immunité complète vis-àvis du virus vivant.

La résistance d'un animal au vibrio Metchnikovii, et sa résistance à la toxine de ce microbe sont donc deux phénomènes d’ordre tout à fait différent ; on ne peut pas, dans le cas d'un cobaye vacciné chimiquement contre le vibrion, parler d'action antitoxique des humeurs.

La même année, R. Pfeiffer, étudiant le vibrio Metchnikovii, constate que cet organisme peut vivre longtemps dans le corps d'animaux vaccinés ; l’exsudat recueilli au point d'inoculation au bout de 90 heures donne encore sur plaques de gélatine des cultures positives, fait qui n’est pas en faveur de la théorie bactéricide des humeurs. Mais il déclare n'avoir jamais trouvé de vibrions à l'intérieur des phagocytes.

En 1890,Behringet Nissen publièrent leur mémoire sur les propriétés bactéricides du sérum d'animaux vaccinés. [ls constatèrent que le vibrio Metchnikovii cultivé in vitro dans le sérum des cobayes normaux pousse toujours avec la plus grande facilité ; que ce vibrion cultivé dans le sérum de cobayes immunisés meurt, au contraire, au bout de trois à cinq heures; 7 cobayes bien vaccinés fournirent tous un sérum bactéricide. Les résultats obtenus avec d’autres espèces animales furent beaucoup moins coneluants. Néanmoins, se fondant sur la constance des résultats fournis par le cobaye, ils pensèrent que

le sang des individus vaccinés renferme des substances encore inconnues capables de tuer le vibrio Metchnikovii ; que cette propriété se manifeste dans l'organisme ou en dehors de lui, et qu'elle est la véritable cause de l’immunité.

ZLäüslein, dans un mémoire publié en 1890, étudie le sort des vibrions cholériques, inoculés dans le péritoine de cobayes vaccinés et de cobayes neufs. Selon cet auteur, les vibrions passent dans l’appareil circulatoire des vaccinés mais y périssent bientôt; chez les cobayes non vaccinés, au contraire, les vibrions se multiplient dans le sang d’une façon constante, au point que l’on en compte jusqu'à 144,000 par goutte de sang. Des expériences in vitro ont montré que le sang ou le sérum des vaccinés est infiniment plus bactéricide que celui des animaux neufs. Enfin, étudiant la leucocytose du sang, ce savant observa chez les témoins un accroissement considérable du nombre des leucocytes intravasculaires (jusqu'à 400,000 (!) pour 5,000,000 de globules rouges) ; le chiffre des globules blancs chez les vaccinés ne varia pas après l'injection. Notons ici soigneusement que l'expérimentateur avait soumis ses animaux à l'action de la teinture d’opium. Il conclut en déclarant que les leucocytes n'ontaucun rôle dans le phénomène de l’immunité et que les humeurs de l'organisme sont ici les seuls agents bactéricides.

En août 1891, Metchnikoff publie dans les Annales de l'Institut Pasteur un mémoire où il étudie à nouveau les rapports qui s’établissententre le vibrio Metchnikovii et l'organisme réfractaire. Reprenant l'expérience de Behringet Nissen, il constate que le sérum d'un cobaye vacciné est, en dehors de l'organisme, bactéricide pour ce microbe, à tel point qu'au bout de une heure tous les vibrions ont péri; ils se multiplient abondamment, au contraire, dans le sérum d’un cobaye neuf.

Si l’on inocule le virus dans la chambre antérieure de l'œil, on voit que chez le vacciné il y à pénétration abondante de leucocytes dans l’'huméur aqueuse. Quatre heures après le début de l'expérience, plusieurs renferment déjà des vibrions. On ne trouve bientôt plus de virgules libres, et cependant une goutte de l’exsudat retiré au bout de huit jours à donné des cultures dans du bouillon. « Ilya donc une grande différence entre la vitalité de ces microbes dans l’exsudat de l'œil et

le sérum préparé en dehors de l'organisme. » Chez le témoin, aw #7

contraire, les leucocytes ne pénètrent dans l’exsudat qu'en très petit nombre; les vibrions envahissent l'organisme entier et amènent la mort en moins de 24 heures.

Si l'inoculation se fait sous la peau, on ne trouve plus de vibrions libres au bout de 15 heures ; tous sont englobés par les leucocytes. Cet exsudat donne encore des cultures positives au bout de 48 heures. Chez les témoins, au contraire, la réaction leucocytaire est à peu près nulle.

« La survie des vibrions dans l'organisme vacciné est donc beaucoup plus grande que dans le sérum préparé avec le sang de ces cobayes. »

L'auteur déclare que, contrairement aux assertions de Pfeiffer, il a pu constater une phagocytose très prononcée chez tous les cobayes vaccinés, l'absence de ce phénomène chez les témoins. Pour démontrer que les vibrions sont bien englobés à l'état vivant, il emploie la méthode des gouttes suspendues, que nous avons signalée plus haut. Une fois sortis du leucocyte qui les emprisonnait, les vibrions se développent librement dans l'exsudat. « La fonction bactéricide dans l'organisme vacciné réside donc dans les phagocytes et non dans le liquide qui les baigne. » Quant à « l'absence des leucocytes dans l'exsudat d’un cobaye qui doit succomber, elle s'explique sans aucune difficulté par l'influence chimiotaxique négative exercée par la toxine vibrionienne sur les cellules ».

Metchnikoff a pu également constater que « le virus, introduit dans l'organisme réfractaire, subit un renforcement notable de sa virulence » ; enfin il a vérifié le fait établi par Gamaleia, à savoir qu'un cobaye vacciné est aussi sensible qu'un cobaye neuf à la toxine vibrionienne.

Il conclut en déclarant que l'action des phagocytes est seule capable de débarrasser l'organisme des vibrions envahisseurs. |

R. Pfeiffer, au cours de recherches faites en 1892, sur la toxine cholérique, observe que des cobayes qui ont reçu dans le péritoine des doses peu élevées de vibrions vivants, succombent, et cependant ne renferment plus, au moment de la mort, dans leur exsudat péritonéal qu'un nombre très faible, souvent nul, de vibrions. L'auteur en conclut que les animaux sont morts intoxiqués ; quant aux microbes, il pense qu’ils n'ont pu résister à l'action bactéricide du sérum, mais

sans y apporter aucune preuve.

PEALES

G. Klemperer (Bert. klin. Woch., 1892) reprend la question des vaccinations chimiques. Il confère l'immunité vis-à-vis du vibrion cholérique à des animaux de laboratoire en leur injectant des cultures chauffées où du sérum de lapin vacciné. Puis il expérimente sur l'homme ; il vaccine différentes personnes en’ leur injectant des cultures chauffées sous la peau (il considère comme vacciné tout organisme dont le sérum jouit vis-à-vis d’un autre organisme de propriétés immunisantes). Il constate alors que des quantités très faibles de sérum sanguin fourni par les patients ainsi traités suffisent pour rendre des cobayes réfractaires à des doses mortelles de vibrions.

Rapprochant ces faits de ceux qui avaient été constatés par Behring et Kitasato pour le tétanos et la diphtérie, par lui-même pour la pneumonie fibrineuse aiguë, il attribue l'immunisation ainsi obtenue à la présence dans le sérum des vaccinés d’une antitoxine, sans rechercher d’ailleurs ce que deviennent les vibrions dans l'organisme vacciné. D'après lui tout animal vacciné contre les toxines l’est par là même contre le virus vivant.

À. Lazarus, vers la même époque, vaccine des cobayes contre des injections intra-péritonéales de vibrions cholériques au moyen de quantités minimes de sérum fournies par des personnes guéries du choléra. Il attribue cette immunisation au pouvoir antitoxique du cérum employé, pouvoir antitoxique qu'il désigne par 1: 3,000,000. Cette interprétation est purement hypothétique, et l’auteur ne nous fouruit aucun renseignement sur les processus locaux qui accompagnent l'injection des vibrions.

Les deux auteurs précédents considèrent donc la guérison d’un malade atteint de choléra comme due à la présence dans son sang d'une antitoxine, antitoxine dont le pouvoir thérapeutique se manifeste lorsqu'on l’inocule à un cobaye aussitôt après une injection intrapéritonéale de vibrions vivants.

L. Vincenzi, dans une note parue en 1892, déclare que l'injection de vibrions du choléra sous la peau, dans le péritoine ou dans la plèvre des cobayes neufs, est toujours suivie de généralisation dans le sang et dans la cavité intestinale. Il constate que le sérum d'animaux normaux n'est pas en état de tuer les vibrions ; que, d'autre part, l'injection sous-cutanée chez les sujets vaccinés s'accompagne d'une phagocytose énergique.

Au congrès de Londres, en 1891, Gruber avait déjà attiré l’atten-

ie

tion sur le rôle des phagocytes dans le choléra des cobayes. Dans un travail fait en collaboration avec E. Wiener en 1892, il constate que des quantités très fortes de cultures tuées sont nécessaires pour rendre les cobayes malades, alors que ces animaux périssent rapidement à la suite d’une quantité minime de virus vivant injecté dans le péritoine (ces deux auteurs, en désaccord avec R. Pfeiffer, considérant en effet le choléra des cobayes comme une infection). De leur facon d'envisager la question, il résulte que la guérison dépend surtout de la rapidité avec laquelle sont détruits les vibrions introduits dans l'organisme. Ils ne s'expliquent pas relativement au mécanisme de cette destruction. Ils laissent cependant pressentir l'importance qu'ils accordent à la phagocytose. Ils déclarent que, même chez les cobayes neufs, il y a toujours une certaine infiltration leucocytaire dans le péritoine ; que souvent les viscères abdominaux sont recouverts d’un dépôt jaunâtre composé de leucocytes polynucléaires dont un très grand nombre contiennent des vibrions ; ces derniers, dans le cas où ils sont englobés, sont fréquemment dégénérés (p. 262) ; ils constatent enfin (p. 274) que trois animaux inoculés avec l exsudat péritonéal d'un cobaye mort du choléra, résistèrent, et ajoutent que cet exsudat renfermait une masse énorme de phagocytes. Ce dernier fait permettrait de supposer que le nombre de vibrions vivants HR OCR. de la sorte avait été très faible.

Ces deux auteurs pensent également que les cobayes vaccinés acquièrent un certain degré de résistance à la toxine. :

À. Wassermann, dans un travail fait en 1893 à l'Institut de Koch, d'accord en cela avec Pfeiffer, déclare que le choléra des cobayes est une véritable intoxication. Il constate également que lorsqu'on injecte la dose mortelle minimale dans le péritoine d'un cobaye, celui-ci meurt, mais que l’exsudat péritonéal est stérile ou renferme peu de vibrions. Étudiant surle cobaye les propriétés immunisantes du sérum de malades guéris du choléra, il constate que ce sérum n'acquiert ses propriétés vaccinales que plusieurs semaines après la fin de la maladie, alors que l'individu ne renferme plus de vibrions vivants.

Très peu de temps après parut un important mémoire de Pfeiffer et Wassermann sur la nature de l’immunité cholérique. Ces deux auteurs constatent tout d'abord que si l'on injecte dans le péri-

toine de cobayes neufs la dose mortelle minimale, le péritoine est généralement stérile, ou à peu près, tandis que les vibrions se frouvent presque tous enfermés dans les cellules du pus. Les viscères, le mésentère sont recouverts d'un épais dépôt purulent. Si, au contraire, la dose injectée est très forte, le nombre de vibrions libres et mobiles est énorme, celui des cellules polynucléaires minime. Injectant à des cobayes normaux d’une part, à des sujets immunisés de l’autre, des cultures tuées de vibrions cholériques, ces deux savants se convainquirent du fait que la dose mortelle minima est sensiblement la même pour les vaccinés et les témoins et que tous présentent les mêmes phénomènes d'intoxication. Ce n'est donc point contre la toxine que ces animaux sont vaccinés et il est probable que dans le péritoine même se passent certains phénomènes ayant pour résultat, lorsque l'on injecte des cultures vivantes, d’enrayer la production des toxines: on peut constater, en effet, que les vibrions sont tués beaucoup plus vite dans le péritoine des vaccinés que dans celui des témoins.

Le sérum humain de malades ayant résisté au choléra suffit, à très faibles doses, pour conférer l’immunité aux cobayes, ainsi que l’a observé Lazarus. Cela est-il dû à la présence, dans ce sérum, d'une antitoxine ? Non; car des quantités 3, 10, 100 fois plus fortes de sérum ne protègent pas contre des quantités 3, 10, 100 fois plus fortes de virus vivant, et la limite de la dose mortelle est vite atteinte. |

Ce sérum immunisant, d'autre part, ne protège pas les cobayes contre l'action des cultures tuées et ne détruit pas non plus in vitro la toxine cholérique.

Il est, par conséquent, impossible de fonder la théorie de l'immunité cholérique sur la présence d’une antitoxine destinée à neutraliser la toxine. $

Il n'est pas question non plus, dans le sérum des cobayes immunisés, d’une substance bactéricide ; ensemençons, en effet, un semblable sérum avec des vibrions ; si le nombre de ceux-ci s'abaisse momentanément, ils ne tardent pas à se multiplier et à donner des cultures abondantes. À

Faut-il donc expliquer la défense de l'organisme par la phagocytose ? |

Les auteurs du mémoire pensent que la phagocytose est un pro-

cessus secondaire. Ils se fondent sur ce fait que la phagocytose a lieu également lorsque l’on injecte dans le péritoine des cultures tuées par dessiccation.

Ils ne pensent pas non plus que la vaccination protège les cobayes contre l'infection par voie intestinale. En effet, employant la méthode de l’opium, ils ont pu constater que le chiffre des morts était sensiblement le même du côté des vaccinés et du côté des témoins. Ils ont vu cependant que le contenu intestinal des vaccinés présentait de nombreuses cellules du pus renfermant des vibrions plus ou moins dégénérés.

L'immunité vis-à-vis du choléra ne serait donc due ni à la propriété bactéricide des humeurs, ni à leurs propriétés antitoxiques, ni à l’action phagocytaire, mais bien à un processus très complexe et encore inconnu.

G. Sobernheim, dans un mémoire paru vers la fin de 1893, reprend les expériences de Behring et Nissen et constate que le sérum des cobayes vaccinés est très bactéricide, in vitro, pour les vibrions, tandis que celui des cobayes normaux ne l’est à aucun titre. [l se montre partisan de la théorie bactéricide des humeurs et constate également que les animaux vaccinés ne le sont pas contre l'infection par voie intestinale (choléra expérimental de Koch).

Dans les Annales de l'Institut Pasteur (1893), G. Sanarelli publie un mémoire résumant les multiples et ingénieuses recherches faites par lui relativement au mécanisme de l’immunité cholérique chez les cobayes.

Voici les résultats auxquels il parvient :

Les vibrions (vibrio Metchnikovii) cultivés, in vitro, dans le sérum de cobayes bien vaccinés, meurent en grand nombre, mais pas tous. Beaucoup résistent et repullulent ; vingt-quatre heures après l'ensemencement on trouve déjà 211 colonies sur les plaques de gélatine servant à la numération.

Les vibrions ensemencés dans le sérum d’un cobaye vacciné, puis inoculés à un cobaye neuf ont perdu tout pouvoir pathogène. Mais si, au lieu d’injecter simultanément le sérum et les vibrions, on n’injecte que ces derniers, filtrés et lavés au moyen de la solution physiologique de sel marin, on voit qu'ils n'ont aucunement perdu leur viru-

lence.

db

Ilest également facile de s'assurer que dans l'organisme réfractaire, les vibrions acquièrent une virulence supérieure à celle qu'ils possédaient.

L'immunité me réside donc pas dans la propriété atténuante des humeurs. Elle ne réside pas davantage dans leur pouvoir antitoxique. En effet, les cobayes auxquels on injecte simultanément sous la peau une dose toxique de culture stérilisée et 6 à 9 cent. cubes de sérum provenant d’un individu réfractaire ne résistent pas plus à l'empoisonnement que ceux auxquels on injecte de la toxine seule. En outre, une culture faite dans un sérum d’animal vacciné puis stérilisée est tout aussi toxique qu'une culture faite dans du sérum normal ou dans du bouillon, peut-être même plus toxique.

« Le sérum des cobayes vaccinés possède de la façon la plus manmifeste des propriétés préventives et thérapeutiques. » Si, en effet, l'on injecte simultanément sous la peau des cobayes une dose mortelle de vibrions vivants et du sérum vaccinal. les animaux ne succombent pas. Il se forme au point d’inoculation un œdème et une infiltration purulente. Dans cet exsudat les vibrions restent vivants fort longtemps : comment, dans ce cas, l'organisme est-il à l’abri des toxines que ces microbes ne peuvent manquer de sécréter ? Il est facile de constater qu'au bout d’un petit nombre d'heures, il n'y a plus de vibrions libres dans l'exsudat ; les leucocytes au contraire en sont bourrés. Le procédé des gouttes suspendues prouve que sitôt que le phagocyte est placé, en dehors de l'organisme, dans de mauvaises conditions d’existence, il y a multiplication abondante des vibrions endocellulaires ; tant que le leucocyte est actif, les vibrions peuvent quelque temps rester vivants à son intérieur, mais sans donner des produits d'échange.

Si l’on suit le processus local qui se fait chez un cobaye vacciné après injection sous-cutanée, on voit que la région infectée est envahie par les leucocytes qui englobent de grandes quantités de vibrions. Au bout de vingt-quatre heures, il n'y a plus de vibrions libres, et cinq heures après l'injection, un millim. cube de l’exsudat renferme déjà 205,000 globules blancs. |

Même chose a lieu chez le cobaye neuf auquel on injecte simultanément des microbes vivants et du sérum thérapeutique. Seulement, ici la réaction leucocytaire est plus longue à se faire. Chez le témoin