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Les colorations obtenues sont encore plus nettes et plus intenses si l'on remplace le bleu de méthylène par le bleu de toluidine dont la composition chimique est plus constante :

Bleue tolti ne RTE CEE PPS 0 gr. 50 Alcôol abuse RE EE CRE Cr 10 gr.

Has en ENTER EM TR LR RS AN 100 gr.

Les opérations ultérieures sont les mêmes qu'après le bleu de méthylène. De cette façon, les vibrions cholériques sont colorés en bleu foncé, ainsi que la chromatine des noyaux. Si bonne qu’elle soit, cette méthode est cependant imparfaite ; en effet, il y a souvent surcoloration du protoplasma cellulaire ; de plus, des précipités se forment fréquemment dans la préparation, et les vibrions ne se colo-

rent point toujours avec une intensité suffisante. En un mot, la différenciation des tissus est défectueuse.

Les deux méthodes que nous considérons comme préférables à toutes les autres pour colorer les coupes sont : 1° la méthode de coloration par la thionine phéniquée; 2° le procédé imaginé par Nikiforoff pour colorer les spirilles de la fièvre récurrente dans les coupes de rate.

Méthode de lathionine phéniquée. — La thionine ou violet de Lauth est une thioindamine ainsi que le bleu de méthylène son dérivé méthylé. Cette substance n’existe pas dans le commerce.

On laisse les coupes en contact pendant une minute avec la solution suivante :

Faire dissoudre et ajouter peu à peu :

ALI DR DIU SOU LR) ARS A SUP QE TE l'gr. |

L'emploi du tannin est inutile, l'alcool n’enlevant qu’une faible quantité de matière colorante. Déshydrater par l'alcool absolu, faire agir le xylol, monter au baume.

Sur les coupes ainsi traitées, la chromatine des noyaux se dessine

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avec une extrême netteté. [l n'y a point de surcoloration du protoplasma, enfin, les vibrions, colorés en violet foncé, se détachent avec une intensité de relief que ne leur donne aucune autre matière colorante.

L'emploi du tannin assure aux préparations une durée qu’elles n'auraient pas sans cela.

Procédé de Nikiforoff. — Les pièces sont fixées par le liquide (2) signalé dans le paragraphe précédent.

On laisse colorer pendant 24 heures les coupes dans un mélange composé ainsi qu'il suit:

Solution alcoolique de tropéoline 00 à 1 p.100... 5 volumes. Solution aqueuse concentrée de bleu de méthylène 10 vol.

Eau distillée....... PES PARENTS EU Er 10 vol.

Bien agiter en faisant le mélange et ajouter, par 25 c.c. de ce liquide, 5 gouttes d'une solution à 1/1000 de potasse caustique.

Puis laver les coupes à l’eau ; déshydrater rapidement au moyen d’un mélange en parties égales d'alcool absolu et d'éther, faire agir le xylol et monter au baume.

Grâce à ce procédé, la chromatine des noyaux se colore en bleu ; le protoplasma reste incolore : les éléments acidophiles (hématies, granulations éosinophiles) se colorent en jaune par la tropéoline ; les vibrions se colorent très régulièrement en bleu foncé. La différenciation est parfaite.

Ce mode de coloration réussit admirablement (mieux que la thionine) sur les pièces fixées à l'alcool ; il y teinte les vibrions avec une grande intensité ; de plus les granulations basophiles prennent dans ce cas une couleur violette énergique.

Ces deux derniers modes de coloration représentent les méthodes de choix pour colorer les vibrions dans les coupes. Nous insistons encore une fois, avant de terminer, sur la nécessité d’une bonne fixation au sublimé et sur La faible épaisseur que doivent avoir les coupes examinées.

Signalons les services que nous a rendus le mélange de Biondi :

Solution aqueuse concentrée d’auantia'............. 100 c.c. == — — de fuchsine acide ...... 20: cc:

2z — — de'vert de méthyle... 50 cc.

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Au moment de s’en servir, étendre un volume de ce mélange avec trois volumes d’eau; laisser colorer pendant 5-10 minutes. Il est nécessaire, si l'on veut obtenir la triple différenciation, que les pièces aient été fixées par le sublimé. Cette méthode est excellente pour étudier la distribution des leucocytes éosinophiles dans les tissus.

f) Procédés d'examen du sang. — Chaque examen du sang comprenait une analyse quantitative et une analyse qualitative des leucocytes.

L'analyse qualitative se faisait au moyen de l’hématimètre de Malassez ; le liquide employé avait la composition suivante :

DANS LR RE SORT nr EE LE Ne 1,000 c.c Chlorureadé sodium Rte 7,5 gr.

Aide ACÉLIQUE COS ON ne 5. gr.

Ce mélange détruit presque complètement les globules rouges avec lesquels il est en contact. Il respecte au contraire les leucocytes; ainsi qu'il est facile de s'en assurer au moyen de numérations comparatives dans le sérum artificiel. La détermination de la somme de leucocytes contenus dans un millim. cube de sang devient ainsi très simple.

Pour l'analyse qualitative des globules nous avons toujours employé les procédés de fixation si bien étudiés par Ehrlich. Le sang étendu en couche mince sur une lamelle est rapidement desséché à l'air. On opère la fixation des éléments en déposant pendant une demi-heure la lamelle sur une platine chauffante à 110° ; les cellules présentent alors des contours d'une grande netteté et l’hémoglobine, ainsi fixée, ne se dissout plus dans les bains colorants.

On colore ensuite pendant cinq minutes dans la solution suivande :

Alcool à 60°..... SA EU do ON MER a TE 100 c.c. RL TM PR RES M Mr da es 0 gr. 50centig.

On lave à l’eau, puis on colore pendant 3 minutes dans une solution à 3 p. 100 de bleu de méthylène dans l’eau. On lave à l’eau, on laisse sécher à l'air, puis on monte dans le baume. De cette façon, les noyaux des leucocytes, des hématies nucléées, les granulations basophiles se colorent en bleu foncé: les granulations acidophiles et les hématies, en rose vif.