C. — Gastéropodes (escargots

Nous avons examiné, parmi les gastéropodes, les hélix, les buccins, \es planorbes, etc.

(1) Sauf les gastéropodes pulraonés.

Les escargots sont des animaux de choix, pour ces études, et cela pour deux raisons : la première c'est que l'on peut se les procurer à profusion et en tout temps ; la seconde c'est que, en même temps que le foie, on peut recueillir en abondance aussi la sécrétion hépatique, circonstance qui permet de comparer les pigments de l'organe aux pigments de la sécrétion.

A. — Pigments hépatiques de l'escargot.

107. Préparatioii des pigments hépatiques de l'escargot. — En ouvrant la coquille, on aperçoit le manteau dans la partie qui recouvre le sac pulmonaire. Celle-ci peut être claire ou foncée ; il y a en effet un pigment noir, plus ou moins abondant, qui se dépose le long des vaisseaux et sur le bord libre du sac pulmonaire. Vers la partie postérieure, on aperçoit par transparence le foie. Celuici est plus ou moins fortement coloré, tantôt en brun foncé, tantôt en jaune clair. Il est volumineux : il représente en poids le I/o du corps.

Une remarque intéressante, c'est que le foie est sombre chez les animaux où les vaisseaux du sac pulmonaire sont chargés de pigment : le foie est clair, lorsque ces vaisseaux sont peu colorés ; de telle sorte que la seule inspection du sac pulmonaire fournit un premier i-enseignement sur la couleur du foie (1).

On dissèque et on isole l'organe avec précaution ; on l'enlève. Les foies enlevés à un grand nombre d'escargots sont réunis, transformés en bouillie, puis portés dans l'exsiccateur au-dessus de l'acide sulfurique. On obtient en 24 heures une dessiccation ;\ peu près complète, qui permet de broyer les foies.

On a ainsi la poudre de foie (400 escargots nous ont donné 42 grammes de poudre sèche ; un corps d'escargot pesait en moyenne 3 gr. 500 et le foie Ogr. 7).

(1) Cette observation peut être rapproctiée de celle que nous avons faite plus haut.

De cette poudi-e, on fait 2 lots qui vont servir h l'extraction des pigments :

4 ° Le premier lot est traité par le chloroforme et l'alcool ; la liqueur filtrée est de couleur jaune : c'est le pigment chloroformique ou alcoolique.

2° Le deuxième lot est soumis à la digestion papaïnique, à l'étuve à 37°. On a un dépôt hrun et un liquide de digestion. Ce liquide filtré est de couleur rouge foncé, c'est le pigment aqueux.

1 08 . Caractères généraux «le ces piginenti^. — a) Analogies avec les vertébrés. — 6) Différences. — Cl) On

constate que les deux pigments., aqueux et chloroformique, présentent les plus grandes analogies avec ceux que nous avons trouvés chez les vertébrés.

Le pigment chloroformique ne contient pas de fer, il est insoluble dans l'eau, soluble dans l'alcool, à peu près insoluble dans l'éther.

Le pigment aqueux est ferrugineux (ferrine). 11 contient à peu près tout le fer que l'on rencontre dans le foie. On peut l'obtenir, à très peu près identique, sans recourir à la digestion papaïnique, en traitant simplement par l'eau très légèrement alcalisée, la poudre de foie desséché. Seulement, ce procédé d'extraction ne pourrait pas sufiire à épuiser le tissu hépatique. On voit parla, en tout cas, que ce pigment n'est pas un produit artificiel de la digestion papaïnique, foncièrement différent de la substance existant naturellement dans le foie.

Le noir animal peut enlever à ce liquide tout son pigment ; la liqueur filtrée passe incolore et ne renferme plus que des traces de fer.

Nous trouvons donc ici Yexacte répétition de ce que nous avons vu chez le chien et les vertébrés : deux pigments analogues avec des propriétés analogues.

b) Mais il y a une différence importante. Elle est relative

GASTÉUOPODES 171

aux .^pfrfrcs. Tandis que clic/ les vcrb'brés les deux pigmenls du (issuhc[)aliquc(scml)lablcscii cela aux pigmculs de la bile) donnaient le même spectre sans bandes proprement dites, éteint seulement aux deux extrémités; ici, cbez l'escargot, les spectres sont différents. Nous avons deux spectres à bandes.

— he pigment aqueux présente un spectre à deux bandes étroites, dans le vert, entre D et F, correspondant au repérage suivant : la première bande entre 59-62 et la deuxième bande entre 68-72. Elles appartiennent à l'hémochromogène.

Nous verrons, chose remarquable, que ces mêmes bandes existent dans la sécrétion hépatique de l'escargot.

— Quant au pigment chloroformique , il présente le spectre, très remarquable, déjà vu chez le poulpe et la plupart des lamellibranches, le spectre à quatre bandes : une bande très noiredans le rouge entre 29-34 ; une bande faible dans l'orangé entre 42-46 et deux autres bandes dans le vert; l'une entre 62-66 sombre, mais moins que la première : une autre enfin entre 75-82 qui est la troisième par ordre d'importance.

Krulvenberg (1) a fait des extraits alcooliques de foie de mollusque, et particulièrement d'escargot. L'examen spectroscopique lui a montré des bandes d'absorption qu'il considère comme inconstantes, sauf une seule, qui se confond sensiblement avec la première de nos bandes dans le rouge (29-34). — Nous sommes obligés de dire que nous avons toujours trouvé les trois autres bandes . Le spectre à quatre bandes nous parait donc caractéris-

(I) IvRiiKKNBEnG, Ueber das Verhœllniss der Leberpigmente zu den Blut, farbstofîen bel den Wirbellosen. Vergletchendephysiologische Sludien- Heidelherf;, 1881, Ilf, p. 181.

tique du pigment akoolo-chloro formïque du foie ; étant admis que, dans ce spectre, ce sont les bandes les plus nettes qui sont aussi les plus constantes.

109. IVatui'e des pig-meiits liéiiatiques de l'escargot: Iiémochroniogène, hépatoelilorophylle. — Si l'on se fonde sur les caractères spectroscopiques, on peut déjà soupçonner la nature de ces pigments hépatiques de l'escargot. Nous disons « soupçonner » ; mais il ne serait pas légitime « d'affirmer », sur une simple coïncidence spectroscopique. L'exemple du carmin ammoniacal, qui offre les mêmes bandes que roxyhémogiobine, est bien capable de mettre en garde contre les erreurs d'un tel raisonnement. Cependant Sorby, en 1876, et Mac Munn (1883), trouvant dans la bile de l'escargot les caractères des deux bandes que nous venons de rencontrer dans le pigment hépatique aqueux, ont conclu, sur ce seul caractère, à l'existence, dans cette bile, del'hématine réduite. Krukenberg qui avait vu ces deux bandes avait cru y reconnaître celles de l'hémoglobine.

1° Le pigment hépatique aqueux est de F hémochromogène. — Nous ne nous appuyons pas seulement sur le caractère de coïncidence des deux bandes dans le vert spectral, à savoir: 59-62 pour la première, et 68-72 pour la seconde, l'hémochromogène donnant 58-63 et 68-82. Nous invoquons une auti'e raison, c'est à savoir que, comme l'hémochromogène, \e pigment aqueux du foie est riche en fer ; sa richesse est celle même du foie. Nous avons mesuré celle-ci dans notre étude sur la fonction martiale; nous avons trouvé 0 milligr. 15 par gramme de foie sec. A peu près tout ce fer passe dans le pigment aqueux ; et celui-ci pourtant ne représente qu'une fraction

GASTEnOPODES

du poids du foie sec. On a donc un produit très riche en fer, et cette circonstance inconnue jusqu'ici est tout à fait significative, car riiémochromogène C'"H''V\z''FeO" est aussi une substance très riche en fer; elle contient près du dixième de son poids de fer. — En troisième lieu, les acides énergiques font disparaître les bandes de l'hémochromogène comme celles du pigment hépatique aqueux, elles agents de réduction, tels que le sulfhydrate d'ammoniaque, ne les changent pas ou les renforcent.

On sera frappé de trouver dans le foie un pigment qui est le noyau fondamental de l'hémoglobine, alors que le sang de l'animal ne contient point d'hémoglobine. Hémoglobine = hémochromogène + globine (protéide).

2° Le pigment chloivfonnïque ou alcoolo-chloroformïque du foie d'escargot ne contient que des traces de fer.

L'analyse du résidu chloroformique évaporé nous a donné moins de 2 centièmes de milligramme de fer pour 1 gramme de ce résidu.

Ce pigment est évidemment le même que celui de l'ostrea, mylilus. pecten, oclopus, qui nous offrent également le spectre à 4 bandes (la première caractéristique). Or, chez ceux-ci, en se fondant sur le caractère spectroscopique, Mac Munn a conclu que ce pigment était constitué par une variété de chlorop/i i/iic, qu il appelle Ventéro-chloroph]/Ue^ et qui offrirait un spectre à deux ou trois bandes dont la première serait tout à fait caractéristique.

Cette première bande siège dans le rouge sur la raie B, excepté chez rOc<o;n(s et le Buccinumundalum où elle serait reportée légèrement vers la raie G [enter ochlorophxj lie acide). On trouverait une autre bande avant D — moins constante, — une troisième entre D et E, une i° vers F. Ces bandes sont réduites à deux (huître) ; à trois (cardium, anodonte); il y en a 4 (buccin) — mais toujours la première est caractéristique.

174 GASTÉROPODËa

En traitant ces extraits alcooliques par quelques gouttes d'acide nitrique, Mac Munn a toujours obtenu le même spectre à l'Jnq bandes, que l'on obtient en traitant de la même façon la chlorophylle véritable. L'acide azotique les fait passer au jaune et ils donnent les cinq bandes correspondant aux longueurs d'onde suivantes; première bande dans le rouge, à cheval sur C, 661-643 ; deuxième bande en avant de D, dans le jaune, 608-592 ; troisième bande après D, dans le jaune, 576-561 ; quatrième bande avant E, dans le vert, 539-518; cinquième bande avant F, à la limite du vert et du bleu, 502-484. Ce sont précisément les mêmes nombres que pour les bandes de la chlorophylle végétale (Primula) traitée de même. Une telle coïncidence, absolument remarquable, conduit Max Munn à considérer le pigment alcoolique du foie, chez ces animaux, comme une chlorophylle; c'est une eniérochlorophylle.

Dans notre spectre à quatre bandes, les deux dernières appartiendraient, d'après Mac Munn,àrhématine réduite ; et en apparence il est vrai que leur position les rapproche de celles de cette substance. Mais c'est là une erreur, à notre sens ; car l'extrait chloroformique ne change pas si on le traite par un acide. Il ne contient pas d'hémochromogène.

. Dans le spectre à quatre bandes que nous avons observé à peu près constamment avec les solutions chloroformiques, il n'y a donc pas lieu de considérer les deux bandes du vert comme étrangères aux deux autres. Les quatre bandes appartiennent au même pigment.

Ce pigment, c'est une chlorophylle sans doute. Les quatre bandes coïncident précisément avec celles du spectre de la chlorophylle.

Nous nous en sommes assurés en traitant des feuilles de fusain (Evonymus) par le chloroforme. Nous avons retrouvé le même spectre que nous a donné presque toujours l'examen des extraits chloroformiques defoies de mollusques, à savoir : première bande caractéristique, sur la raie B (division 28), très noire, la largeur variant de

(lASTÉIlOl'ODIÎS 175

25 à 31 ; lu deuxième, faihlc, entro -42-40 ; la troisième, entre 02-66, dans le vert, entre D et E, vient après la première comme netteté ; ia(|natrième, dansie vert, après E, 75-82. L'addition d'acide ne ciiange rien.

Nous ne douions donc pas de l'identité de ce spectre avec celui de la chlorophylle ; c'est sur cette identité que nous nous fondons pour dire avec Mac Munn que le pigment alcoolique ou chloroformique du l'oie de l'escargot et de beaucoup de mollusques, contient une chlorophylle : nous l'appellerons Vhépato-chlorophylle.

HO. Observations sur l'existence de l'Iiépato-elilo-

rophyiie. — Le problème se présente maintenant, à nouveau, de l'origine de cette chlorophylle, soulevé déjà à propos de l'anodonle. Cette chlorophylle est-elle propre au foie, ou est-elle étrangère à l'organe et empruntée à l'alimentation ? Est-elle réellement animale — ou au contraire, est-elle végétale et recouvre-t-elle, dans l'extrait alcoolo-chloroformique, un choléchrome plus ou moins abondant?

La question se pose d'autant plus naturellement que chez l'escargot comme chez beaucoup de mollusques, les canaux biliaires sont de véritables diverticules de l'intestin ; c'est l'intestin qui se ramifie dans le foie. 11 semble donc que la chlorophylle alimentaire pourrait refluer dans cet organe.

En fait, il y a eu de notre part une première constatation favorable à cette manière de voir.

Il s'agit de l'observation signalée plus haut à propos des anodontes. D'après Mac Munn, ces mollusques devraient donner une liqueur hépatique alcoolique à spectre chlorophyllien caractéristique. Or, chez les individus que nous avons conservés ;\ la diète d'aliments verts, nous n'avons au contraire rencontré que le spectre continu.

176 GASTÉKOPODES.

Le problème de la nature animale ou végétale de la matière verte trouvée chez certains animaux, a été souvent discuté ; il a été résolu dans des sens différents. 11 s'offrait ici chez l'escargot, une fois de plus, et dans des conditions où sa solution semblait possible. Nous allons rendre compte de nos recherches à cet égard. Mais auparavant, il faut examiner la sécrétion hépatique.

B. — Sécrétion hépatique, bile de F escargot.

m .Manière tle l'obtenir. — Nous avons dit qu'il était

difficile, en général, d'obtenir en quantité suffisante la sécrétion hépatique chez les animaux de petite taille, chez les mollusques, chez les crustacés. Tout d'abord, cette séci'étion est très peu abondante; en second lieu, elle est souillée par les matières alimentaires.

L'escargot toutefois présente une particularité qui supprime cette difficulté d'observation, ou, tout au moins, l'atténue. 11 s'enferme dans sa coquille pour hiberner. Il sécrète un épiphragme qui clôt la coquille. Au-dessous de cet épiphragme on trouve, en général, un anneau noirâtre représentant les derniers excréments évacués. L'intestin désormais vide va se remplir de la sécrétion du foie (sécrétion ralentie sans doute pendant l'hibernation, comme les autres phénomènes vitaux), qui continuera à s'y accumuler au point de le distendre à la longue.

En ouvrant l'intestin de l'escargot en hibernation on recueillera donc cette sécrétion hépatique. C'est une masse plus oumoins consistante d'une belle couleur rouge-rubis ; cette liqueur a été vue par beaucoup d'observateurs. Krukenberg l'a nommée hélicorubine{i). On peut en recueillir

(d) Krukenberg, Ueber das Helicorubin und die Leberpigmente von Hélix pomatia. Verfftoc/îencîe physiologische Studien, 11= série, 1882, p. 63.

quelquefois près d'un demi-centimètre cube chez un seul animal.

Si l'on suit la matière en remontant jusqu'au Ccecum intestinal où viennent déboucher les canaux hépatiques, on constate qu'elle remplit ces canaux et qu'elle constitue bien, par conséquent, la sécrétion du foie. Lorsque dans la dissection, l'on déchire accidentellement le tortillon, on détruit en même temps des canaux hépatiques ; on constate alors l'issue du liquide.

Sans soumettre l'animal à l'hibernation, on peut encore obtenir la bile, sans mélange d'autres matières colorantes, par l'un des deux moyens suivants: l°\e Jeûne, qui ralentit la sécrétion sansla supiprimev ,2° ï alimentation avec des substances incolores. C'est ce dernier procédé que nous avons employé. Nous avons mis des escargots pendant des mois, au régime des rondelles de navets, choisies de manière à éviter toute matière colorante, verte ou autre. Dans ces conditions les fèces sont peu colorées, et elles le sont seulement par la bile; l'intestin est rempli d'un liquide rougeàtre, qui est constitué en majeure partie par cette bile même, et que l'on recueille en sacrifiant l'animal.

Nous avons nourri également les escargots avec du papier-tîltre, imprégné d'eau et de liquides nutritifs incolores.

H2. Proppiétés de la sécpétioii Siépatiqiie. Spectre à deux bandes. Fer. — 1" La liqueur biliaire rouge-rubis ainsi obtenue présente une réaction légèrement acide, due au suc intestinal qui s'y mêle et qui a cette réaction.

2° La matière colorante est soluble dans l'eau ; insoluble dans le chloroforme, l'alcool, la benzine, etc.

3" Elle offre des caractères spectroscopiques remarqua-

bles, et qui ont été déjà signalés par Sorby (1876) et Mac Munn (1883) (1). C'est un sjnctre à deux bandes^ comme celui de l'hémoglobine à laquelle on avait assimilé d'abord cette matière colorante (Krukeuberg). Mais l'action des réducteurs, d'une part, qui ne font que renforcer ce spectre, et des acides de l'autre qui le font disparaître, a bien montré qu'il s'agissait ici d'un spectre identique à celui de l'hématine réduite ou l'hémochromogène.

Cette liqueur a en commun avec l'hémochromogène ce caractère remarquable, d'être riche enfer; caractère qui n'avait pas été mis enlumière par les auteurs précédentset qu'a révélé notre analyse.

Fer. — Nous avons analysé cette sécrétion hépatique au point de vue du fer.

Exiiépîence. — 40 escargots nous ont fourni une masse d'environ 10 grammes de sécrétion hépatique. Ces 10 grammes donnent à l'état sec, 0 gr. 4,00 de résidu, rouge sombre, soluble dans l'eau, insoluble dans l'alcool, l'étlier, le ctiloroforme. L'analyse colori métrique fournit 0 mg. 18 de fer ; soit pour 1 gramme de résidu sec 0 mg. 45. C'est plus que la bile vésiculaire de chien pour le même poids sec et au moins autant que la bile des canaux hépatiques du même animal ; c'est trois fois plus que le foie d'escargot pour le même poids sec.

Cette analyse, toutefois, ne nous apprend rien sur les tissus frais, ni sur la sécrétion normale dont nous ne connaissons point la quantité d'eau, laquelle peut être de 5 à 20 fois plus grande que celle du tissu hépatique.

Ce que nous devons retenir de cette analyse, c'est quels fer existe en quantité très appréciable dans la sécrétion

. (1) SoRBY, On the évolution of Hemoglobin. Quar . Journ. Micr. Se, t. XVI, p. 77. — C. A. Mac Munn, Observations on the Colouring matters of the socalled Bile of Invertebrates, etc. Proceedings of the Royal Society, t. XXXV, p 377.

GASTIÎIROPODES 179

du foie de l'escargot et que les proportions n'en sont pas moindres que dans la bile des vertébrés.

De cette nouvelle détermination, rapprochée de toutes les précédentes, ressort avec évidence le caractère de la lille comme voie universelle d' élimination du fer, chez tous les animaux.

113. Identité lia pigment de la sécrétion hépatique avec le pigment aqueux hépatique. — Si 1 On compare

le pigment aqueux du foie avec le pigment de la sécrétion hépatique, on est amené à conclure à l'identité de ces deux pigments par deux raisons, tirées l'une de la composition, l'autre de l'analyse spectroscopique.

lo L'un et l'autre sont riches en fer ; ils contiennent la même quantité de fer.

Expérience. — On prend la poudre sèclie de foie d'escargot. On épuise cette poudre par de l'eau distillée alcalisée très légèrement par quelques gouttes de la solution de carbonate de soude à 2 0/0. Le pigment aqueux entre en solution. On évapore cette solu ion et on analyse par rapport au fer. 10 grammes de liquide ont fourni 0 gr. 250 de résidu sec, contenant comme fer 0 mgr. 12; soit pour d gramme sec == 0 mgr. 48.

Tout à l'heure, la sécrétion hépatique nous avait donné pour 1 gramme sec ^0 mgr. 45. Ce chiffre coïncide suffisamment avec le précédent, 0 mgr. 48 de fer pour 1 gramme sec de pigment aqueux.

2° Les spectres ?,o\A sensiblement identiques.

Le pigment a(|ueux ferrugineux donne le spectre à deux bandes : 59-62 ; 68-72, suffisamment superposables à celles du pigment hépatique 55-60, 68-72 ; et ces spectres se comportent de môme. Ils sont inaltérés par le sulfhydrate d'ammoniaque, etc. ; ils sont détruits par les acides forts.

On notera cette conséquence remarquable des observations précédentes :

La macération légèrement alcaline du liquide est très analogue à la sécrétion de l'organe. Ce n'est pas le cas, chez les vertébrés ; la macération du foie y est très distincte de la bile.

114. ExistencR des pigments hépatiques, aqaeux et cliloroformîque, dans la coquille. — On prend l'escargot gris (Hélix aspersa) et l'on cherche à se procurer les matières colorantes de la coquille.

Expérience. — On isole les coquilles ; on pulvérise. On traite par le chloroforme ou l'alcool. On obtient ainsi une liqueur colorée en rouge-jaune qui présente sensiblement les mêmes caractères que le pigment cliloroformique du foie ; en particulier, le même spectre à 4 bandes que ce pigment alcoolique.

La poudre épuisée par l'alcool et le chloroforme est traitée par un acide étendu pour décalcification. Après neutralisation, une partie a est soumise à la digestion papaïnique. Elle donne une liqueur colorée en jaune-brun. C'est précisément le pigment aqueux. On s'assure de celte identité par l'identité des spectres et de la teneur en fer.

Dans une seconde partie ^, on détermine la quantité de fer directement par la méthode colorimétrique. On a soin de séparer par filtration le dépôt calcique, avant de porter dans le colorimètre.

La coquille contient donc les mêmes matières colorantes que nous avons trouvées dans le tissu hépatique. Déjà, dans le chapitre précédent, nous avions mis en lumière ce double rapport entre l'organe hépatique et l'appareil tégumenlaire, en montrant que le foie contient des sels alcalino-terreux et du fer, comme la coquille : nous voyons ici que la coquille contient (entre autres) les mêmes pigments que le foie.

CASTEltOl'ODES