Fecrz, loc. cit

2, L. Grimgerr, « De l'unification des méthodes de cullure en bactériologie », Archives de Parasitologie, 1. 4, n0 2, p.191.1898.

Berthelot 2

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isolé de viande en putréfaction ; ils trouvèrent qu'il produisait de l'indol même dans les cultures sur bouillie de viande.

La constance du caractère biochimique qui nous occupe semblait assez bien établie lorsqu’en 1906, F. A. Steensma (1) remarqua que le distillat des cultures de certaines races de Proteus ne contenait pas d'indol, alors que les cultures mêmes prenaient une coloration rose par addition de nitrite de potassium et d'acide sulfurique.

On ne prêta guère attention à ces faits pourtant intéressants et cinq ans après Herter et Ten Broeck n'en tinrent aucun compte quand, après avoir examiné seulement deux races, ils publièrent que le Proteus cultivé dans une solution de peptone de Witte (1 0/0) et d'extrait de viande Liebig (0,4 0/0) produit un peu d’indol etune quantité notable d'acide indolacétique.

Dans un travail paru à peu près à la même époque que celui d'Herter, Cantü considère ce microbe comme un producteur d’indol et, bien qu'il en ait étudié plus de 180 échantillons, il ne dit pas en avoir trouvé qui n'ait pas ce caractère.

En 1912, Louis Gauthier (2), se basant sur l'examen de deux races, publia que les cultures de Proteus dans une solution de peptone pancréatique contiennent toujours de l'indol au bout de douze heures.

Enfin, quelques mois plus tard, J. J. van Loghem et J. C. W. van Loghem-Pouw (3), après avoir étudié 30 échantillons, confirmèrent les résultats obtenus par Steensma et crurent bien faire de considérer comme représentants d’une espèce à part, Bacillus proeus anindologenes, les Proteus vulgaris ne donnant pas d'indol.

En présence d’une telle confusion il m'a semblé utile de déterminer, d'une manière aussi précise que possible, quelle est la valeur réeïle de la fonction indologène en tant que caractère spéciique du Proteus vulgaris. Pour cela, j'ai fait porter mes recherches sur les 61 Profeus dont je disposais.

Avant d'exposer le détail de mes expériences, je crois bon d'in-

1. Sreensma, « Ueber den Nachweis von Indol .… in Bakterienkulturen » Centralbl. f. Bakteriologie, Original, mai 1906, t. XLI, p. 215.

2. Louis GaurniER, Æecherches sur l'indol en microbiologie, thèse de pharmacie, Lyon, 1912.

3. J. 4. Vax Loëneu et J, CG. W. Vax Locnem-Rouw, « Beitrag zur Differenzierung der Proteus-Gruppe », Centralbl. f. Bakteriologie, Original, t. LXVI, 24 août 19142.

sister quelque peu sur les procédés que j'ai employés pour déceler la présence de l’indol dans les cultures microbiennes.

Jusqu'à ces dernières années, pour caractériser cette substance, les bactériologistes utilisaient généralement une réaction basée sur la formation de nitroso-insol., Cette réaction se pratique le plus souvent suivant la technique adoptée par Kitasato (1) lors de ses premières recherches sur les microbes indologènes, c'est-à-dire qu à 10 ec. d’une culture en bouillon ou en eau peptonée on ajoute 1 ce. d'une solution aqueuse de nitrite de sodium ou de potassium à 0,2 pour 1.000, puis quelques gouttes d'acide chlorhydrique à 22° ou d'acide sulfurique à 66°. Une coloration rouge ou rose indique la présence d'indol : la sensibilité de la réaction peut être accrue en rassemblant dans l'alcool amylique le nitroso-indol formé.

Bien que ce procédé de recherche soit encore employé très fréquemment, depuis 1901, on tend de plus en plus à lui substituer la réaction d'Ehrlich au p. diméthylaminobenzaldéhyde qui est d'une extrême sensibilité (2). Dans les laboratoires de bactériologie on l’effectue généralement en ajoutant à 10 cc. d'une culture, en bouillon ou eau peptonée, quelques centimètres cubes d’une solution alcoolique de diméthylaminobenzaldéhyde à 2 0/0, puis avec précaution quelques gouttes d'acide chlorhydrique ou d'acide sulfurique concentré. Certains expérimentateurs croient utile d'ajouter un persulfate ou un nitrite alcalin ou de faire la réaction à chaud.

Bien d’autres réactions permettent, comme on le sait, de caractériser l'indol, mais je ne m'en occuperai point ici car leur emploi est rarement utile dans le cas qui nous occupe. Je préfère m'en tenir aux deux que je viens de citer et montrer combien la valeur des résultats qu’elles fournissent dépend des conditions dans lesquelles elles sont effectuées.

Pendant longtemps on s'est contenté d'ajouter directement aux cultures du nitrite de sodium et de l'acide, puis, pour déceler les très petites quantités d’indol, on eut l'idée de caractériser ce composé non plus dans les cultures mêmes, mais dans leur distillat.

1. Krrasaro, « Die negative Indol-Reaktion der Typhusbazillen im Gegensatz zu anderen ähnlichen Bazillenarten », Zeëtschr. f. Hygiene, t. VII, 1889, p, 545.

2, Enrucu, « Ueber die Dimethylaminobenzaldehyd-Reaklion », Deutsch. Med, Wochenschrift, 1901, n° 15.

Cette manière de faire avait en même temps l'avantage de supprimer une importante cause d'erreur surtout avec les réactifs modernes ; avec elle on évitait de pratiquer la recherche de l'indol en présence de certaines substances qui existent dans les cultures et qui peuvent donner lieu à des colorations gènantes. De nombreux auteurs, et notamment Steensma, montrèrent l'intérêt qu'il y avait de préférer à toute autre technique la distillation des cultures : pourtant celle-ci ne méritait guère, ainsi que nous allons le voir, la confiance qu'ils lui accordaient.

Porcher et Panisset (1) ont établi, en etfet, que dans les cultures microbiennes, même d'espèces ne donnant pas d'indol, peuvent se former certaines substances, qui ont comme caractère commun de se décomposer facilement en donnant de l'indol ; or, l'une d'elles, l'acide indolcarbonique, se dissocie même lorsqu'on porte simplement sa solution aqueuse à l'ébullition. La présence de tels composés indologènes rend donc illusoire la précaution que l’on prenait de distiller les cultures et pour extraire l'indol qui peut se trouver dans celles-ci il apparaît indispensable d'avoir recours à d'autres procédés qu'à l'entrainement par la vapeur d'eau. Celui qui convient le mieux est certainement l'épuisement des liquides à analyser par l'éther convenablement purifié.

Porcher et Panisset ont donc eu le mérite de révéler une grave cause d'erreur dans l'étude de la fonction indologène des microbes et de rappeler en même temps aux bactériologistes qu'on ne doit jamais caractériser directement un corps dans une culture microbienne. Malheureusement leurs conseils n'ont pas été suivis comme ils le méritaient, à tel point que les résultats obtenus par Steensma, en 1906, sont sûrement plus près de la vérité que ceux publiés dans nombre de travaux récents.

En eftet, certains auteurs, ennemis de ce qu'ils appellent dédaieneusement des complications, considèrent comme très suffisant de rechercher l'indol en pratiquant la réaction d'Ehrlich directement dans les cultures. Pas plus qu'ils ne s'inquiètent des recommandations de Porcher et de Gauthier, ils ne tiennent aucun

1. CH. PorcHer, « Des corps indologènes dans l'urine », €. À. de l'Acad. d. Sciences, 3 mai 1909.

Cu. Porcuer et L. Paxisser, « Recherche de l'indol dans les bouillons microbiens », C. R. de la Soc. de Biologie, 24 août 1909. « Des composés indologènes dans les cultures liquides », C. R. de l'Acad. des Sciences, 17 mai 1909.

compte des {travaux des nombreux chimistes (1) qui ont montré que le diméthylaminobenzaldéhyde donne avec diverses substances, existant normalement dans la plupart des cultures microbiennes et mème dans certains milieux stériles, des colorations très difficiles à distinguer de celles que produisent l'indol et le scatol.

I n'est d'ailleurs pas besoin de connaitre les travaux que je viens de signaler, pour se rendre compte des précautions qu'impose l'usage du diméthylaminobenzaldéhyde : il suffit de se conduire en expérimentateur consciencieux et de ne pas adopter un réactif aussi sensible sans avoir vu ce qu'il donne avec des milieux témoins. Si les auteurs dont je parle plus haut avaient pris ce soin ils auraient vu que certains milieux usuels et les solutions de certaines peptones. stériles où ensemencés avec des microbes non producteurs d’indol, donnent, lorsqu'on les traite directement avec Le réactif d'Ebrlich, des colorations très variées allant du bleu au rouge groseille en passant par toutes les teintes du violet. Je veux croire qu'en présence de constatations de cette sorte ils n'auraient pas adopté une telle manière de procéder et auraient cherché un moyen d'éviter des causes d'erreur aussi évidentes. I faut croire toutefois que la nécessité des témoins et des expériences à blanc, n'est pas encore admise par tout le monde, car j'ai eu maintes fois l'occasion de voir employer Le procédé simpliste dont, après tant d’autres, je viens de montrer les inconvénients (1).

Quoi qu'il en soit, l'exemple est assez curieux des mauvais résultats que peut donner, lorsqu'elle est utilisée sans précaution, une

. 4. Sreexsua, CUeber Farbenreaktionen der Eiweisskôrper.. mil aromatischen Aldebhyden und Nitriten », Zeitschr. [ Physiol. Chemie, 1. XLVIT, p. 25.

STEENSMA, « Die Farbenreaktionen in der Biochemie », Biochem. Zeilschr., t. VIII, p. 205, 1908.

FLeG, « Réactions colorées du tryptophane, de Findol, du pyrrol,éte. . avec les aldéhydes aromatiques », C. 1. de la Soc. de Biologie, juillet 1908.

CL. Gaurier, « Réactions de la phloroglucine et de l'orcéine avec le p. diméthylaminobenzaldéhyde..…. » C.R. de la Soc. de Biologie, 23 mai 1908.

Ruope. « Die Farbenreaktionen der Eiweisskôrper mitp. dimethylaminobenzaldehyd..… » Zeitschr. f. Physiol. Chemie. L XLIV, 1905, p. 161:

2, On trouvera dans un travail de H. Seidelin et Fr. Lewis (Somes notes on indole-reaction and allied phenomence, Journal of Hygiene, décembre 1911, p. 504) un exemple des pertes de temps, des incertitudes et des difficultés d'interprélation auxquelles expose la méconnaissance des faits révélés par Neubauer, Cole, Rohde, Porcher, Steensma et Gauthier.