CHAPITRE III

AUTOLYSATS ET ENDOTOXINE. — LÉSIONS PRODUITES PAR LES POISONS © DÜ PROTEUS

A. — Toxicité des autolysats.

J'ai d'abord essayé un autolysat préparé en abandonnant pendant un mois à la température du laboratoire 2 grammes de bacilles humides délayés dans 20 ce. d’eau physiologique. Avant de l'injecter aux animaux, pour me placer dans les mêmes conditions que dans tous les essais précédents, je l’ai traité par l'éther comme mes cultures totales; je l'ai alors-éprouvé chez le cobaye et le

lapin :

Cobaye (Poids moyen : 500 gr.).

Vote intra-péritonéale et voie intra-veineuse. — Dose mortelle :

1/4 de cc. correspondant à 25 milligrammes de bacilles humides ; mort en moins de 18 heures.

Lapin.

Voie intra-péritonéale. — 300 milligranmes de bacilles humides, soit 3 cc. d’autolysat, étaient nécessaires pour tuer en moins de 18 heures un lapin de 2 kilogrammes.

Voie intra-veineuse. — VW suffisait de 100 milligranimes de bacilles, soit 1 cc. d'autolysat pour déterminer la mort d’un lapin de 2.480 grammes en huit heures.

Après avoir ainsi déterminé la toxicité de l'autolysat total, j'ai centrifugé ce qui m'en restait et j'ai éprouvé chez le cobaye et Le lapin le liquide clair obtenu :

Cobaye (Poids moyen : 500 gr.).

Voie intra-péritonéale. — Les doses correspondant à 25 et 50 milligrammes de bacilles frais étaient sans effet apparent.

Voie intra-veineuse. — Dose mortelle : 5 gouttes de liquide cor-

respondant environ à 25 milligrammes de bacilles humides ; mort de l'animal en 15 heures.

Lapin. — Par voie intra-veineuse une dose de liquide correspondant à 100 milligrammes a suffi pour tuer en 18 heures un animal de 2.515 grammes.

La toxicité de l'autolysat centrifugé était donc, pour la voie intra-veineuse, à peu près identique à celle de l’autolysat total.

J'ai fait alors une seconde expérience à l’aide d’un autolysat obtenu dans les conditions suivantes : Des bacilles humides ont été délayés dans trois fois leur poids d'eau physiologique ; après addition de la dose habituelle d’éther le mélange, placé dans un vase hermétiquement clos, a été abandonné à lui-même pendant six mois, à la température du laboratoire et à l'abri de la lumière. Au bout de ce temps l'éther a été chassé comme pour les cultures totales.

Cet autolysat dont un gramme représentait 0 gr. 25 de bacilles humides à été essayé après dilution dans l'eau physiologique de manière à l'amener à une concentration voisine de celle du précédent essai.

Cobaye (Poids moyen : 500 gr.).

Voie intra-péritonéale. — La dose mortelle correspondait à 125 mulligrammes de bacilles humides ; la mort survenait en moins de 18 heures.

Voie intra-veineuse. — La dose mortelle équivalait à 60 mulligrammes de bacilles ;: mort en 19 heures. .

Cet autolysat vieux de six mois et obtenu en présence d’éther était donc notablement moins toxique que le précédent, qui d’ailleurs était déjà beaucoup moins actif pour une même dose de bacilles, qu'une simple émulsion de corps microbiens modifiés par l'alcool, l’acétone où un carbonate alcalin. Du reste l'expérience n° 2 des essais faits avec Les corps bactériens montrait déjà un affaiblissement de la toxicité pour une simple autolyse de 48 heures sans addition d'eau.

B. — Endotoxine du « Proteus Tx ».

J'ai appliqué au Proteus Tr le procédé que Besredka (1) à

1. Besrepka, « Des endoloxines solubles », Ann. de l'Inst. Pasteur, 1. XXV, avril 1906, p. 304.

Li Pr RE

imaginé et qu'il a utilisé avec succès pour les bacilles de la peste, de la fièvre typhoïde et de la dysenterie.

J'ai délayé 5 grammes de bacilles humides (Gélose Nicolle) dans 20 ce. d'eau physiologique. J'ai chauffé cette dilution à 60° pendant une heure, après quoi je l'ai versée en couche mince dans des boîtes de Pétri et desséchée dans le vide sur l'acide sulfurique. J'ai recueilli les bacilles secs et j'en ai trituré 1 gramme au mortier d'agate, dans les conditions indiquées par l'auteur, avec 0,45 de NaCl et 2 cc. d’eau ; avec de l’eau distillée j'ai complété au volume de 50 cc. et j'ai laissé l'émulsion reposer vingtquatre heures. Je l'ai alors chauffée une heure et demie à 56°, puis centrifugée.

J'ai essayé sur des cobayes le liquide clair résultant de cette opération et j'ai pu leur en injecter jusqu'à 8 cc. dans le péritoine sans provoquer la mort; cependant avec les doses supérieures à 6 ce. les animaux étaient malades. Durant quelques heures ils restaient somnolents dans un coin de leur cage, se mettaient en boule et avaient Le poil hérissé ; mais le lendemain ils étaient complètement rétablis.

Comme ces premiers résultats étaient médiocres et que je n'avais plus de solution toxique, avant d'en préparer d’autre j'ai voulu rechercher s'il n'était pas possible d'obtenir l’endotoxine par une autre méthode. Pour cela j'ai délayé peu à peu, dans un mortier de Joulie, des corps microbiens humides (gélose Nicolle) dans trois fois leur poids de glycérine pure à 30°; j'ai laissé la glycérine agir pendant une heure à la température du laboratoire puis j'ai additionné le mélange de dix volumes d'alcool absolu. J'ai laissé se déposer le précipité de corps microbiens, puis j'ai siphonné la liqueur alcoolique surnageante. J'ai repris les microbes par le même volume d'alcool et répété encore deux fois cette opération, j'ai fait dans les mêmes conditions un lavage à l’alcool-éther et j'ai terminé par un lavage à l'éther à 66°.

J'ai essoré les corps bacillaires sur un entonnoir de Büchner, puis je les ai laissés24 heures à 37° et 24 heures dans le vide, sur l'acide sulfurique, à la température ordinaire. J'ai déterminé leur toxicité massive qui était exprimée par les chiffres suivants :

Cobave (Poids moyen : 500 grammes).

Voie intra-péritonéale. — Dose mortelle : 150 milligrammes de bacilles humides.

Voie intra-veineuse, — Dose mortelle : 50 milligrammes.

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Dans les deux cas mort en plus de 6 heures et moins de 18. Pour extraire l'endotoxine j'ai mis en suspension | gramme de microbes secs ainsi plasmolysés par la glycérine dans 50 ce. d’eau physiologique et j'ai laissé en contact, à la température du laboratoire, pendant 24 heures; au bout de ce temps j'ai centrifugé longuement à l’aide d'une centrifugeuse de Jouan pour séparer complètement les corps bacillaires. J'ai obtenu ainsi un liquide parfaitement clair légèrement jaunâtre que j'ai éprouvé sur de petits cobayes d'un poids moyen de 300 grammes.

Par voie intra-péritonéale la dose mortelle était de #cc., volume de solution contenant l’endotoxine de 80 milligrammes de microbes secs, c'est-à-dire 409 milligrammes de bacilles humides.

Par voie intra-veineuse la dose mortelle était de 2 ce. contenant l’endotoxine de 200 milligrammes de bacilles humides.

Les animaux injectés dans le péritoine présentaient d'abord au bout de 5 à 6 heures les mêmes symptômes qu'avec la solution obtenue par la méthode de Besredka, mais vers la huitième heure ils tombaient sur le flanc, Le train postérieur paralysé et mouraient vers la vingtième heure; les cobayes injectés dans les veines présentaient des symptômes analogues, mais la mort survenait beaucoup plus vite, au bout de neuf heures.

J'ai arrêté ]à mes essais, mais ils sont suffisants pour montrer que l’on peut, par le procédé que je viens d'indiquer (1), extraire une endotoxine des corps microbiens jeunes du Proteus vulgaris : cette substance ne semble d’ailleurs être qu'un facteur de toxicité peu important pour la race que j'ai examinée.