TROISIÈME PARTIE

Recherches sur l’action pathogène d’une association microbienne : « Proteus vulgaris »

et « Bacillus aminophilus intestinalis ».

Si l’on veut que les recherches sur la flore intestinale, comme facteur d'infection ou d'autointoxication, aient quelques chances d'aboutir à un résultat utile, il est indispensable d’avoir sans cesse présente à l'esprit l'extrême diversité des espèces qui la constituent. On évite ainsi de s'attarder trop longtemps à l’étude imdividuelle de celles-ci et l'on est amené au contraire à examiner avec soin les nombreuses symbioses qu'elles permettent de réaliser.

De plus, dans l'étude même de ces associations microbiennes au point de vue de leur action pathogène il ne faut pas seulement considérer les propriétés toxiques des cultures symbiotiques obtenues én vitro et il est nécessaire de déterminer quels sont les effets produits chez l'animal par l’ensemencement massif du tube digestif avec les microbes considérés. Mieux encore ces effets doivent être étudiés sur des animaux soumis à une alimentation convenablement choisie, d'après Les propriétés biochimiques particulières aux espèces qui composent l'association bactérienne utilisée.

Pour montrer la nécessité d'une telle méthode dans l'étude de la flore intestinale, je pourrais m'appuyer sur des considérations théoriques se prêtant à de longs développements, mais comme à cet égard rien ne vaut les faits je préfère m'en tenir au simple exposé de ce que j'ai eu l'occasion d'observer en étudiant la symbiose du Proteus vulgaris et du Bacillus aminophilus intestinalis.

Tout d'abord je dois rappeler, qu'en collaboration avec M. D. M. Bertrand (1), nous avons isolé cette dernière bactérie, des matières fécales acides d'un sujet atteint de troubles intestinaux persistants. Pour cet isolement nous avions employé la méthode générale que j'ai préconisée (2) pour séparer facilement certaines espèces de la flore intestinale, que j'ai qualifiés d’acidaminolytiques, parce qu'elles présentent une affinité spéciale à l'égard des acides aminés

En Het ce microbe nous avons constaté qu'il appartient au même gro oupe que le Pneumobacille et le B. lactis aerogenes : il est très voisin de ce dernier, possède à peu près les mêmes propriétés saccharolytiques et acidogènes, mais il s'en distingue par quelques points de sa morphologie, l'agglutination et surtout l’énergie avec laquelle il attaque les aminoïques, aux dépens desquels il donne, suivant les aliments qui sont à sa disposition, des produits très variés parmi lesquels se trouvent notamment des amines toxiques.

Le B. aminophilus intestinalis est en somme un microbe voisin du B. lactis aerogenes capable de produire dans l'intestin soit d’assez grandes quantités d'acides où domine l'acide lactique, soit une proportion notable de ptomaïnes dont certaines, comme l'imidazoléthylamine, présentent une très grande toxicité. Cette production d'acide lactique et d'amines nocives peut d'ailleurs être simultanée ; dès Le début de nos recherches nous avons vu que le P. aminophilus peut donner de l’imidazoléthylamine dans un milieu à base d'histidine non sucré et contenant une faible proportion d'acide lactique (3). mais depuis que nous avons publié ce fait nous avons isolé une race du même microbe qui peut, dans une

4. Azsert BertueLor et D. M. Berrrann, « Recherches sur la flore intestinale. Isolement d'un microbe capable de produire de l'imidazoléthylamine aux dépens de l’histidine », C. R. de l'Acad. des Sciences, 10 juin 1942, t. CLIV, p. 1643.

Aserr BerrHeLor et D. M. BerrranD, « Sur quelques propriétés biochimiques du Bacillus aminophilus tntestinalis », C. R. de l'Acad. d. Sciences, 24 juin 19421 CLIV;p. 1826"

ALBERT BEertTHEeLoT, « Recherches sur la flore intestinale. Isolement des microbes qui allaquent spécialement les produits ultimes de la digestion des proltéiques », C. À. de l’Acad. d. Sciences, 24 juillet 1911, &. CLIIT, p. 306.

3. ALBERT BerrHeLor el D. M. BerrranD, « Sur la production possible de ptomaïnes en milieux acides », C. R. de l'Acad. d. Sciences, 31 mars 1913, LACEVIND AUOT.

solution nutritive renfermant cette fois du glucose et de l’histidine, produire en même temps de l'acide lactique et de l’imidazoléthylamine.

C'est en considérant les propriétés biochimiques du Proteus et du B. aminophilus que l'idée m'est venue d'étudier leur symbiose. Je me suis tout d'abord demandé si, en ensemençant du lait avec le Profeus puis en faisant intervenir le Bacillus aminophilus dès le début de la protéolyse, il n'y aurait pas formation de bases toxiques par décarboxylation des acides aminés mis en hberté par l'hydrolyse microbienne de la caséine. Je me rendais bien compte qu'il y avait peu de chances pour qu'il en soit ainsi, étant donné le pouvoir désaminant du premier et l’activité acidogène du second de ces microbes, mais malgré cela j'ai tenté quelques expériences.

J'ai ensemencé deux ballons de lait stérilisé avec un Proteus isolé d’une diarrhée infantile, puis après 48 heures de séjour à 37° alors que l'attaque du caseum était à peine commencée, j'ai introduit dans l’un des ballons une forte dose de jeunes corps microbiens de B. aminaphilus. J'ai replacé les deux ballons à l’étuve et au bout de huit jours j'ai centrifugé les deux cultures, filtré sur bougie Chamberland les parties liquides et comparé leur toxicité pour le cobaye. J’ai constaté que le filtrat obtenu avec la culture de Proteus seul était notablement plus toxique que celui préparé avec la culture mixte.

En présence de ce résultat je fis alors l'expérience suivante : j'ensemençai avec du Proteus, du B. aminophulus où un mélange des deux microbes, des ballons renfermant les uns une solution de peptone pancréatique de caséine, les autres la même solution additionnée de 4 0/9 de lactose ou de glucose. Cette fois encore les cultures furent filtrées au bout de huit jours et les filtrats éprouvés sur des cobayes. Dans ces conditions j'ai observé que les cultures de B. aminophilus, que le milieu soit sucré ou non, ne présentaient qu'une toxicité pratiquement insignifiante ; les cultures de Proteus avaient leur toxicité habituelle dans l’eau peptonée simple ou lactosée et une toxicité négligeable avec le milieu glucosé ; enfin les cultures mixtes obtenues avec l’eau peptonée simple présentaient exactement la même toxicité que celles du Proteus seul, tandis que les cultures réalisées en présence de lactose ou de glucose étaient pratiquement sans influence nocive sur les cobayes. Enfin, J'ai constaté que sur les milieux solides non sucrés les deux microbes se

TEE développent à côté l’un de l’autre sans qu'il se manifeste une action empêchante ou favorisante quelconque.

Si je m'en étais tenu aux résultats de ces expériences 2 vitro j'aurais dû conclure que dans l'intestin, le B. aminophilus toutes Les fois qu'il a des sucres à sa disposition, doit se comporter comme un véritable ferment lactique et jouer par conséquent un rôle bienfaisant en gênant les microbes protéolytiques, mais en expérimentant x vivo, j'ai pu rapidement me convaincre combien il aurait été imprudent d'adopter de telles conclusions.

En effet, si l’on nourrit de gros rats blancs exclusivement avec du lait stérilisé, partiellement coagulé par la présure, et qu'avec cet unique aliment on administre, chaque jour, à certains d’entre eux, une quantité de Proteus ou de B. aminophilus correspondant à une demi-culture sur gélose, à d’autres la quantité équivalente d’un mélange à parties égales des deux microbes, on peut faire une série de constatations dont voici les principales (1) :

1° Le Proteus seul, même à ces fortes doses, est sans influence apparente sur les rats, ce qui n'est guère étonnant d’ailleurs, puisque ce microbe est l'hôte habituel de leur intestin.

2 La plupart des animaux qui ne reçoivent que du B. aminophilus n'en souffrent pas et se maintiennent à peu près à leur poids primitif ; cependant quelques-uns d’entre eux et ce sont toujours les plus jeunes, succombent après un délai de 8 à 10 jours.

3° Tous les rats qui absorbent à la fois les deux microbes préseutent au bout de 6 à 8 jours une diarrhée très accentuée ; les matières qu'ils expulsent sont riches en mucus filant et très acides. Ces animaux maigrissent rapidement et presque tous finissent par succomber du dixième au vingtième jour.

4° Si l’on donne à des rats du lait auquel on ajoute une assez forte prop rtion de caséine sèche où mieux encore si l’on augmente la dose journalière du mélange de microbes, on observe que les animaux meurent très vite, en 4 à 8 jours ; la phase de diarrhée muqueuse et acide est alors extrêmement réduite et la mort est déterminée par une entérite aiguë à forme hémorragique.

Voici le détail de mes expériences :

1. Azserr BEeRTHELOT, & Recherches sur la flore intestinale. Sur l'action pathogene dune associalion microbienne : Proteus vulgaris et Bacillus aminophilus intestinalis », CR, de PAcad d. Sciences, t. GLVT, 19 mai 1943. p. 1367.

I. Trois lots de dix rats blanes, d'un poids variant entre 125 et 180 grammes :

Lot À alimenté avec 500 ec. de lait stérilisé à 1209, partiellement coagulé par addition de quelques gouttes d’une solution de présure filtrée sur bougie et séjour de 18 heures à 370. À ce lait on mêlait les corps microbiens de Proteus recueillis sur cinq tubes de gélose ordinaire (tubes de 170 mm. X 17 mm., cultures de 24 heures à 37°). Le lait ainsi contaminé était administré en deux fois aux rats qui l'absorbaient entièrement dans les

24 heures. ;

Lot B. — Même quantité de lait, mais au lieu de Proteus, même proportion de corps bactériens de B. aminophilus.

Lot C. — Même quantité de lait, mais celui-ci était infecté avec le

mélange de deux cultures et demi de chacun des deux microbes. Cette expérience à été arrêté le trentième jour.

Résultats. — Lot À. Au bout de huit jours les rats étaient bien portants, mais avaient perdu en moyenne 10 à 25 grammes; au trentième jour tous étaient vivants et en parfait état. Leur amaigrissement individuel avait atteint pour l'un d'eux #5 grammes, mais n'avait pas dépassé en moyenne 30 grammes. Matières fécales constamment normales.

Lot B. — Au bout de huit jours les résultats étaient identiques à ceux du lot A, mais le neuvième jour un rat du poids de 115 grammes avaitété trouvé mort (arrière-train souillé par des matières liquides ; cerveau, poumons et cœur dévorés par les autres rats). Au trentième jour tous les autres animaux étaient vivants et leurs matières étaient restées constamment normales.

Lot C. — Au cinquième jour les matières de presque tous les rats ont commencé à se ramollir; le septième jour six sur dix expulsaient des matières franchement diarrhéiques constiluées par des masses blanchàtres délayées dans un liquide muqueux, filant et très acide au tournesol. Deux jours après tous les rats avaient la diarrhée ; ils étaient très amaigriset leur pelage tout entier était souillé de matières fécales. Au onzième jour. trois d’entre eux sont morts ; d’autres ont succombé les treizième, quatorzième et dix-septième jours, tous ces animaux avaient perdu environ 40 à 55 grammes de leur poids. Au trentième jour un seul rat vivait encore ; son poids avait diminué de 35 grammes, mais il ne présentait plus de diarrhée, ses matières étaient celles d’un animal bien portant.

IL. Même expérience que ci-dessus, mais avec trois lots de six rats. Les doses de microbes avaient été réduites en proportion du nombre des animaux. D'autre part, avant de commencer le régime infectant, les rats avaient été nourris pendant dix jours avec du lait stérilisé. Le régime n'avait modifié en rien l’état de leurs matières et n'avait déterminé qu'un léger amaigrissement.

Lots A et B. —- Résultats superposables à ceux de l'expérience 1, mais

ART à TE

dans le lot B deux rats pesant 105 et 125 grammes étaient morts les hui tième et onzième jour, sans avoir eu de diarrhée.

Lot C. — Quatre rats avaient la diarrhée le quatrième jour ; le sixième tous expulsaient des matières fluides, muqueuses et acides. L'un d'eux à succombé le neuvième jour ; au vingt-troisième jour tous étaient morts.

HT. Même expérience qu'en I etIl ; lots de douze rats. Infection avec six cultures par lot.

Lot A. — Un rat mort le quatorzième jour, cadavre dévoré par les autres. Pas de diarrhée ; matières constamment normales. Onze rats vivants au trentième jour.

Lot B. — Deux rats (115 à 126 grammes) étaient morts l’un le septième jour après avoir eu un jour de diarrhée, l’autre le onzième sans avoir jamais rendu de matières molles. Le cadavre de ce dernier avait été dévoré par les autres rats. Autrentième jour, dix rats vivants.

Lot C.— Cinq rats avaient de la diarrhée dès le cinquième jour ; tous présentaient ce symptôme le huitième jour. Quatre étaient morts le dixième jour ; deux jours après, cinq autres ont succombé. Leur mort est survenue brusquement probablement parce qu'ils avaient dévoré partiellement deux des rats qui étaient morts l’avant-veille. Au trentième jour, trois rats étaient encore vivants ; sur ces trois animaux, deux étaient bien portants et n'avaient plus de diarrhée depuis 10 jours, l’autre était cachectique et a fini par succomber deux semaines après, bien qu'il ait suivi à partir du trentième jour un régime normal.

IV. Un seul lot de dix rats alimentés avec du lait contaminé par la dose habituelle de Proteus et de B. aminophilus.

La diarrhée caractéristique a commencé chez six rats dès le quatrième jour; tous étaient atteints le septième. Au trentième jour il ne restait plus qu'un rat, qui avait été malade jusqu'au vingt-quatrième jour ; les autres étaient morts entre le sixième et le treizième.

V. Lot de dix rats. Même dose journalière de Proteus et de B. aminophilus, mais leur alimentation était constituée par le coagulum de 750 cc. de lait présuré, délayé à consistance de bouillie claire avec un peu de lactosérum.

Les animaux ont présenté de la diarrhée dès le cinquième jour. Au trentième jour il en restait deux qui n'avaient plus de diarrhée, mais qui ont malgré tout succombé 5 et 7 jours plus tard; tous les autres étaient morts du sixième au douzième Jour.

VI. Lot de dix rats. Même dose de Proteus et de B. aminophilus. Alimentation avec le coagulum de 750 cc. de lait, mis en pâte peu épaisse avec 60 grammes de caséine sèche du commerce et un peu de lactosérum. Au quatrième jour trois rats ont succombé sans avoir de diarrhée ; deux jours après deux rats sont morts après avoir expulsé comme les survivants une petite quantité de matières noirâtres et visqueuses. Le lendemain quatre

rats succombaient dans les mêmes conditions et le huitième jour la mort du dernier terminait l’expérience.

VIT. Lot de dix rats. Mème alimentation riche en caséine, pauvre en lactose, mais dose double de microbes, c'est-à-dire pour chaque animal une culture sur gélose de Proteus et une culture de Z. aminophilus. Dès le troisième Jour tous les rats paraissaient malades ; les uns rendaient des matières d'apparence normale, les autres expulsaient péniblement une sorte de mucus brunâtre, visqueux, collant leurs poils et adhèrent aux parois du bocal où ils se trouvaient. Tous ont succombé avant le huitième jour ; trois étaient morts le quatrième jour, deux le cinquième, quatre lesixième et un le septième.

VII. Lot de dix rats. Comme een : coagulum de 750 cc. de lait, délayé dans la moitié du lactosérum séparé. Comme microbes : deux cultures dechacune des deux bactéries par animal. Au huitième jour tous les rats avaient succombhé ; cinq étaient morts dès le troisième Jour, quatre autres le cinquième, le dernier avait résisté jusqu’au septième jour. Celuici avait présenté de la diarrhée à partir du cinquième jour, tandis que la mort des autres était survenue sans signes avant-coureurs bien marqués ; deux d’entre eux seulement avaient rendu des matières enrobées d’un peu de mucus noirâtre et visqueux. Les matières des rats morts le troisième et le quatrième jour étaient très dures, très foncées et alcalines.

IX. Lot de douze rats d’un poids moyen de 150 grammes. Comme unique aliment du lait stérilisé, mais très forte dose de microbes. On leur donnait, en effet, chaque jour les corps bacillaires recueillis sur deux boîtes de Roux de chacune des deux espèces.

Tous les rats de cette expérience ont succombé avant le septième jour : deux dès le troisième, cinq le quatrième, trois le cinquième et les deux derniers le sixième jour. Les animaux morts le troisième et le quatrième jours n'avaient pas présenté de diarrhée ; les autres avaient expulsé pendant les deux derniers jours des matières fluides, assez foncées et contenant une forte proportion de mucosités brunâtres et très visqueuses.

X. Lot de six rats. Même expérience qu’en IX. Mêmes remarques. Deux rats morts le quatrième jour, les quatre autres le lendemain.

Bien entendu, toutes les fois où cela m'a été possible, j'ai fait Dar des animaux morts au cours de ce s expériences. Voici ce que j'ai constaté :

1o Rats ayant présenté pendant au moins six jours une diarrhée muqueuse et acide. Foie et reins pâles ; intestin et surrénales congestion- L'intestin grèle, souvent distendu par des gaz, contenait des flocons

de caséine incomplètement attaquée mêlés à du mucus ; celui-ci, très abondant, était visqueux, filant et acide, Le cœcum était rempli d'une bouillie

grisâtre très acide. En ouvrant l'intestin grêle et le cœcum et en lavant la muqueuse, on voyait de place en place de petites ponctuations hémorragiques. Dans les autopsies faites alors que le cadavre était encore chaud, on ne trouvait le Proteus, dans le sang du cœur, que quatre fois sur dix.

20 Rats ayant succombé dès les trois premiers jours de la diarrhée acide. Hyperémie marquée de tous les organes abdominaux. Grosse rate; gros intestin rempli de matières grisâtres riches en mucus, mais beaucoup moins acides que dans le cas des rats malades depuis longtemps ; intestin grêle parfois distendu et très congestionné par places, mais le plus souvent formant une masse dans laquelle il était très difficile d'isoler les anses intestinales agglutinées entre elles et remplies tantôt d'une matière visqueuse et brunâtre, tantôt de caséine incomplètement attaquée mêlée à du mucus. A l'ouverture de l'intestin, dans certaines anses grêles, la muqueuse se détachait en lambeaux grisâtres, dans d'autres on trouvait des placards ecchymotiques; la muqueuse cœæcale présentait souventun piqueté brunâtre qui paraissait être de nature hémorragique. Dans le sang du cœur, présence du Proteus sept fois sur dix.

30 Rats ayant succombé très rapidement, parfois après avoir présenté une courte période de diarrhée. Intestin grèle agglutiné en une masse informe, de laquelle il est très difficile d'isoler les anses qui sont remplies d'une matière noirâtre, visqueuse, alcaline, plus ou moins fluide et d’odeur infecte. Celte matière était constituée par un mélange de mucus et de sang altéré ; on la retrouvait dans le cœcum mêlée à de rares masses grisàtres. Les excréments contenus dans le reste du colon affectaient parfois leur forme ovillée habituelle, mais le plus souvent ils étaient constitués par la mème substance alcaline visqueuse et noirätre qui remplissait l'intestin grêle. Le foie, la rate, les reins et les surrénales étaient en général très congestionnés ; les deux premiers de ces organes étaient mème parfois noirâtres. À l'ouverture de l'intestin, mêmes observations que ci-dessus, mais avec phénomènes destructifs et hémorragiques incomparablement plus marqués. Dans le sang du cœur présence du Proteus douze fois sur quinze. Je n'ai jamais pu déceler le 8. aminophilus dans le sang des rats que j'ai autopsiés.

En un mot, il résulte bien de ces expériences que si l'on soumet des rats au régime lacté exclusif et à l’ingestion répétée d'un mélange de Proteus vulgaris et de B. aminophilus intestinalis on provoque chez eux une entérite qui peut revêtir soit une forme subaiguë caractérisée par une diarrhée muqueuse et acide, soit une forme aiguë hémorragique rapidement mortelle.

Ce point étant bien établi, j'ai cherché s'il était possible d’entraver la marche des phénomènes entéritiques. Pour cela j'ai mis en

expérience 4 lots de 6 rats; deux de ces lots À et B ont été traités ‘de manière à déterminer la forme aiguë. les deux autres C et Dont été alimentés et infectés de façon à leur donner simplement la diarrhée caractéristique de la forme à évolution lente.

Au troisième jour du régime les animaux des lots À et B étaient déjà manifestement malades, j'ai cessé de donner des microbes au lot B fout en continuant le régime lacté. Malgré cela tous les rats de ce lot sont morts entre le quatrième et le neuvième jour; ceux du lot À ont tous succombé du quatrième au septième.

Pour les lots Cet D j'ai attendu l'apparition de la diarrhée acide et muqueuse ; le lendemain du jour où je l'ai constatée chez tous les rats, c'est-à-dire le neuvième jour, j'ai supprimé les microbes au lot D, tout en continuant l'alimentation lactée. Les rats du lot témoin CG ont commencé à succomber le onzième jour, tous étaient morts au vingt-deuxième ; sur les six animaux du lot D je n'ai pu en conserver qu'un seul qui s’est définitivement rétabli, Les cinq autres ont succombé du dixième au vingt-septième jour.

J'aialors répété cette expérience dans des conditions absolument identiques quant aux doses de microbes et au nombre d'animaux formant également quatre lots A’ B' Cet D'; mais au lieu de supprimer seulement les microbes aux lots B'et D’ j'ai de plus remplacé le lait par le régime habituel des rats (carottes, pain et blé). Les résultats ont été les suivants :

1° Lots A' et B': douze animaux en expérience sont morts du quatrième au huitième jour ; je n'ai observé aucun retard pour les rats du lot B'.

20 Lots Cet D’: Cinq des rats du lots C’ sont morts du douzième au vingtième Jour; le sixième s'est complètement rétabli malgré l'absorption de lait et de microbes jusqu'au trentième jour. Sur les six animaux du lot D'un seul est mort le douzième Jour, tous les autres ont survécu.

En présence de ce fait, J'ai tenu à le vérifier sur un lot de 12 rats. J'ai donné à ces animaux du lait contaminé par les deux microbes de telle manière que la diarrhée à commencé à se manifester le sixième jour ; le lendemain tous rejetaient des mucosités acides. Le huitième jour j'ai supprimé le lait ainsi que le mélange infectant et donné le régime végétarien habituel ; malgré cela deux rats sont morts le dixième jour ; c’étaient d’ailleurs les deux plus petits du lot et ils ne pesaient que 135 grammes. Tous les autres ont survécu ; quatre jours après la suppression du régime

De, TA

nocif la diarrhée avait disparu et les matières présentaient leur aspect normal.

Par un régime convenable, et en cessant de leur donner des microbes, on peut done guérir les animaux présentant depuis un ou deux jours une diarrhée légère, mais on ne peut empêcher la mort des rats présentant les symptômes de début de la forme aiguë.

D'autre part j'ai constaté que la guérison des animaux légèrement malades peut être obtenue, sans quil soit nécessaire de cesser le régime infectant, à l’aide d’un vaccin préparé avec un mélange des deux microbes tués par l’éther.

Dans une première expérience portant sur un lot de dix gros rats présentant tous un début de diarrhée après cinq jours de régime, j'ai pratiqué trois injections sous-cutanées d’une émulsion microbienne traitée par l’éther, à la manière de Vincent, et correspondant à La dilution de deux cultures de Proteus et de deux cultures de B. aminophilus dans 80 cc. d'eau physiologique. Avant préalablement déterminé sur des rats de même poids la dose de vaccin qu'ils pourraient supporter, j'ai fait à chaque animal le lendemain du début de la diarrhée une première injection de 3 ce. Bien que j'aie continué à leur donner lait et microbes, dès le lendemain ils rendaient des matières moulées, mais un jour après la diarrhée reprenait peu intense quoique persistante. Au onzième jour de l'expérience j'ai fait une seconde injection de 4 ec. ; vingtquatre heures après la diarrhée s’atténuait ; le lendemain ils expulsaient des matières encore molles, mais quatre jours après l'injection celles-ci avaient repris leur apparence normale. Craignant une rechute, le dix-septième jour j'ai encore injecté à 4 cc. de vaccin sans observer aucune modification dans l'état des animaux qui n'a plus cessé d’être excellent. À la fin du deuxième mois tous étaient encore vivants bien qu'ils n'aient plus cessé d’absorber tous les jours leur dose habituelle de lait et de microbes, tandis que les dix rats d’un lot témoin étaient tous morts avant le vingtième jour.

J'ai répété cette expérience dans des conditions identiques ; les résultats ont été aussi bons, car il me semble ne pas avoir à tenir compte de la mort d’un des rats vaccinés survenue au trente-sixième Jour, cet animal étant comme tous les autres guéri depuis longtemps de sa diarrhée. Son cadavre ayant été presque complètement dévoré je n'ai pu établir les causes de sa mort.

Lorsqu'on intervient tout à fait au début de la forme subaiguë

RTE

de l’entérite expérimentale, c'est-à-dire lorsque les animaux ont la diarrhée depuis seulement 1 ou 2 jours, le vaccin mixte possède done une action curative incontestable ; mais celle-ci ne se manifeste pas dans la forme aiguë ou lorsqu'on intervient trop tard dans la forme simplement diarrhéique. Toutefois dans ce dernier cas un certain nombre des rats traités succombent 15 à 25 jours plus tard que les témoins.

Dans la forme aiguë hémorragique la vaccination précipite même la marche des accidents, absolument comme le font d'ailleurs de trop fortes doses de vaccin (6 ec.) injectées au début de la diarrhée. Plusieurs expériences m'ont montré que dans l’infeetion intense la mort survient dans les 24 heures qui suivent l’injection vaccinante ; les doses trop fortes dans la forme légère font mourir les animaux trois ou quatre jours avant les témoins. Si les conditions dans lesquelles le vaccin est utilisable comme moyen de traitement sont assez étroites, son action préventive se manifeste avec beaucoup plus de netteté. En eifet, j'ai traité douze rats, d'un poids moyen de 170 grammes, par trois injections de 4, 5 et 6 cc. d'émulsion microbienne ; les injections étant faites de 8 jours en 8 jours, j ai pu, quatre Jours après la dernière, soumettre impunément les animaux ainsi traités au régime qui donne à coup sûr l’entérite muqueuse. Jai prolongé pendant deux mois l’influence du lait et des microbes ; pendant tout ce temps l'état général des rats vaccinés m'a toujours paru excellent et leurs matières n'ont pas cessé de présenter leur aspect normal, tandis que tous les animaux d’un lot témoin avaient succombé entre Le dixième et le vingtième jour, après avoir présenté la diarrhée muqueuse et acide caractéristique.

Bien entendu, au cours de toutes ces expériences sur les rats, j'ai examiné les matières fécales au point de vue bactériologique ; toutefois j'ai négligé celles qui provenaient d'animaux succombant rapidement à la forme aiguë hémorragique et J'ai porté toute mon attention sur celles des animaux présentant la forme diarrhéique à évolution plus lente.

J'ai remarqué qu’au début de la diarrhée, les déjections blanejaunâtre étaient peu acides ; quelquefois même les animaux avaient quelques selles neutres après en avoir eu de nettement acides. À partir du deuxième jour l'acidité allait sans cesse en augmentant pour atteindre en général son maximum vers le cinquième, en même temps que s'accroissait la teneur en mucus ef

que les selles-devenaient plus fluides. À ce moment elles présentaient une odeur fade, extrêmement désagréable ; elles conservaient ce caractère, ainsi que leur grande acidité et leur aspect glaireux jusqu'à la mort de l'animal.

Parallèlement à ces modifications, j'ai observé dans les matières la prédominance croissante du Proteus et du B. aminophailus, puis la multiplication de deux bacilles prenant le Gram dont l'un ne tardait pas à devenir prépondérant. J'ai isolé ces deux microbes ; le moins abondant était le 8. perfringens, il n'était d’ailleurs pas absolument constant dans les selles très acides. L'autre qui se développait admirablement dans le bouillon lactique, coagulait le lait sans modifier le caillot, acidifiait les milieux contenant du lactose, du saccharose, du galactose ou du glucose et ne donnait pas d’indol, était très vraisemblablement identique au B. acidophilus de Moro, car il en présentait également tous les caractères morphologiques et biologiques.

Au moment où les selles diarrhéiques étaient à leur maximum d'acidité et jusqu'à la mort ou à la guérison des animaux, la flore était presque uniquement constituée par le Proteus, le B. aminophilus et le B. acidophilus (1), ce dernier en très grande abondance.

Quant aux matières des rats normaux, ainsi que je l’ai déjà dit, J'y ai presque toujours trouvé le Proteus vulgaris, mais je n'y ai jamais rencontré le 2. aminophilus. Les Proteus isolés chez des rats bien portants ne différaient en aucune façon du Proteus de diarrhée infantile que j'ai employé pour mes expériences. J'ai fait notamment une expérience sur un lot de dix rats que j'alimentais avec du lait infecté avec du B. aminophilus et un Proteus isolé par M. Metchnikoff dans les déjections de tout jeunes rats : Les résultats que J'ai obtenus {diarrhée muqueuse et acide, mort en 8 à 13 jours) ont été ceux que m'auraient donné mon Proteus d’origine infantile.

Enfin j'ai complété mes expériences en recherchant si les matières contenues dans l'intestin des rats malades contenaient une quantité appréciable de substances toxiques. Pour cela j'épui-

1. Dans les derniers jours de la maladie le Bacille acidophile joue peut-être un rôle important qu'il sera nécessaire de préciser. Ge microbe a d'ailleurs été signalé, par Finkelstein, Escherich et Salge, comme très abondaut dans les malières des nourrissons atteints de cerlaines gastro-entérites aiguës,

2 QT

sais la masse recueillie dans lintestin par l'alcool à 96° additionné de 1 ce. pour 100 d'acide chlorhydrique concentré ; j'évaporais à sec, au bain-marie, la liqueur alcoolique obtenue claire par centrifugation. Je reprenais par l'eau le résidu de cette évaporation, Je faisais bouillir cette solution quelques instants avee du noir animal, je la filtrais et je la concentrais au bain-marie. Quand il ne restait plus que 2 ou 3 centimètres cubes de liquide légèrement acide, je neutralisais exactement avec quelques gouttes d’une solution de carbonate de sodium à 5 pour 100 et je complétais à 10 cc. avec de l’eau physiologique à 7,5 0/00. Comme Jj'opérais toujours sur le contenu intestinal de deux rats, Je Savais à quoi correspondait ce volume de liquide, que j'éprouvais en l'injectant dans la jugulaire de gros cobayes de 600 à 650 grammes.

Dans ces conditions, avec 5 ec. de liqueur, j ai constaté que l'extrait du contenu intestinal d’un rat bien portant alimenté avec du lait sans microbes était sans action nocive pour le cobaye ; lorsque Pextrait provenait d'un &nimal venant de succomber à la forme diarrhéique subaiguë les cobayes étaient malades, mais se rétablissaient vite et ne présentaient plus aucun signe d'intoxication une heure après l'injection. Avec la solution obtenue en traitant le contenu intestinal d'un rat venant de mourir après quatre jours du régime hyperazoté et très riche en microbes, j'ai noté, au contraire, une toxicité élevée. En effet, cinq centimètres cubes d'extrait tuaient l'animal sur l'appareil à contention et trois centimètres cubes déterminaient sa mort en quatre ou cinq minutes avec dyspnée violente, contraction très forte du diaphragme, péristaltisme exagéré, distension extrème des poumons et persistance des battements cardiaques quelques instants encore après la cessation des mouvements respiratoires.

Ces symptômes rappelant singulièrement ceux que l'on observe chez les cobayes succombant à l'injection intraveineuse d'un demi milligramme d'imidazoléthylamine, il est bien possible que la toxicité du contenu intestinal des rats profondément infectés et intoxiqués soit due à cette même base. Celle-ci proviendrait tout naturellement de l’action du B. aminophilus sur l'histidine libérée par l’hydrolyse diastasique de la caséine alimentaire et de lhémoglobine du sang des hémorragies intestinales.

En même temps que je faisais avec des rats blancs toutes les expériences que je viens de rapporter, J'ai fait quelques essais sur

Berthelot 6