CULTURE SUR PEPTONE

Dans leur mémoire sur la toxine charbonneuse, MM. Hankin et Wesbrook ont retiré leur toxalbumose de cultures dans un milieu de peptone pure, préparée par un procédé long et pénible. Il m'a semblé plus simple de chercher à isoler de la peptone du commerce la peptone qu’elle peut contenir et qui s’y trouve mélangée à des quantités variables d’albumoses.

Pour isoler ces albumoses de la peptone, je me suis servi du sulfate d'ammoniaque. Pour me débarrasser ensuite de ce sel, j'ai employé deux procédés différents.

4er procédé. — Une certaine quantité de peptone commerciale ayant été dissoute dans l’eau, j'ajoute à la solution du sulfate d’'ammoniaque en quantité telle que la liqueur en soit certainement saturée à 1000. Je fais bouillir et je filtre après quelque temps d’ébullition. Les albumoses se coagulent et le liquide filtré * ne contient plus de matière sde AAA par le sulfate d’ammoniaque. On soumet ce liquide à la dialyse dans un courant d’ eau pendant une quarantaine d'heures. J’obtiens ainsi une liqueur contenant assez peu de sulfate d’ammoniaque pour qu'il n’entrave pas le développement de la bactéridie. La solution de peptone ainsi préparée était alcalinisée avec du carbonate de, soude, étendue d’eau, ou concentrée par la chaleur, de façon à contenir environ 3 pour cent de peptone, répartie dans des ballons, et stérilisée à 145°.

Ce milieu ainsi préparé n’est pas toxique pour les animaux :# il n’a pas non plus de propriétés immunisantes. Les ballons, une fois stérilisés, ont été ensemencés avec da sang provenant d’un. lapin mort du charbon en moins de trente heures.

2 procédé. — La dialyse a l'inconvénient de laisser perdre une grande quantité de peptone. De plus, il est très difficile d'éliminer complètement le sulfate d’ ammoniaque de la solution.

J’ai évité ces inconvénients en ajoutant à la liqueur la quantité d'hydrate de baryte nécessaire pour précipiter tout l'acide sulfurique qu’elle contient en combinaison. La réaction est facilitée et l’ammoniaque chassée en portant le tout pendant, plusieurs heures à une température voisine de l’ébullition. Le” liquide est alors séparé du précipité de sulfate de baryte. Je le porte quelque temps à l’ébullition et j'y fais passer en même

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temps d’abord un courant d'air de façon à en éliminer l’ammoniaque, puis un courant d'acide carbonique destiné à précipiter la baryte qui peut avoir été mise en excès. Une fois toute la baryte précipitée, je filtre.

Jobtiens ainsi une solution contenant toute la peptone qui se trouvait dans l'échantillon employé et débarrassée dè sulfate d’ammoniaque. La peptone commerciale, dont je me suis servi finalement, contenait 32,7 pour cent de cette peptone purifiée (séchée à 120°) avec 0,3 de cendres ‘.

Avec la solution de peptone ainsi préparée je fais le milieu suivant :

PAU RER naar o Der Men de nie TA eu 1.000 grammes. MPCDILONEN AN SRE RME AR OUT. A NA 40 RE TES Eee M LS EN Ne A5 — Phosphate de soude...,...... NN Me ler Re gr,5 Phosphate de polasse......,.... ON ARE RTE gr,2 Gleénnre /ofémale RE nn NE pere 40 grammes.

La liqueur est filtrée, répartie dans des ballons Pasteur de 250 c. cset finalement stérilisée à 110°.

Ce milieu ainsi préparé n’est pas toxique pour les animaux, et je ne lui ai pas trouvé non plus de propriétés immunisantes contre le charbon.

Les ballons ont été ensemencés avec du charbon virulent. La virulence du bacille dont je me suis servi avait été exaltée par une série de passages de lapin à lapin. Un tiers de c. ce. d’une culture en bouillon âgée de 24 heures, inoculé sous la peau d’un lapin, tuait dans la majorité des cas cet animal en moins de 30 heures. J'ai ainsi fait des cultures à diverses températures ; mais le mode d'extraction de la toxine sèche, ayant été toujours le même quelles que soient les conditions extérieures de la culture, je l’indiquerai d’abord une fois pour toutes.

Mode d'extraction de la toxine sèche. — Une fois la culture de charbon suffisamment développée dans le milieu de peptone, le liquide était filtré et saturé de sulfate d’ammoniaque à la température ordinaire. Il se produit un précipité plus ou moins abondant suivant les cultures. Je laissela coagulation se faire pendant une quinzaine d'heures, puis le liquide est filtré. Je lave le pré-

1. La peptone commerciale de cet essai était de la peptone spongieuse fournie

par la maison CSSS de Paris.