HERSCHER
HiMANSs VAN DEN BERGH emploie comme liquide témoin une solution titrée de bilirubine à 5 mg. pour 100 cc. de chloroforme. Pour des raisons économiques l’auteur a plus tard recommandé, non pas à l’avantage de sa méthode, une solution éthérée de sulfocyanure ferrique.
Comme cette coloration rouge ne se prête guère pour les dosages colorimétriques, on emploie avec plus de satisfaction une modification de cette méthode, découverte et mise au point par THANNHAUSER et ANDERSEN (101). C'est cette méthode, que nous avons employée et que nous exposerons Ci-dessous.
Les valeurs normales de la bilirubinémie sont de 0,25 à 0,5 milligrammes pour 1000 cc. de sang. On a pris l’habitude d'exprimer aussi le taux de la bilirubinémie selon VAN DEN BERGH par les rapports de 1/40.000 à 1/20.000 pour le sérum normal.
La méthode de THANNHAUSER et ANDERSEN.
Principe: La coloration de la combinaison diazoïque de la bilirubine passe au bleu-violet en solution franchement acide. Cette teinte est plus intense et se prête beaucoup mieux à l'examen colorimétrique que celle obtenue par la méthode initiale de VAN DEN BERGH.
Quantité de sérum nécessaire: 2 cc.
Réactifs nécessaires:
1) Alcool à 95°.
2) Solution d’acide sulfanilique (Diazo D):
Acide sulfanilique 5 gr., Acide chlorhydrique concentré (D — 1,19) 50 cc. Eau distillée q. s. p. 1000 cc.
3) Solution de nitrite de sodium (Diazo Il):
Nitrite de sodium: 5 gr.
Eau distillée q. s. p. 1000 cc.
Le diazo-réactif est préparé au moment de l’emploi
en mélangeant: Diazo I: 25 cc.
Diazo IE: 05 cc.
4) Acide chlorhydrique concentré (D = 1,19).
5) Solution saturée de sulfate d’ammonium.
6) Solution standard de bilirubine:
Bilirubine: 5 mg.
Chloroforme: 100 cc.
Pour préparer la solution témoin définitive on évapore dans un verre à montre n (2) cc. de la solution chloroformique standard. On dissout le résidu dans 11 cc. d’alcooi à 95°, puis on traite la solution alcoolique avec 5 cc. de diazoréactif.
On place à l'obscurité pendant 10 minutes pour obtenir l'intensité maximum de coloration.
Puis on y ajoute: 4 ce. d’acide chlorhydrique concentré.
On mélange et on peut effectuer le dosage.
Mode opératoire pour le dosage de la bilirubinémie.
Ï. — Technique pour des sérums normaux et les sérums pathologiques à diazo-réaction indirecte.
Placer dans un tube de centrifugation:
Sérum à examiner: 2 ce.
Alcool! à 95°: 4 cc.
Centrifuger et prélever 1 cc. du liquide limpide surnageant.
Mélangérvle liquide alcooliques. 74m ue. trec:
Avec le diazo-réactif fraîchement préparé .... 0,25 cc.
Puis placer à l’obscurité pendant 10 minutes.
Ajouter de l’acide chlorhydrique concentré .. 0,20 cc.
EE do OA PR RE (55e.
Mélanger et examiner à la cellule photo-électrique.
Si le mélange est légèrement trouble, on peut le filtrer
à travers un petit filtre préalablement humecté au moyen d’éther sulfurique. Il n’y a aucune adsorption de teinte par
le papier-filtre.
II. — Technique pour des sérums pathologiques à diazoréaction directe (cholécystite, cholélithiase, ictère par rétention) :
Dans ces sérums une grande partie de bilirubine est entraînée avec le précipité de l’albumine qui se forme par
