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sans subir de modifications appréciabler, mais sans se multiplier: Au huitième jour, ils ont commencé à s’altérer, pour devenir méconnaissables à partir du douzième jour. SEE

Les ensemencements dans l’eau de condensation de tubes de gélose au sang (milieu de Novy et Néal) nous ont donné au contraire une culture positive (produit de ponction splénique du 27 novembre). Rogers n'avait pu obtenir le développement de son microbe dans ce milieu.

A 2%, température que nous avons choisie à l'exemple dé nos prédécesseurs anglais, la culture se fait lentement. Au troisième jour,on ne note encore aucune multiplication des parasites . C’est seulement vers le septième Jour que celle-ci se produit. Au douzième jour, la culture est déjà très abondante. La vitalité du microbe paraît très longue ; nous possédons des cultures âgées de deux mois dans lesquelles les parasites sont encore vivants et mobiles.

La repiquage des cultures est aisé, nous avons déjà obtenu six passages successifs; au sixième passage, la culture est aussi abondante qu’au premier; il n’y à pas de raison pour que les repiquages ne puissent être continués indéfiniment.

Notre milieu est ainsi préparé : à des tubes d’&gar ordinaire (bouillon de viande 1 litre, peptone 10 grammes, sel marin 5 grammes) à réaction très faiblement alcaline (7 cent. cubes de la solution normale de soude sont ajoutés après neutralisation parfaite au tournesol), liquéfiés vers 90°-55°, nous mélangeons un tiers de leur volume de sang de lapin prélevé par ponction aseptique du cœur; les tubes sont inclinés et abandonnés ainsi une demi journée à la températureordinaire; on les cachète ensuite à la cire et on les porte d’abord cinq jours dans l’étuve à 57,puis un temips égal dans celle à 22°. Ces dernières manipulations n’ont pas seulement pour but de vérifier la stérilité de nos milieux, mais de per- ‘mettre la diffusion des ADS CEE nutritivesde la partie solidedans l’eau de condensation.

Nous avons pu nous convaincre que des tubes qui venaient d’être préparés convenaient mal au développement des parasites. Nous essayonsactuellementdes milieux moins complexes et nousespérons pouvoir donner bientôt une technique simplifiée de la culture de cés microbes. L’ensemencement doit être fait aussitôt après le prélèvement du sang splénique et les tubes ensemencés doivent être cachetés avec le plus grand soin afin d'éviter la dessication. :

(1) Pour pratiquer la ponction splénique, se servir d’une aiguille fine et neuve, en acier, montée sur une seringue ; bien vérifier le fonctionnement de la seringue, stériliser à l’autoclave, mettre à sécher à l'étuve. Cette dernière précaution est indispensable, car une trace d’eau restée dans la seringue nuit considérablement aux préparations microscopiques . Appliquer sur la peau une couche de teinture d’iode, piquer au milieu. Faire d’abord les ensemencements, puis les frottis sur lames, :

Sur ce milieu, les corps de Leishman se présentent avec des caractères variables suivant le stade auquel on observe le parasite (voir les diverses figures de la planche qui accompagne ce travail).

L’élément le plus jeune est un corps presque identique aux formes qui se voient dans l’organisme humain; il est seulement d’un volume plus considérable, double ou triple ordinairement (fig. 1); on reconnaît facilement le grand karyosome et le petit, tous deux de dimensions un peu plus grandes. Le parasite, à ce stade, est arrondi, ovalaire ou piriforme. Un état plus avancé est celui que représente la figure 2; même aspect, mêmes dimensions (164 sur 12 sur la figure), même structure intérieure; on observe seulement de plus la présence d’un flagelle plus ou moins long, en général un peu plus long que le parasite lui-même. L'origine de ce flagelle est sur certains corps très manifestement en rapport avec le petit karyosome (fig. 3). Aux stades plus avancés, le parasite s'éloigne de plus en plus de l'aspect qu’il présentait dans l’organisine pour revêtir celui d’un flagellé typique. Les figures 5, 6, 7,8, 9 et 10 montrent les formes, les dimensions et les variétés de structure qu’on peut alors observer. D'abord court, ovale ou piriforme (5, 6), le parasite s’allonge (7, 8) jusqu'à devenir très long et très étroit (9, 10). Ses dimensions, suivant ces formes, varient de 8 à 24 & en longueur sur 4 à 15 u pour la largeur. Le flagelle offre toujours une longueur égale ou légèrement plus grande que celle du corps. L’extrémitéopposée au flagelle (extrémité postérieure), arrondie dans les formes trapues, s’effile de plus en plus jusqu’à devenir quelquefois pointue dans les formes plus longues.

L'aspect et les dimensions des deux karyosomes sont peu variables. Le gros karyosome, arrondi ou ovalaire (dans les formes étroites), présente ordinairement dans le premier cas, un diamètrede 2 x; il mesure3 u sur 1 uw 5 dans les formes les plus minces. Le petit karyosome, toujours en batonnet, ne dépasse guère 1 # en largeur, sa longueur pouvant varier du double au triple |

Les deux karyosomes sont disposés toujours de la même manière, le petit du côté du flagelle, le grand da côté de l’extrémité opposée. Dans ce rapport constant, leur siège précis est très variable. Généralement placés à distance l’un de l’autre, on peut les voir se rapprocher, venir même en contact (nos figures représentent les principales de ces dispositions); ils peuvent lorsqu'ils sont ensemble occuper le centre de l’élément ou l’une des extrémités; l’un peut être central, l’autre périphérique ou.bien chacun peut sièger vers une extrémité du parasite.

La méthode de Giemsa colore le grand karyosome en violet, le petit en rouge, le flagelle offre une coloration intermédiaire, le protoplasma se teinte en bleu violacé.