DÉTERMINATION DE LA FLUORESCENCE-LIMITE

ployée pour arriver à ce résultat, on voit que 10 centièmes de centimètre cube ont été nécessaires (1).

2° Calculs

Nous savons donc par l'opération que nous venons d’effectuer que 10 centièmes de centimètre cube de la solution étalon d'hydrolibirubine sont nécessaires pour faire apparaître dans les 10 centimètres cubes de réactif révélateur la fluorescence verte et claire immédiate ou fluorescence limite.

Or 100 centimètres cubes de la solution-étalon — 0,01 d'hydrobilirubine.

1 centimètre cube de la solution-étalon — 0,0001 d’hydrobilirubine.

Î centième de centimètre cube de la solution-étalon — 0,000001 d'hydrobilirubine.

et 10 centièmes de centimètre cube de solution-étalon — 0,000010 d’hydrobilirubine.

La fluorescence claire et verte ou fluorescence-limite se produit donc dans les 10 centimètres cubes de réactif avec 10 millionièmes de gramme d’hydrobilirubine. Par conséquent toutes les fois que l’on verra apparaîtreles 10 cents. cubes du réactif révélateur la fluorescence-limite, on sera assuré de se trouver en présence de 10 millionièmes de gramme d’hydrobilirubine.Nons ajoutons— et ceci est capital — non pas 10 millionièmes de grammes d’hydrobiliru-

bine pure, produit qui n’existe pas, mais 10 millionièmes de

(1) L'ensemble de cette opération peut servir en outre à déterminer le titre exact de l'hydrobilirubine employée pour effectuer cette solution-étalon. Si pour obtenir la fluorescence limite il faut plus de 10 divisions c’est qu’on à affaire à une hydrobilirubine d’un titre inférieur à la nôtre, c’est-à-dire moins pure ; si au contraire il faut moins de 10 divisions l’hydrobilirubine employée est plus pure que la nôtre; de toutes façons son titre est. exactement déterminé,

58 MANUEL OPÉRATOIRE gramme d'hydrobilirubine de Merck, obtenue par le procédé d'Hoppe-Seyler.

Ilest bien évident que la détermination de ce chiffre sur lequel repose tous les calculs, est faite une fois pour toute, et qu'il ne saurait être question d’y revenir à propos de chaque dosage. Nous nous sommes livrés, à une série de vérifications, pour contrôler l'exactitude de ce résultat, Tout d'abord nous avons répété maintes fois ce dosage initial en nous servant de la même évolution titrée à L centigramme pour 100. En outre nous l'avons vérifié en opérant avec des dilutions de plus en plus étendues de cette solution mère. Nos résultats ont toujours été proportionnels entre eux et la fluorescence-limite s’est toujours sensiblement produite avee la même quantité d'hydrobilirubine.