Dosage proprement dit

* Cette deuxième étape du dosage que nous allons décrire maintenant est en pratique la seule que l'on ait à réaliser, puisque, la première étape ayant été accomplie une fois, le chiffre obtenu, vérifié, ne change pas et reste toujours égal à lui-même soit : 10 millionièmes de gramme d'hydrobilirubine.

Cette deuxième étape se subdivise elle-même en deux temps principaux : l'extraction de l'urobiline et de la stercobiline et le dosage proprement dit de l'extrait ainsi obtenu.

l° Procédé d'extraction dans l'urine et les fèces de. l'urobiline et de la stercobiline.

La condition essentielle pour réaliser un dosage exact de l’hydrobilirubine, c’est d'extraire de l'urine ou des fèces à examiner {oute l’hydrobilirubine. C’est aussi une des conditions les plus difficiles à remplir, ainsi qu’en témoigne l’examen attentif de la plupart des procédés de dosage du pigment de Jaffé. Les uns s'exposent à laisser perdre de l’hydrobilirubine au cours de manipulation chimiques trop complexes, les autres $e condamnent à altérer une partie de cette hydrobilirubine par l'adjonction de réactifs chimiques, employés dans des buts divers, d’autres enfin n'arrivent, du fait de l'insuffisance de leur technique, qu’à extraire une partie seulement de l’hydrobilirubine totale.

Notre but a été de prouver un procédé qui remplisse les trois conditions suivantes, essentielles :

1° Etre simple et clinique ;

2 tre capable d'extraire toute l’urobiline, toute la stercobiline et leurs chromogènes ;

3 Etre incapable, du fait des réactifs où des manipulations chimiques employés, de détruire ou de perdre une partie même minime de l’hydrobilirubine.

Nous espérons avoir atteint ce triple but.

I, — Principe de la méthode.

a). TECHNIQUE GÉNÉRALE. — Précipiter toute l’urobiline ou toute la stercobiline d’une urine ou d’une matière fécale donnée par le sulfate d’ammoniaque en milieu acide, oxyder leurs chromogènes par la liqueur iodo-iodurée de Lügol, reprendre ensuite par l'alcool amylique Phydrobilirubine ainsi précipitée et obtenir en définitive un extrait aleoolo-amylique, ayant repris toute l’hydrobilirubine de l'urine et des fèces données.

2° Instrumentation.

Les objets nécessaires pour effectuer l’extraction de l'hydrobilirubine, tant de l’urine que des fèces sont très peu nombreux. Nous citerons :

1° Une série d’ampoules à décantation munis d’un robinet et de contenances variables : 1 litre, 500 cent. cubes, 400 cent. cubes, 300 cent.cubes parexemple. Ces ampoules se trouvent très facilement dans le commerce ;

2° Des supports appropriés à chacune de ces ampoules.

3 Deux éprouvettes graduées, l’une de 100 centimètres cubes et l’autre de 10 centimètres cubes ;

4 Cristallisoirs, entonnoirs, verres à pied, agitateurs, balances, mortier, filtres, etc.

3° Manuel opératoire.

À. Urines. — 1° On recueille soigneusement la quantité des urines des 24 heures d’un sujet donné et on note ce volume total exactement mesuré ;

2° On en filtre 100 centimètres cubes dans une éprouvette graduée et on l’acidifie avec 5 gouttes d’une solution d'acide sulfurique à 1 pour 100.

3° On pèse 60 grammes de sulfate d’ammoniaque et après l'avoir pulvérisé au mortier on l’introduit dans une ampoule à décantation.

4° Aux 100 centimètres cubes d’urine filtrée à examiner on ajoute 5 centimètres cubes de liqueur iodo-iodurée de Gram. On transforme ainsi par oxydation le chromogène de lPurobiline en urobiline.

5° On verse les 100 centimètres cubes d’urines, renfermant 5 centimètres cubes de liqueur de Gram, dans l’ampoule à décantation, contenant déjà les 60 grammes de sulfate d’ammoniaque pulvérisé, On bouche soigneuse=