CHAPITRE IV

ÉTUDE DE L'INFLUENCE DES DIFFÉRENTS FACTEURS PHYSIQUES ET CHIMIQUES SUR L'ACTIVITÉ HÉMOLYTIQUE DU COMPLEMENT

L'activité hémolytique d'un complément dépend des conditions physiques et chimiques (temps, température, pH, etc...) dans lesquelles la mesure de cette activité a été faite. Différents auteurs et principalement Heidelberger, Mayer et leurs collaborateurs [21-22] ont particulièrement étudié l'influence de ces différents facteurs sur le titre du complément. Voici leurs conclusions qui nous ont permis d'établir un mode opératoire rationnel du titrage du complément.

Temps d'hémolyse. — Le pourcentage de globules rouges sensibilisés hémolysés à 37° par une dose fixe de complément varie en fonction du temps : ce pourcentage augmente rapidement et atteint son maximum en 45 minutes, On a donc intérêt pour rendre le titrage du complément indépendant du facteur temps à choisir un temps d’hémolyse supérieur ou égal à 45 minutes, ce qui permet en outre de donner à la réaction sa sensibilité Maxima. .

2° Température d'hémolyse. — Entre 37° et 34° l’activité hémolytique du complément ne varie pratiquement pas. Au contraire le titre du eomplément baisse si la température s'élève au-dessus de 37° ou descend en-dessous de 34°.

3° Effel de la concentration saline. — Entre certaines limites d’isotonicité le titre du complément (nombre d'unités 5o 0/0 par centimètre cube) est inversement proportionnel à la concentration en CINa du milieu. Ces varialions sont importantes et justifient le soin particulier que l’on doit apporter à la préparation de l’eau servant à diluer les différents réactifs.

4° Effet du volume total contenu dans les lubes du litrage. — La dose en valeur absolue de chacun des réactifs étant constante, le titre du complément est inversement proportionnel au volume total sous lequel la réaction est effectuée : si le titre est de 272 pour un volume de 2 cm, il sera de 211 pour un volume de 3 em° et de 148 pour 5 cm° (Heidelberger).

5° Effet du pH. — Entre pH 6,9 et 7,6 les variations observées dans l'activité hémolytique du complément sont minimes.

6° Influence du magnésium. — L'ion Mett, même à l’état de traces infinitésimales, est nécessaire pour que se manifeste l’action hémolytique du complément : les citrates et les pyrophosphates qui précipitent cet élément inhibent totalement l'hémolyse par le complément. Mais pour que cette activité hémolytique soit maxima il faut qu'il y ait dans le milieu une dose oplima d'ions Met.

Nous avons vérifié que la dose optima de Met à ajouter dans les tubes du titrage du complément tel que nous l’effectuons est de 50 + (0,50 em° de SO,Mge, 70H, à 1 0/00), ce qui permet de doubler le titre de certains compléments particulièrement pauvres en Mg**. Les doses supérieures à 200 y diminuent le pouvoir hémolytique et mème la dose de 2.000 y bloque

l’'hémolyse.