PREMIÈRE PARTIE

LA RÉACTION D'HÉMOLYSE.

TITRAGE DU COMPLÉMENT A 50 0/0 D'HÉMOLYSE

Le titrage du complément est basé sur la propriété que possède l’alexine de lyser les globules rouges de mouton sensibilisés par une hémolyÿsine anti-mouton. On appelle classiquement unilé, la plus pelile quantité de complément (exprimée en volume de sérum frais, pur ou dilué) capable d'hémolyser totalement, à 37° et dans un temps donné, une quantité fixe d’hématies de mouton sensibilisées.

Dans une série de tubes on introduit le complément à doses croissantes et les globules rouges sensibilisés à dose fixe. La lecture des résultats se fait en appréciant à l'œil nu la différence entre le premier tube où l’hémolyse est totale et le dernier tube où l’hémolyse est incomplète, ce qui se traduit par la persistance d’un trouble, l’unité est le volume de K contenu dans le premier tube parfaitement clair. Mais les travaux sur l’hémolyse de Von Krogh [9], Morse [10], etc... montrèrent que l’unité 50 0/0 ou quantité de complément capable d’hémolyser dans les mêmes conditions 5o o/o des hématies de mouton sensibilisées, pouvait être déterminée avec beaucoup plus de précision que l’unité classique dont nous venons de parler (et que l’on peut appeler par opposition unité 100 o/o).

En effet, on voit sur la courbe d’hémolyse (courbe de Gauss, en forme de S) exprimant les variations du pourcentage d’hémolyse en fonction de: l'augmentation du volume de complément utilisé, que le point 5o 0/0 est le point d'inflexion de la courbe : c’est aux alentours de ce point que pour une variation AK du volume de complément utilisé, la variation AH du pourcentage d’hémolyse est maxima : ce point reflète donc avec plus de précision l’activité hémolytique d’un complément que le point 100 0/0. D'autre part, la détermination de l’unité 5o o/o se fait comme nous le verrons dans la suite, non plus à l’œil nu, mais photométriquement, ce qui augmente la sensibilité de la mesure. C’est pourquoi Wadsworth et les Maltaner [11], et après eux de nombreux auteurs américains, mirent au

point et utilisent des techniques de titrage du complément à 50 o/o d’hémolyse.

Nous allons donc étudier en détail la réaction d’hémolyse à 50 o/o et décrire une technique de titrage.

La réaction d’hémolyse à 5o o/o est caractérisée par une grande sensi-

bilité et nombreux sont les facteurs qui influent sur la réaction. Pour que le titrage soit réellement précis il faut opérer dans des conditions techniques rigoureusement standardisées : ainsi la valeur de l’unité 50 o/o dépendra uniquement de l’activité hémolytique du complément.

En premier lieu, il est capital d'employer toujours dans la réaction la même quantité de globules rouges de mouton : nous parlerons donc tout d’abord de la standardisation de la suspension globulaire, standardisation qui se fait photométriquement avec une grande précision.

Après avoir étudié la technique du titrage du K, la courbe d’hémolyse et le calcul de l'unité 50 0/0, nous verrons l'influence qu'ont sur l’hémolyse les différents facteurs entrant en jeu dans la réaction. À ce point de vue, nous étudierons

— tout d'abord l'influence des hémolysines, ce qui nous amènera à décrire le titrage du sérum hémolytique ;

— et-enfin les-différentes conditions physiques et chimiques dans lesquelles la réaction d'hémolyse est pratiquée. De cette étude nous déduirons la technique standard donnant à la réaction d’hémolyse sa sensibilité maxima sans nuire à l'exactitude des résultats qui ne doivent dépendre que de l’activité hémolvytique du complément lui-même.