PRINCIPE DE LA STANDARDISATION PHOTOMÉTRIQUE

L'unité 5o o/o de complément est définie par rapport à une quantité fixe de globules rouges de mouton qui est introduite dans la réaction sous la forme d’un volume fixe de suspension globulaire diluée de titre exactement déterminé. On obtient une suspension du titre voulu en diluant en proportions convenables dans l’eau à 8,5 0/00 de CINa (eau physiologique) le culot globulaire du sang de mouton lavé à trois reprises par centrifugation. Mais la teneur en hématies du culot globulaire n’est pas constante. Il est nécessaire de contrôler le titre de cette suspension et de l’ajuster ensuite au titre standard.

Ce contrôle peut se faire en comptant les globules de la suspension à l’hématimètre. Mais il est plus simple, comme l'indique Kent (12) de mesurer photométriquement la teneur en hémoglobine de cette suspension. Pour

cela l'hémoglobine contenue dans les globules est libérée en ajoutant à un volume connu de suspension globulaire un volume d’eau distillée suffisant pour lyser tous les globules. La densité optique de cette solution d'hémoglobine est mesurée grâce à un photomètre à cellule photo-électrique éclairé par un faisceau de lumière verte monochromatique. Dans celte solution, l'hémoglobine est sous forme d’oxyhémoglobine et l’absorption de lumière est maxima lorsque la lumière utilisée a une longueur d'onde de 5.410 À ou de 5.760 À. La plupart des auteurs font les mesures avec une lumière de À=5.500 À. .

Mais l’oxyhémoglobine en solution est progressivement transformée, par oxydation, en méthémoglobine de couleur brune, .qui, à la longueur d’onde de 5.500 À, absorbe moins de lumière que l’oxyhémoglobine rouge. D'où une erreur par défaut d'autant plus importante que la transformation en méthémoglobine est plus avancée mais qui ne dépasse jamais 2 ou 3 o/o. Pour remédier à cet inconvénient, il est recommandé d’effectuer les mesures avec une lumière de À=5.410 À (ou même de 5.200 À), longueurs d’onde où le défaut d'absorption de lumière de la méthémoglobine est moindre qu'à 5.500 ou 5.760 À. Mais pour cela il faut utiliser un spectro-photo-colorimètre à réseau fournissant une lumière stric-

tement monochromatique et de la longueur d'onde voulue.