Alun de potasse 20 grammes

Eau distillée 200 centimètres cubes.

Faire dissoudre à chaud et filtrer après refroidissement.

Au bout de vingt-quatre heures mélanger les solutions a et b ; abandonner huit jours le mélange à l'air libre, puis le conserver dans un flacon bouché et filtrer au moment du besoin.

Hématéine.

Préparer les deux solutions suivantes :

a. Hématéine.... 1 gramme. I b. Alun de potasse. 50 grammes.

Alcool absolu.. 50 centimètres cubes. | Eau distillée. . . 1 000 centimètres cubes.

La solution b est faite à chaud et mélangée immédiatement à la solution a. Laisser refroidir le mélange à l'air ; filtrer.

Carmin de Orth.

Solution aqueuse saturée de carbonate de lithinc. . 100 centimètres cubes. Carmin n° 40 2sr,50

Faire dissoudre à froid, en triturant dans un mortier.

Carmin de Orth alcoolisé.

Carmin de Ortb 5 volumes.

Alcool à 95° 1 volume.

Mélanger. S'emploie exclusivement pour la coloration des coupes fixées sur la lame avec l'albumine de Mayer, le carmin de Orth ordinaire dissolvant l'albumine.

Picrocarmin de Orth.

Mélanger :

Carmin de Orth 1 volume.

Eau picriquée saturée là 2 volumes.

Au sortir du picrocarmin les coupes doivent être portées dans le liquide lixateur suivant:

I. Double coloration. — A. Procédé recommandé. — 1° Traiterla coupe par la solution faible d'éosine (p. 227) jusqu'à ce qu'elle présente une coloration rose (environ trente secondes).

2° Laver dans l'eau distillée.

3° Traiter la coupe sur la lame, pendant vingt à trente secondes, par le krystall violet phéniqué; la coupe prend une teinte violette.

4° Remplacer la solution colorante par le liquide de Gram, qu'on laisse agir pendant environ trente secondes, en le renouvelant deux à trois fois, jusqu'à ce que la coupe ait pris une teinte noirâtre.

5° Traiter par l'alcool absolu (ou l'alcool absolu et l'huile d'aniline) jusqu'à ce que la teinte rose du fond ait reparu.

6° Éclaircir par l'essence de girofle et le xylol.

7o Monter dans le baume.

Le fond est rose, les microbes prenant le Gram restent seuls colorés en violet.

B. Procédé de Kùhne. — 1° Colorer la coupe pendant cinq à quinze minutes dans le bleu de Kùhne ou le bleu ammoniacal (p. 139 et 140).

2° Laver la coupe dans l'eau distillée.

3° Faire agir la solution de Gram pendant deux à trois minutes. 4° Laver à l'eau distillée.

5° Décolorer avec une solution saturée de fluorescéine dans l'alcool absolu.

6° Traiter par l'alcool absolu pur, l'essence de girofle et le xylol. 7° Monter dans le baume.

Les microbes sont violets ; le fond est à peine teinté par la fluorescéine.

II. Triple coloration. — A. Procédé recommandé. — 1° Traiter pendant environ cinq minutes par le picrocarmin de Orth.

2° Remplacer le picrocarmin par le liquide fixateur; laisser agir environ trente secondes.

3° Laver dans l'eau distillée.

4° Colorer pendant vingt à trente secondes par le krystall violet phéniqué.

5° Remplacer la solution colorante par le liquide de Gram, le laisser agir pendant environ trente secondes. 6° Décolorerpar l'alcool absolu ou l'alcool absolu et l'huile d'aniline.

Alcool absolu

Eau picriquôc saturée...

Acide chlorhydriquc pur,

70 centimètres cubes.

COUPES

7o Faire agir successivement l'alcool absolu teinté légèrement par l'acide picrique, l'essence de girofle et le xylol. 8° Monter dans le baume.

B. Procédé de Nicolle. — S'applique à la coloration des coupes livres sur la lame avec l'albumine de Mayer. .

1° Faire agir sur la coupe le carmin de Orth alcoolisé pendant quinze minutes.

2° Laver à l'eau distillée.

3° Faire agir le violet de gentiane pbéniqué(p. 139) pendant quatre à six secondes.

4° Remplacer le violet de gentiane par du Gram fort (p. 217) que l'on renouvelle deux fois pendant quatre à six secondes. 5° Décolorer par l'alcool-acétone au tiers (p. 217). 6° Faire agir quelques instants l'alcool absolu picriqué. 7° Éclaircir à l'essence de girofle et au xylol. 8° Monter dans le baume.

C. Procédé de Claudius. — 1° Fixer la coupe sur la lame avec l'albumine de Mayer.

2° Colorer pendant dix à quinze minutes avec le carmin de Orth alcoolisé.

3° Laver à l'eau distillée.

4° Colorer pendant deux minutes avec la solution aqueuse à 1 p. 100 de violet de méthyle 6B ou le violet de gentiane phéniqué.

b° Faire agir pendant deux minutes la solution picriquée (p. 146).

6° Enlever soigneusement la solution picriquée avec un morceau de papier lîltre et déposer sur la coupe une grosse goutte de chloroforme. Absorber le chloroforme avec du papier filtre, et le remplacer par une goutte d'essence de girofle; recommencer de même jusqu'à ce que la coupe ait pris une teinte rose.

7° Éclaircir au xylol, monter dans le baume.