TOXINE CHARBONNEUSE

Dans les milieux artificiels, la bactéridie transforme les albuminoïdes en ammoniaque (Perdrix) en même temps qu'il se produit, suivant Ivanoff, des acides volatils tels que l'acide formique (domine dans les cultures jeunes), l'acide acétique (domine dans les cultures anciennes), l'acide caproïque, et peut-être l'acide valérianique. Les matières amylacées et les sucres sont transformés en acides lactique et acétique, puis quand ces matières deviennent rares l'acide lactique est consommé à son tour, il en résulte de l'acide acétique qui finit lui-même par être transformé en anhydride carbonique (Mlle Napias). Enfin la bactéridie sécrète une toxine dont on n'a pu, jusqu'à présent, déterminer la nature exacte.

1. — Hankin prépare un bouillon d'extrait de Liebig à I p. 100, légèrement alcalinisé et stérilisé à l'autoclave, auquel il ajoute 10 à 50 p. 100 de fibrine fraîche, stérilisée elle-même pendant quinze minutes à 115°. Le milieu obtenu est ensemencé avec du sang virulent et maintenu pendant huit jours à 20°. On lé filtre alors sur une bougie Chamberland et on précipite le filtrat par le sulfate d'ammoniaque ; le précipité est recueilli sur un filtre et soumis à la dialyse dans un courant d'eau chauffée à 42<,-4[}°; quand le sulfate

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d'ammoniaque a complètement disparu, on verse le liquide dudialyseur dans dix l'ois son volume d'alcool fort pour précipiter l'albumose ; on lave à l'alcool absolu le précipité, on le dissout dans une petite quantité d'eau et on lillre sur amiante.

L'albumose ainsi obtenue injectée à des souris à très petites doses (1,5/1 000000e du poids de l'animal) leur conférait une certaine résistance contre la bactéridie. Chez les animaux sensibles au charbon, même à des doses de 500 à 700 fois plus fortes que la dose vaccinale, cette albumose ne produit aucun symptôme d'empoisonnement; au contraire, chez les animaux naturellement réfractaires elle agirait comme une toxine énergique (Ilankin et Wesbrook). Les conclusions de ce travail ont été critiquées par Petermann et par Marmier.

IL — Au moyen d'une technique très complexe, Brieger et Frànkel isolent des cadavres charbonneux une toxalbumine capable de produire dès symptômes d'intoxication chez différents animaux. De même, Sidney Martin, dans des solutions d'alcali-albumine, obtient une albumose qui, à la dose de 3 centigrammes, tue une souris de 22 grammes avec des symptômes analogues à ceux delà septicémie charbonneuse.

111. — Marinier obtient une toxine active en cultivant la bactéridie à basse température dans une solution de peptone pure glycérinée.

Milieu de Marinier. — Commencer par purifier la peptone du commerce. Pour cela, dissoudre dans l'eau une certaine quantité de cette peptone et ajouter à la dissolution assez de sulfate d'ammoniaque pour que la liqueur en soit saturée à 100°. Faire bouillir quelques minutes, puis filtrer. A la liqueur filtrée, ajouter une quantité d'hydrate de baryte suffisante pour précipiter tout l'acide sulfurique qu'elle contient en dissolution. Maintenir le mélange plusieurs heures à une température voisine de l'ébullition pour chasser l'ammoniaque ; filtrer pour se débarrasser du sulfate de baryte, porter le filtrat à l'ébullition en y faisant passer d'abord un courant d'air pour éliminer toute trace d'ammoniaque, puis un courant d'anhydride carbonique pour précipiter l'excès de baryte; filtrer. Avec la solution de peptone pure ainsi obtenue, on préparera le milieu suivant :

Eau 1 000 centimètres cubes.

Peptone 40 grammes.

Sel marin 15 —

Phosphate de soude 0sr,50

Phosphate de potasse 0sr,20

Glycérine pure 40 grammes.

Filtrer; répartir dans des ballons Pasteur de 250 centimètres cubes ; stériliser à 115°.

Ensemencer le milieu avec du charbon virulent, porter à 1 etuve à 37° pendant quarante-huit heures puis à 20° pendant quinze jours. On filtre alors là culture et on la sature de sulfate d'ammoniaque,

PROPRIÉTÉS RIOLOGIQUES.

à la température ordinaire; au bout de quinze heures environ le liquide est filtré sur papier et on lave le filtre avec une solution saturée de sulfate d'ammoniaque. Le précipité resté sur le filtre est traité par une quantité aussi petite que possible de glycérine ; au bout de deux jours, on décante, on remplace la glycérine par deja glycérine neuve et on décante de nouveau. Les liqueurs glycérinées sont réunies et mélangées à quatre fois leur poids d'alcool fort; le précipité jeté sur un filtre est lavé à l'alcool absolu, à l'éther, puis desséché dans le vide. On obtient une substance amorphe, pulvérulente, de couleur brun foncé, renfermant de petites quantités de sulfate d'ammoniaque, soluble dans l'eau distillée et dans l'eau phéniquéeà 1 p. 100 et ne présentant aucune des propriétés des matières albuminoïdes, des peptones, des para-peptones, ni des alcaloïdes.

Cette substance est douée de propriétés toxiques assez énergiques vis-à-vis du lapin; l'inoculation de faibles doses peut causer la mort de l'animal; la dose toxique varie pour chaque individu dans des proportions assez élastiques : certains lapins succombent à l'inoculation de 25 milligrammes (en solution aqueuse), d'autres exigent des doses de 120 et même 200 milligrammes.

Quelques heures après l'injection, on note une élévation notable de la température centrale ; pendant quelques jours, la température oscille largement, puis, si l'animal doit succomber, elle s'abaisse progressivement (jusqu'à 8° au-dessous de la normale) ; si l'animal se rétablit, au contraire, les oscillations de la température s'atténuent peu à peu. En même temps l'animal maigrit, se cachectise et peut perdre jusqu'à un tiers de son poids; on observe ordinairement de la diarrhée. Avant la mort, apparaît de la paraplégie, la respiration devient pénible, l'animal se couche sur le flanc et présente des convulsions et dos contractures.

Lamort survient plus ou moins longtemps après l'injection (du deuxième au quinzième et vingtième jour) suivant la dose de toxine inoculée.

Les cobayes, les souris, sont sensibles à la toxine. Contrairement à ce qu'avait vu Hankin, les animaux réfractaires au charbon paraissent presque indifférents à la toxine ; il en est de même des lapins immunisés par les cultures atténuées.

La toxine est atténuée, mais non complètement détruite, par le chauffage à 110" ; le contact des hypochlorites alcalins ou l'exposition à une insolation prolongée en présence de l'air la rendent inactive.

Les cultures charbonneuses dans d'autres milieux liquides (sérum de sang de bœuf, bouillons de bœuf, de veau, de cheval) contiennent peu de toxine. Marmier a pu extraire une toxine active des cultures récentes sur gélose: on racle des cultures de deux jours, les microbes sont mis à macérer dans de l'alcool à 20° additionné de quelques gouttes d'éther. Après vingt-quatre heures, on filtre et on précipite le filtrat par l'alcool absolu ; le précipité obtenu est lavé sur un filtre avec de l'alcool absolu puis de

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l'éthor ; enfin, on le dessèche dans le vido en présence de l'acide sulfuriqne. La substance pulvérulente pbtanue a lu menu; activité que celle que l'on retire des cultures eu eau peptouisée glycérinéc. Ce résultat indique que primitivement les toxines sont contenues dans le corps des microbes.