CHAPITRE II

LE VJBRION SEPTIQUE

Le Vibrion septique est le germe pathogène anaérobie le plus anciennement connu. En 1887, Pasteur fixait la morphologie et la biologie du Vibrion septique, en même temps qu'il décrivait sous le nom de septicémie expérimentale aiguë, la maladie qui succède à son introduction dans le tissu cellulaire sous-cutané des animaux de laboratoire ; Chauveau et Arloing ont montré que le vibrion de Pasteur est l'agent de la gangrène gazeuse foudroyante de l'homme (septicémie gangreneuse, érysipèïe bronze) ; Krannhals lui attribue la maladie des chiffonniers. Les auteurs allemands désignent le Vibrion septique sous le nom de Bacille de l'œdème malin.

La gangrène traumatique des animaux domestiques est également causée par le vibrion de Pasteur.

Le Vibrion septique est très répandu dans les milieux extérieurs ; il existe à l'état de spores dans la terre de jardin, de rue, dans la vase de différentes eaux, etc. Il se rencontre dans l'intestin : on l'a isolé des matières fécales de l'homme et des animaux ; après la mort, il passe de l'intestin dans le sang; cette invasion du sang est particulièrement rapide chez les animaux ayant succombé au charbon.

Article 1. — SEPTICÉMIE EXPÉRIMENTALE. S 1er. — ANIMAUX RÉCEPTIFS.

La plupart des animaux sont réceptifs au Vibrion septique.

Le cobaye et la souris sont d'une sensibilité extrême ; un millionième de goutte de sérosité septique suffit pour tuer un cobaye (Davaine).

Besson a montré que les passages en série par le cobaye exaltent la virulence du vibrioh; ou obtient rapidement Un virus exalté dont la culture en bouillon tue le cobaye et le lapin eu huit heures à des doses infé-

252 {M VIimiON SEPTIQUE.

Heures à 1/100° do goutte et le chat en douze à quinze heures, à la dose do l goutte.

Le lapin et le rat blanc viennent, immédiatement après dans l'échelle de réceptivité ; le mouton, la chèvre, le cheval, sont encore très sensibles; il en est de même du chat placé souvent à tort parmi les animaux peu réceptifs. L'âne, les petits oiseaux, la poule, le pigeon sont un peu moins sensibles, puis vient le chien et enfin le bœuf.

Le rat d'égout est à peu près réfractaire; il ne succombe qu'à l'inoculation de doses élevées d'un virus très actif, après avoir présenté une grosse lésion locale purulente.

Le Vibrion septique est un anaérobie strict; il ne se développe dans l'organisme qu'à la condition d'être inoculé profondément sous la peau, dans les muscles ou dans la cavité périlonéalc; il n'infecte pas les plaies superficielles (Chauveau et Arloing).

On peut conférer la septicémie aux animaux par plusieurs procédés:

I. Inoculation d'une culture ou de sérosité W œdème. — L'inoculation sous-cutanée est très sévère ; elle tue rapidement les animaux réceptifs, même avec des doses inférieures à 1 / 100e de centimètre cube.

II. Inoculation de spores pures. — Associations microbiennes. — Besson a montré que les spores pures du Vibrion septique injectées même à doses considérables (jusqu'à 4 à 5 millions de spores pour le cobaye et 14 millions pour le lapin) dans le tissu cellulaire sous-cutané des lapins et des cobayes ne se développent pas; elles sont rapidement englobées par les phagocytes et l'animal ne présente aucun autre symptôme qu'un petit nodule dur siégeant au lieu d'inoculation et disparaissant au bout de quelques jours.

On obtient aisément des spores pures en débarrassant les cultures de la toxine par le chauffage : une culture spondée en bouillon est aspirée dans un petit tube de verre que l'on ferme ensuite aux deux extrémités ; le tube est chauffé au bain-marie pendant trois heures à 80°; l'inoculation de grandes quantités de cette culture chauffée est inoffensive, mais les ensemencements en bouillon neuf donnent toujours lieu à une culture très virulente. Un procédé plus simple encore consiste à utiliser des cultures qui ont séjourné plusieurs mois à l'étuve à 37°; la toxine disparait dans ces cultures et on se trouve en présence de spores pures.

Mais il suffit d'ajouter à quelques spores pures une petite quantité d'une substance chimiotaxique négative pour que les phagocytes ne puissent plus accomplir leur rôle protecteur et pour que la septi-

SEPTICÉMIE EXPÉRIMENTALE.

cémie se manifeste; c'est ainsi que l'inoculation de quelques spores pures additionnées d'une gouttelette d'acide lactique entraîne fatalement la mort de l'animal ; on arrive au même résultat en ajoutant aux spores une petite quantité de toxine septique, qui est douée de propriétés chimiotaxiques négatives, ou en les protégeant mécaniquement contre les phagocytes en les plaçant dans un petit sac de papier filtre stérile, ou à l'intérieur d'un petit cube de gélose, qu'on introduit sous la peau d'un cobaye.

On arrive encore plus aisément à produire la septicémie par inoculation de spores débarrassées de toxine si on mélange à celles-ci une quantité inoffensive par elle-même de certains microbes dont les produits de sécrétion ont des propriétés chimiotaxiques négatives ; ces microbes favorisants sont très nombreux, on en trouve un grand nombre dans la terre; le Micrococcas prodigiosus, le Staphylocoque doré jouissent de cette propriété.

De même, les traumatismes produisant la mortification des tissus (brûlures, compressions vasculaires, etc.), entraînent le ralentissement de la phagocytose et favorisent le développement des spores.

111. Inoculation de terre contenant des spores. — L'inoculation souscutanée d'une trace de terre de rue ou de jardin entraine souvent la mort du cobaye et du lapin par septicémie. Le développement des spores contenues dans la terre est facilité par leur association aux microbes favorisants très nombreux dans le sol.

La septicémie de Pasteur présente la même évolution chez les différents animaux; elle est simplement plus ou moins rapide suivant les espèces. Nous décrirons comme type la maladie du cobaye.

Après inoculation d'une trace de culture virulente sous la peau de la cuisse ou de l'abdomen, il se produit très rapidement de l'œdème au point d'inoculation; au bout de quelques heures, l'animal se blottit dans un coin de la cage, il reste immobile et pousse des cris dès qu'on le saisit, sou poil se hérisse; bientôt apparaissent des secousses convulsives et la mort termine la scène souvent en moins de douze heures.

Quand le virus est très exalté, l'œdème est insignifiant, la marche de la septicémie se précipite, la mort arrive presque subitement après très peu d'heures de maladie.

A Yautopsie, on constate la plus ou moins grande extension de l'œdème au point d'inoculation; aux alentours, les muscles sont rouges, jambonnés, infiltrés de sérosité, le tissu conjonctif est dis-

254 LE VIBRION SEPTIQUE.

tendu par des bulles d'un ' gaz fétide et crépite sous le doigt.

Le cadavre entier dégage une odeur puante; la cavité péritonéale contient une sérosité plus ou moins abondante, à peine louche; le foie est décoloré, la rate est diffluente, les poumons ont l'aspect normal.

La sérosité de l'œdème contient le vibrion en abondance et ne renferme pas de leucocytes; la sérosité péritonéale examinée au microscope donne aussi l'apparence d'une culture pure de vibrions ; jamais ces vibrions ne sont sporulés pendant la vie de l'animal, mais les spores y apparaissent rapidement après la mort, surtout si on place le cadavre dans l'étuve à 35°.

Pendant la vie, on trouve très rarement le vibrion dans le sang de l'animal; mais il y passe assez rapidement après la mort ; on obtient des lamelles de sang riches en microbes en laissant le cadavre quelques heures à 35°.

Article 11. — CARACTÈRES MORPHOLOGIQUES.

§ 1er. ASPECT MICROSCOPIQUE.

Le Vibrion septique se présente sous la forme de bâtonnets lofigs de 3 à 15 |*, larges de 0,6 à 1 [>., plus fins que la Bactéridie charbonneuse, isolés ou réunis en chaînettes ; celles-ci sont surtout fréquentes dans le sang des cadavres conservés quelques heures à 37°; elles constituent alors des filaments atteignant jusqu'à 40 [x de longueur et composés de segments inégaux.

Les bâtonnets sont parfois droits, plus souvent flexueux, ondulés. Leurs extrémités sont coupées nettement, à peine arrondies aux angles ; leur aspect diffère entièrement de celui de la Bactéridie charbonneuse (ligne sinueuse à angles accusés).

Fig. 140. — Vibrion seplique (frottis avec la surface du foie d'un cobaye). — Tliionine pheniquée (Reich. Ob. 1/12 imm. ; Oc. II).

Le Vibrion septique est mobile, mais sa mobilité ne se manifeste qu'en l'absence de l'air ; aussi la recherchera-t-on au centre et non suTres"bords~dela préparation ; les bâtonnets sont animés d'un mou-

vement de reptation lent et ondulant, produit par des cils vibratiles situés de chaque côté du bâtonnet.

Dans le cadavre des animaux et dans les cultures se forment rapidement des spores ; la spore apparaît comme un point ovoïde brillant, réfringent, produisant un renflement, soit à la partie médiane, soit à une des extrémités des bâtonnets isolés.

Coloration. — Le Vibrion septique se colore aisément par les couleurs basiques d'aniline. Il prend le Gram, mais la réaction est inconstante si l'on ne prend pas certaines précautions : le colorant de choix est le violet de gentiane phéniqué et il doit rester cinq à dix minutes en contact avec la préparation avant l'action de la solution iodée. Le vibrion se colore très bien par la méthode de Claudius.

Les spores et les cils seront colorés par les méthodes exposées au chapitre ix (ir0 partie).

Conditions de culture. — Le vibrion de Pasteur est un anaérobie strict ; on ne peut le cultiver qu'en utilisant les méthodes décrites au chapilre vi (lre partie).

Le vibrion cultive à partir de -f- 15°; la température optima est 37° environ; nous avons encore obtenu des cultures abondantes à 41°.

Bouillon. — A 37°, apparition d'un trouble marqué vers la douzième ou vingtième heure; il se produit en abondance des gaz d'odeur infecte (anhydride carbonique et hydrogène mélangés à des hydrocarbures et des gaz sulfurés). Bientôt le bouillon s'éclaircit et il se forme un dépôt au fond du tube. Tant que le bouillon est trouble il renferme de nombreux bacilles qui sporulent à partir de la vingtième ou vingt-quatrième heure. Dans le dépôt il n'existe plus que des spores et des bacilles granuleux et désagrégés.

Milieux albumineux. — La culture se produit comme dans le bouillon, mais plus abondamment; le bouillon additionné de sang ou de liquide d'ascite, le bouillon Martin, le sérum pur ou étendu de son volume d'eau ou de bouillon, le jus de viande stérilisé par filtration sur la bougie Chamberland donnent de très riches cultures.

Le milieu suivant nous paraît donner les cultures les plus abondantes : à 500 grammes de viande maigre de bœuf, finement hachée, on ajoute 500 centimètres cubes d'eau distillée et une forte pincée de sel marin. On abandonne le tout au repos à la glacière pendant douze à vingt heures ; au bout de ce temps, on décante le liquide et on exprime le résidu à la presse à viande; le jus obtenu est additionné de solution normale de soude jusqu'à réaction alcaline faible, puis chauffé à 115° pendant cinq minutes. Au sortir de l'autoclave filtrer sur papier Chardin ; le liquide brun foncé

LE VIBRION SEPTKJUE.

obtenu est stérilisé à 112° pendant vingt minutes; il se forint; un Léger coagulum pendant la stérilisation, ce coagulum se dissout pendant la culture.

Gélatine. — Piqûre profonde.

— A 22°, le développement commence au bout de deux ou trois jours ; le long de la piqûre apparaissent de pelites sphères nuageuses qui confluent rapidement, formant une longue traînée blanchâtre ; dès ce moment, apparaissent des bulles de gaz qui fissurent la gélatine et la culture se propage irrégulièrement dans ces fissures, la liquéfaction survient très rapidement et s'étend à toute la gélatine.

Colonies isolées. — Dès le deuxième ou troisième jour, apparition à l'intérieur de la gélatine de petites taches nuageuses blan-

Fig. 141. — Culture de Vibrion septique dans Fig. 142. — Vibrion septique. — Colonie isola gélatine (D'après Frànkel et PfeifTer). lée dans la gélose (D'après Liborius).

châtres, à contours mal définis, qui liquéfient le milieu autour d'elles; il se forme des bulles de gaz.

Gélose. — Piqûre profonde. — A 37«, très rapidement il se développe une traînée blanchâtre nuageuse le long de la piqûre ; des bulles de gaz fragmentent la gélose et la culture envahit les fissures.

Pomme de terre. — Pas de culture apparente.

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES

Article III. — PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES.

§ -1er. VITALITÉ ET VIRULENCE.

Vitalité. — Les vibrions non sporuiés périssent facilement au contact de l'air ou par une exposition de quelques instants à une température de + 60°.

Les spores ne se forment qu'à l'abri de l'air, mais une fois formées, elles résistent très bien à l'action de l'oxygène. Les solutions antiseptiques usuelles sont à peu près sans action sur elles (Chauveau et Arloing). A l'état humide, elles supportent pendant plusieurs heures une température de 80° et résistent plus d'une demi-heure à 90° (Besson); desséchées dans les matières albuminoïdes, elles ne sont tuées par la chaleur humide qu'à des températures supérieures à 100°. D'après San Felice, elles ne sont pas atteintes par une exposition de cinquante heures à la lumière solaire ni par une dessiccation prolongée pendant plusieurs mois.

Virulence. — La spore fixe la -virulence du vibrion; cette virulence se maintient indéfiniment dans les cultures, mais pour la pratique des inoculations, il faut toujours rajeunir la culture, étant donné qu'aux doses ordinaires, les spores seules sont inactives et que la toxine s'altère par le vieillissement (Voy. p. 253). Faute de prendre cette précaution, on s'exposerait à conclure à une atténuation du germe, atténuation qui ne se produit pas en réalité.

Nous avons dit qu'il est aisé d'exalter la virulence du vibrion par les passages en série chez le cobaye.

Leclainche et Vallée ont montré que le procédé d'atténuation par la chaleur, imaginé par Arloing, Cornevin et Thomas pour le charbon symptomatique, est applicable au Vibrion septique. On recueille le sang d'un animal mort de septicémie, et on le porte cinq jours à l'étuve à 37° dans des ampoules scellées. Au bout de ce temps le contenu des ampoules est traité suivant le procédé d'Arloing (Voy. p. 268). La poudre obtenue constitue un virus atténué avec lequel on peut conférer aux animaux l'immunité contre la septicémie.

1. — Dès 1887, Roux et Chamberland ont étudié le poison que le vibrion produit dans les cultures et dans l'organisme vivant.

Après Tinoculation, le vibrion se multiplie et envahit rapidement la totalité de l'organisme : il ne faut donc pas s'attendre à ce que sa toxine ait la même activité que celle des microbes qui, comme les

Bessojt. — Techn. microb., 2e édit. 17