CHAPITRE III
LE BACILLE DU CHARBON SYMPTOMATIQUE
Le Bacille du charbon symptomalique, Bacillus Chauvœi, a été découvert par Arloing, Cornevin et Thomas.
Le charbon symptomatique, ou charbon bactérien, sévit sur les bovidés âgés de quatre ou cinq mois à quatre ote cinq ans ; pendant les premiers mois de la vie et après cinq ans les bovidés ne sont pas réceptifs. Le mouton et la chèvre sont rarement atteints; les autres animaux ne prennent pas le charbon symptomatique spontané.
Le virus se conserve dans le sol, il s'inocule au bœuf par la peau, la trachée et probablement les voies digestives (Arloing). L'épizootie sévit de préférence en été et dans certaines régions : Velay, Auvergne, Pyrénées, Haute-Marne, Suisse, etc.; presque toujours mortelle, elle cause de grands ravages dans les troupeaux.
Le charbon symptomatique a les allures d'une septicémie; l'animal a de la fièvre, de l'inappétence, il ne rumine plus, est triste, puis apparaissent une ou plusieurs tumeurs sur les membres, dans l'auge, à la gorge, sur le thorax, aux testicules ; le plus souvent la tumeur siège dans les muscles, elle progresse rapidement, devient énorme, sonore, crépitante au centre ; d'abord douloureuse, elle devient indolore ; l'œdème périphérique s'accroît et l'animal meurt après trois à cinq jours de maladie.
Article I. — CHARBON SYMPTOMATIQUE EXPÉRIMENTAL. § 1er. ANIMAUX RÉCEPTIFS.
Le cobaye, le bœuf, le mouton sont très réceptifs, la chèvre est moins sensible. L'âne et le cheval présentent un œdème douloureux au point d'inoculation, mais guérissent rapidement.
Le lapin est réfractaire, mais son immunité peut être vaincue aisément (Roger).
Il suffit d'inoculer en môme temps que le bacille un peu d'acide lactique ou d'une culture de Micrococcus prodigiosus, ou encore de traumatiser fortement le lieu de l'injection, pour vaincre la résistance des tissus de l'organisme, entraver la phagocytose et voir se développer la septicémie. Leclainche et Vallée ont obtenu des cultures très virulentes dont l'injection sous-cutanée tue le lapin à la dose de 3 centimètres cubes.
CHARBON SYMPTOMATIQUE EXPÉRIMENTAL. 263 La souris, le rat, le chien, le chat, le porc, les oiseaux sont réfractaires (1).
Le Bacille de Chauveau étant strictement anaérobie, comme le Vibrion septique, ne se développe qu'à la condition d'être inoculé profondément dans les tissus; il n'infecte pas les plaies superficielles.
L'influence du lieu d'inoculation est grande. Une dose de virus dont l'injection dans le tissu cellulaire du corps tue le bœuf, confère à cet animal une maladie bénigne si elle est inoculée dans le tissu conjonctif du toupillon; mais dans ce dernier cas, si on réchauffe la partie inoculée, le bacille se développe et la mort peut survenir.
L'influence de la température est encore prouvée par ce fait que la grenouille, dans les conditions normales, résiste au bacille, tandis qu'elle succombe au charbon si, après l'inoculation, on la place clans l'étuvo à 25°.
L'inoculation d'un virus actif dans les veines du bœuf produit simplement un mouvement fébrile de peu de durée, mais si, pendant l'inoculation, une trace de virus tombe dans les tissus péri veineux, le charbon éclate et se termine par la mort. On peut aussi amener le développement de l'infection en produisant une rupture vasculaire après l'injection intraveineuse (Arloing). On peut conférer le charbon symptomatique par divers procédés : t. Inoculation d'une culture. — Ce moyen, peu sûr avec les cultures ordinaires, confère aisément le charbon si l'on s'adresse à une culture jeune en bouillon de Martin (Voy. p. 31), dont 3 ou 4 gouttes inoculées sous la peau tuent un cobaye de 500 grammes en dix-huit ou vingt-quatre heures (Leclainche et Vallée).
II. Inoculation du sany charbonneux. — On prélève du sang dans le cœur d'un cobaye ou d'un mouton récemment morts du charbon ; ce sang, enfermé dans des ampoules scellées, est placé quarante-huit heures à l'étuve; il peut alors être inoculé.
III. Inoculation de sérosité. — Procédé recommandé. ■. — Le suc de la tumeur peut être inoculé à l'état frais ; pour cela on broyé un fragment de tumeur avec de l'eau stérile et on injecte le liquide obtenu. On peut utiliser le suc desséché, poudre d'Arloing, dont nous
(1) On a parfois essayé de confondre le Vibrion septique et le B. C/iauviri; celle confusion ne saurait plus cire admise aujourd'hui. Outre les nombreuses différences que nous signalerons entre les deux microbes, nous ferons remarquer dès à présent que tous les animaux que nous venons d'énumérer comme réfractaires au charbon symptomatiqu» sont réceptifs pour le Vibrion septique.
264 LE BACILLE DU CHARBON SYMPTOMATIQUE
indiquerons plus loin la préparation; dans ce cas on ajoute une trace d'acide lactique à un peu de poudre broyée et délayée dans quelques gouttes d'eau stérile.
IV. Inoculation de spores pures. — En appliquant des procédés analogues à ceux que nous avons décrits à propos du Vibrion septique, Leclaincbe et Vallée ont montré que l'inoculation de spores pures, dépourvues de toxine, n'entraîne pas la mort des animaux d'expérience ; mais, comme celles du Vibrion, les spores germent et tuent l'animal inoculé si elles sont protégées contre les phagocytes ; certaines substances, certaines bactéries (Staphylocoque doré, etc.) jouent le rôle de favorisants et permettent la germination des spores et l'infection.
§ 3. — sympVômes et lésions.
Nous prendrons comme type la maladie expérimentale du cobaye.
Après inoculation dans les muscles de la cuisse on voit bientôt se produire un gonflement douloureux, on assiste au développement d'une tumeur charbonneuse caractéristique entourée d'une zone d'infiltration œdémateuse qui s'étend rapidement à la paroi abdominale. L'animal se met en boule, reste immobile, ses poils sont ternes, hérissés, s'arrachent facilement sur les régions œdématiées, il pousse des cris quand on veut le saisir. La mort survient dans les deux ou trois jours qui suivent l'inoculation.
A Yautopsie on ne constate guère que des lésions locales. Au point inoculé s'est développée la tumeur : le tissu conjonctif est infiltré par une sérosité rosée, riche en globules rouges ; les muscles présentent une coloration jaunâtre ou rouge sombre, leurs fibres sont altérées, vitreuses, dissociées; le centre de la tumeur est noir, sanieux et renferme des bulles de gaz. Les lésions exhalent une odeur spéciale, comparée par Arloing à celle du beurre rance ; le bacille y abonde. Autour de la tumeur l'œdème s'étend plus ou moins loin et envahit les parois abdominales et thoraciques ; la sérosité de l'œdème est riche en bacilles mais ne renferme pas de leucocytes. Les ganglions de l'aine sont tuméfiés et œdématiés. Dans la cavité péritonéale on trouve une petite quantité d'une sérosité àpeinelouche contenant de nombreux bacilles; l'intestin est fréquemment congestionné. L'aspect du sang est peu modifié : pendant la vie, le microscope n'y décèle pas de bacilles; après la mort ceux-ci apparaissent, mais sont toujours peu nombreux môme après séjour du sang à l'étuve à 37°.
Article II. — CARACTÈRES MORPHOLOGIQUES.
§ - ASPECT MICROSCOPIQUE
Le Bacillus Chauvœi se présente sous la forme de bâtonnets longs de 3 à 8 (j., larges de 1 ^ environ, isolés ou réunis par deux. On ne trouve jamais, ni dans les cultures, ni dans l'organisme, les longues chaînettes que nous avons décrites chez le Vibrion septique ; ce dernier microbe est beaucoup plus fin, plus flexueux et plus long que le B. Chauvœi qui est droit et rigide. Les extrémités du B. Chauvœi sont coupées nettes, carrément. 11 est mobile, moins cependant que le Vibrion ; s'a mobilité ne se manifeste qu'en l'absence de l'air, au centre de la préparation.
Dans les tumeurs musculaires il se forme rapidement des spores; elles peuvent cependant manquer quand l'animal est mort très rapidement.
La spore se présente comme un point ovoïde, réfringent, ne prenant pas les couleurs d'aniline en solution aqueuse à B. ... «. . , .. ., „.
^ Fig. 143. — Charbon symptomatique. — Frottis
froid; elle siège Soit à Une de muscle. Fuchsine de Ziehl diluée (.Rcich. ;
extrémité, soit au centre du 0bJ- Oc. il).
luUonnet, donnant des formes
en raquette et en battant de cloche. — La sérosité œdémateuse qui entoure les tumeurs ne contient pas d'ordinaire de spores; on n'en rencontre jamais dans les épanchements des séreuses. Dans les cultures, enfin, se trouvent des bacilles et des spores.
Les dimensions relativement grandes du bacille rendent aisé son examen sans coloration.
Coloration. — Le B. Chauvœi se colore facilement par les couleurs basiques d'aniline en solutions mordancées. Il se colore par la méthode de Gram ; comme pour le Vibrion septique, l'opération ne réussit que si l'on fait agir énergiquementla solution colorante avant le contact avec la liqueur iodée. Il se colore également par la méthode de Claudius.
Les spores se colorent par les procédés ordinaires (Voy. p. 148).
-b0 LE BACILLE DU CHARBON SYMI'TOMATIQUE.
a. Cultures. — Employer de préférence le krystall violet phéniqué ou la fuchsine de Ziehl diluée.
b. Frottis. — Les préparer avec des parcelles de la tumeur ou étendre sur les lamelles de la sérosité œdémateuse ou péritonéale, ou frotter légèrement les lamelles sur la surface du foie d'un cobaye mort du charbon. Colorer comme il est dit plus haut (krystall violet, méthodes de Gram et de Claudius).
c. Coupes. — Porteront sur la tumeur charbonneuse et seront traitées de préférence par le bleu phéniqué de Kùhne ou la double coloration de Gram.
Remarque. — Dans les cadavres charbonneux il se produit rapidement une invasion du Vibrion septique contenu normalement dans l'intestin : le vibrion se distingue du Bacille de Chauveau par sa forme allongée.
g 2. — CARACTÈRES DES CULTURES.
Conditions de culture. — Le B. Chauvœi est un anaérobie strict; on le cultive suivant lés méthodes exposées précédemment. Les milieux ordinaires donnent des cultures grêles. Le bouillon ordinaire convient mal ; on a proposé de l'additionner de glycérine (4 p. 100), de glucose (1 p. 100), de sulfate de fer (1 p. 100), etc. : ces additions n'ont aucun avantage (Kitasato). Leclainche et Vallée ont obtenu des résultats excellents en employant le bouillon de Martin. Les cultures donnent un abondant dégagement de gaz (H, CO2, CHn) avec odeur butyrique spéciale. Le développement commence à partir de H- 15° ; la température optima est aux environs de 37°.
Pour la recherche du bacille les cultures sont ensemencées avec un peu de suc de la tumeur, de sérosité péritonéale, ou de sang du cœur.
Impuretés des cultures. — Il est assez difficile d'obtenir des cultures pures du B. Chauvœi. Dans la pulpe des tumeurs, le bacille est presque toujours associé à des microbes étrangers (aérobies facultatifs, Vibrion septique). Au laboratoire on conserve la virulence du bacille par des passages de cobaye à cobaye : l'infection symptomatique favorise à un haut degré l'infection par le Vibrion septique et après quelques passages 1rs animaux ineurent septiques et charbonneux. Aussi de temps en temps faut-il vérifier la culture par l'examen microscopique et en inoculant simultanément un lapin et un cobaye. Si le cobaye seul est tué, le virus est pur et on ensemence 4 ou 5 gouttes du sang du cœur aussitôt après la mort : on obtient ainsi une culture dont on est sûr.
Bouillon. — Préférablement au bouillon ordinaire on emploiera le bouillon de Martin. A 37° un trouble général apparaît vers la vingtième heure ; il se dégage des gaz en abondance. Au bout de deux ou trois jours il se forme des flocons qui précipitent et le bouillon s'éclaircit peu à peu.
PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES
Milieux albumineux. — La culture est plus abondante et conserve plus longtemps sa virulence que dans le bouillon. On peut employer le sérum pur ou coupé de 2 à 3 parties d'eau stérile, ou le jus de viande dont nous avons indiqué la préparation à propos du Vibrion septique.
Gélatine. — Piqûre profonde. — A 20° il se développe lentement le long de la piqûre de petites sphères irrégulières qui émettent des prolongements radiés ; quand elles commencent à confluer, la gélatine est disloquée par les gaz ; la culture s'étend irrégulièrement et liquéfie la gélatine.
Colonies isolées. — A l'intérieur de la gélatine apparaissent de petites sphères blanchâtres émettant des prolongements radiés, puis devenant nuageuses, irrégulières et liquéfiant le milieu avec production de gaz.
Gélose. — Piqûre profonde. — A 37° développement rapide d'une ligne blanchâtre, nuageuse le long de la piqûre, puis fragmentation de la gélose par les gaz et envahissement des crevasses par la culture.
Pomme de terre. — Pas de culture apparente.
Article Ht. — PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES.
§ 1«. VITALITÉ ET YIRULENCE.
Le B. Chauvœi a une vitalité considérable; grâce à ses spores, il résiste aux causes ordinaires de destruction des microbes. Dans la sérosité musculaire desséchée le bacille sporulé n'est tué que par une exposition de plusieurs heures à 110° (chaleur humide). Les solutions antiseptiques usuelles, la putréfaction sont sans action sur les spores.
La virulence du bacille disparait assez rapidement dans les cultures : on ne peut plus tuer le cobaye après cinq ou six passages en bouillon; les agents physiques détruisent facilement la virulence des cultures; celles-ci deviennent inactives après une exposition à 100° pendant deux minutes; les cultures en sérum résistent mieux que celles en bouillon.
Dans la sérosité des tumeurs desséchée, au contraire, la virulence persiste aussi énergiquement que la vitalité. Cette sérosité desséchée à 35<> reste active pendant des années et peut supporter des températures élevées pendant plusieurs heures; nous reviendrons sur ces faits à propos des vaccinations.
Dans l'organisme vivant le bacille est susceptible de conserver longtemps son activité: une grenouille inoculée et restée indemne, prend le charbon symptomatique si on la met à l'étuve à 25°, quinze et même vingt jours après l'inoculation (Arloing).
LE BACILLE OU CIIAKBON SYMPTOMATIQUE
Le charbon sympfoinatique ne récidive pas : une atteinte non mortelle confère l'immunité.
I. — L'injection de virus dans le système veineux, inoflensive si elle est faite correctement, rend les animaux réfractaires, mais les diflicultés et les dangers inhérents à cette méthode en interdisent l'emploi comme procédé pratique de vaccination.
II. — Nous avons appris que l'inoculation au toupillon présente peu de dangers; ce^te particularité, jointe à la découverte des virus atténués, a permis à Arloing, Cornevin et Thomas de créer la vaccination anticharbonneuse. Le virus atténué est obtenu en exposant à l'action de la chaleur la sérosité musculaire desséchée ; voici la technique de la préparation :
Les muscles malades d'un bœuf ou d'un mouton morts de charbon symptomatique sont hachés finement et additionnés des deux tiers de leur poids d'eau stérilisée. On broie le tout au mortier puis on passe sur une toile propre.
Le suc musculaire obtenu est étalé sur des plateaux de porcelaine et exposé, jusqu'à dessiccation complète, à l'étuve sèche à 35°. L'extrait sec obtenu est passé au moulin à poivre, puis au mortier jusqu'à réduction en poudre très fine. On obtient ainsi un produit très-virulent pouvant garder son activité pendant des années.
Pour l'atténuation on mélange avec 2 parties d'eau stérile un lot de la poudre obtenue, on étale !le mélange en couche mince et on le chauffe lentement jusqu'à 100°-105°; on le maintient cinq à six heures à cette température. Tel est le premier vaccin dont l'inoculation ne produit plus d'effets nuisibles.
Le second lot de la poudre virulente est également humecté et maintenu pendant cinq à six heures à 90°-94° seulement. 11 fournit le deuxième vaccin beaucoup plus actif que le premier et qu'il pourrait être dangereux d'injecter de prinie abord.
Pour pratiquer la vaccination on broie finement au mortier une petite quantité de premier vaccin, puis on y ajoute quelques gouttes d'eau stérile, on passe le mélange sur un linge fin préalablemenl bouilli et on injecte le produit obtenu au toupillon ou à la pointe de l'oreille. Au bout de quelques jours on renforce l'immunité en inoculant de même le deuxième vaccin.
L'immunité obtenue est très solide, les accidents sont rares; si la réaction est trop violente, ce qui n'arrive pas quand l'inoculation a été bien faite, on coupe la queue de ranimai, supprimant ainsi Le foyer d'infection. Aujourd'hui ce procédé de vaccination est très répandu en France et en Suisse.
Les poudres vaccinales d' Arloing reprennent toute leur virulence par
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l'addition d'un peu d'acide lactique : l'acide cause un petit foyer de nécrose, entrave la résistance des phagocytes et permet le développement du' forme. L'alcool, le traumatisme, certaines toxines microbiennes agissent de même. D'ailleurs, dans les poudres d'Arloing, le germe n'a pas subi une atténuation à proprement dire ; le virus est modifié en ce sens que sa germination est retardée et que l'organisme a le temps de se défendre contre lui par la phagocytose : la preuve en est fournie par ce fait que l'ensemencement d'un peu de poudre donne une culture virulente.
Les poudres d'Arloing contiennent de nombreuses impuretés : les microbes étrangers abondent dans la tumeur, ce sont eux qui causent les très rares accidents observés au cours des vaccinations. Léclainche et Vallée ont indiqué un procédé permettant d'obtenir le vaccin pur nécessaire pour les recherches de laboratoire :
Recueillir le sang du coèur d'un cobaye ou d'un mouton mort du charbon symptomatique ; l'enfermer dans des ampoules scellées et porter celles-ci pendant quarante-huit heures à l'étuve à 37°; étendre alors leur contenu en couche mince dans des boîtes de Pétri stériles et les placer quelques heures à l'étuve à 37° jusqu'à dessiccation complète. Le sang desséché est broyé, réduit en poudre et trituré avec un volume d'eau; la pâte obtenue est étalée en couche mince sur des plaques de verre qui sont chauffées à l'air chaud, les unes pendant sept heures à 102° [premier vaccin), les autres pendant sept heures à 92° [deuxième vaccin). Les vaccins sont pulvérisés, conservés en tubes stériles et utilisés comme les poudres d'Arloing.
Remarque. — Les vaccins purs se comportent comme les spores pures, ils sont dépourvus de toxine, ne tuent pas les animaux (doses modérées), néanmoins ils vaccinent, tandis que les cultures chauffées à 80° pendant trois heures (spores pures) ne vaccinent pas. Dans ce dernier cas les spores sont détruites par les phagocytes, immédiatement après l'injection; avec le vaccin, au contraire, l'état physique de la matière inoculée retarde un peu la phagocytose, la destruction des spores est assez retardée pour qu'une élaboration vaccinale se produise.
lll. — Kilasato, Kitt,ont signalé que les cultures en bouillon âgées de plus de quinze jours ne tuent pas le cobaye et lui confèrent l'immunité; les cultures virulentes chauffées à 80° pendant trente minutes agissent semblablement ; les mêmes cultures chauffées à 80° pendant trois heures ne vaccinent pas.
Léclainche et Vallée ont montré que les cultures virulentes chauffées à 70° pendant deux heures ne tuent plus le cobaye jeune, mais restent actives pour le cobaye adulte; i centimètre cube dune culture ainsi traitée confère au jeune cobaye une immunité solide; 2 centimètres cubes injectés en arrière de l'épaule donnent aux bovidés des troubles insignifiants et une immunité solide ; une deuxième injection faite au bout de sept jours complète la vaccination.
Sur ces faits Léclainche et Vallée ont basé un mode, de vaccination dont voici la technique :
LE BACILLE DU CHARBON SYMPTOMATIQUE
Faire des cultures pures en bouillon de Martin; au bout de cinq à huit jours les répartir dans des ampoules de verre scellées qui sont portées pendant deux heures au bain-marie à 70°; on obtient ainsi le premier vaccin. Le deuxième vaccin est fourni par la culture même, non chauffée, répartie en ampoules scellées. Ce procédé supprime toute manipulation des vaccins pulvérulents et, il donne un produit dont le dosage est facile.
Remarque. — Les animaux vaccinés contre le charbon symptomatique avec des vaccins purs ne présentent jamais d'immunité vis-à-vis du Vibrion sep tique (1) (Leclainche et Vallée).
I. — Roux a constaté que les cultures en bouillon stérilisées par filtration sur porcelaine ou chauffage à H 5<> renferment des produits solubles peu toxiques, doués de propriétés vaccinales. En injectant à des cobayes par trois fois et à deux jours d'intervalle des doses de 40 centimètres cubes de cultures stérilisées, Roux a conféré l'immunité à ces animaux.
II. — Leclainche et Vallée ont repris l'étude de la toxine symptomatique. En bouillon de Martin, le Bacille de Chauveau donne une toxine très active ; le maximum de toxicité de la culture est atteint vers le cinquième jour, puis décroît. Les cultures simplement décantées tuent les animaux avec une rapidité telle que le bacille n'a pas le temps de se développer : l'injection dans les hémisphères cérébraux de 3 à 4 gouttes d'une telle culture tue le cobaye en quelques heures; 2 à 5 centimètres cubes injectés dans la veine auriculaire tuent le lapin en un temps qui varie de cinq minutes à cinq heures; un cheval a succombé en six minutes à l'injection de 10 centimètres cubes dans la jugulaire.
La toxine est altérée par l'air ; une large aération la détruit en quarantehuit heures. Elle n'est pas détruite par le chauffage à 115°; le chauffage à 70°-75° modifie ses propriétés chimiotaxiques qui, de négatives, deviennent positives.
Les filtres retiennent une grande partie du poison; cependant la culture filtrée peut encore tuer les animaux d'expérience : le cobaye succombe en quelques heures à l'inoculation intrapéritonéale de 5 centimètres cubes; avec des doses plus faibles l'intoxication évolue en sept à neuf jours et l'animal meurt de cachexie.
(1) Roux et Chambeiland avaient vu les cobayes rendus réfraclaires au charbon résister souvent au Vibrion septique. Duensclimann, ayant obtenu un sérum actif contre le charbon, le vit neutraliser des doses mortelles de Vibrion septique. Ces résultats étaient dus à l'impureté des cultures vaccinales employées par les auteurs : ils immunisaient à la fois contre les deux affections.
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§ 4. — SÉROTHÉRAPIE.
[. — Kitt fait les premiers essais de sérothérapie du charbon symptomatique. 11 s'adresse au mouton et au cheval ; ces animaux reçoivent d'abord dans une veine, puis sous la peau, du virus symptomatique; leur sérum, injecté souslapeau àla dose de 5à 10 centimètres cubes, préserve le mouton contre l'inoculation virulente pratiquée trois à huit jours plus tard.
II. — Duenschmann renforce la résistance naturelle du lapin par des doses croissantes de virus symptomatique; il obtient ainsi un sérum antitoxique et préventif pour le cobaye, quand il est administré isolément, avant ou en même temps que le virus, ou bien encore mélangé à ce dernier. Ce sérum est dépourvu de pouvoir curatif.
m. Arloing constate des propriétés préventives, curatives et antitoxiques dans le sang d'une génisse immunisée, préparée pendant six mois par l'inoculation de doses croissantes de virus, et ayant résisté à des inoculations de très fortes quantités de suc charbonneux dans le sang et le tissu conjonctif.
Le sérum d' Arloing neutralise in vitro le double de son poids de. virus actif frais, le mélange peut être impunément inoculé au mouton.
Introduit isolément dans le tissu conjonctif à la dose de 10 centimètres cubes, il préserve un mouton de 30 kilos contre l'inoculation d'une dose mortelle de virus Irais inoculée en même temps en un autre point de l'organisme; injecté dans une veine, il donne le même résultat à une dose dix fois plus petite.
L'immunité créée par le sérum est éphémère : présente encore au quatrième jour, elle a toujours disparu le huitième jour ; elle est transformée en une immunité active beaucoup plus durable si on fait suivre l'injection de sérum de l'inoculation d'une dose ordinairement mortelle de virus frais.
L'injection du mélange sérum-virus, bien supportée parles animaux, est impuissante à conférer une immunité appréciable; les animaux ainsi traités résistent un peu plus longtemps que les animaux témoins à l'inoculation d'épreuve, mais finissent par succomber.
L'injection sous-cutanée d'une dose de sérum largement préventive arrête la marche d'une inoculation mortelle si elle est pratiquée moins de trois heures après cette dernière ; par voie sanguine, la même dose est curative neuf heures après l'infection et inefficace au bout de douze heures.
Les propriétés du sérum semblent se conserver intactes quand on dessèche celui-ci rapidement, à l'air libre, en couche mince et à la température de 38°.
IV. — Leclainche et Vallée obtiennent un sérum actif en immunisant la chèvre et le cheval.
LE HACILLE DU CHARBON SYMPTOMATIQUE
a. Chèvre. — L'aninuil reçoit une inoculation intraveineuse virulente, puis, h dix jours d'intervalle, des inoculations sous-cutanées de 5, 10 et \h centimètres cubes d(! macérations filtrées, préparées en broyant parties égales d'eau et de muscles de cobayes infectés.
Dès la deuxième inoculation sous-cutanée, le sérum de la chèvre traitée, injecté à la dose de 1 à h centimètres cubes, préserve le cobaye contre l'inoculation de 1/2 centimètre cube de macération virulente, à la condition que l'inoculation d'épreuve soit pratiquée un à trois jours après l'injection de sérum.
Le mélange de sérum et de virus est inoffensif.
L'injecLion de sérum faite en môme temps que l'inoculation virulente, mais en un point différent, ne protège pas le cobaye; il en est de même quand le sérum est inoculé après le virus.
b. Cheval. — L'animal est préparé par des injections intraveineuses de 10 à 135 centimètres cubes de culture en bouillon de Martin. Sou sérum, à la dose de 1 à 5 centimètres cubes, immunise le cobaye contre l'injection d'une goutte de jus virulent; l'état réfractaire ne parait que douze heures après l'injection du sérum ; lïmmunité est peu durable (huit jours au plus).
Le mélange de 3 centimètres cubes de sérum avec 5 gouttes de culture est inoffensif; les cobayes ayant reçu ce mélange ne présentent qu'une immunité passagère (dix jours au plus). Le sérum n'a aucun effet thérapeutique chez le cobaye.
Agglutination. — Les sérums de Leclainche et Vallée uni un pouvoir agglutinant compris entre 1/30 et 1/6 000. Le sérum de la vache atteinte du charbon symptomatique a un pouvoir agglutinant d'environ 1/300.
Le sérum des animaux sains n'agglutine le Bacille de Chauveau qu'à des dilutions inférieures à J /12.
Le sérum antisymptomatique n'agglutine pas le Vibrion septique aux dilutions inférieures à 1/12 ; de même le sérum antigangreneux est sans action sur le Bacille du charbon symptomatique. Ces sérums exercent une action rigoureusement spécifique (Leclainche et Vallée).
