CUL

Conditions de culture. —

Les staphylocoques cultivent entre -h 15° et 44°, sur tous les milieux de culture, à l'abri ou en présence

Fig. 152. — Staphylocuccus pyoyenes aureus Fig. 133. — Stapkylococcus pyogenes (culture en bouillon). — Krystal! violet phé- aureus, piqûre profonde en gélatine, niqué (Reich. ; Obj. 1/12 imm.; Oc. III).

de l'air. La température optima est au voisinage de 35° -37°; la tem pérature la plus favorable à la production des pigments est compriseentre 20° et 25°; la matière colorante ne se produit pas dans le vide.

STAPHYLOCOCCUS PYOGENES AUREUS.

Bouillon. — A 37°, trouble en douze à vingt-quatre heures, puis précipité blanc abondant, le bouillon restant trouble ; par la suite, le précipité prend une teinte jaunâtre qui peut aller jusqu'à l'orangé vif; la coloration se manifeste parfois tardivement et reste peu marquée. Dans les vieilles cultures, le Staphylocoque doré perd souvent la propriété de fabriquer du pigment et devient identique au Staphylocoque blanc.

Gélatine - Piqûre. - A 20°, en vingt-quatre à trente-six heures, apparition d'une culture granuleuse le long de la piqûre; vers le cinquième jour, il se forme un entonnoir de liquéfaction, plein de Itquide Subie et au fond duquel se dépose un précité blancjaunatre -^entonnoir de liquéfaction s'élargit ensuite, atteint les bords du tube et prend peu à peu la forme d'un cylindre; il est rare que la liquéfaction atteignele fond du tube. Il existe des variétés de Staphylocoque dore pour lesquelles La liquéfaction est beaucoup plus tardive ; nous avons possédé une de ces variétés, présentant d'ailleurs tous les caractères du Staphylocoque doré et qui ne commençait à liquéfier que vers le quinzième jour à 20°; la liquéfaction restait minime.

Colonies isolées. — Au bout de deux à quatre jours à 20°, petites colonies régulièrement arrondies, grisâtres, avec le centre jaune ; bientôt, autour de ces colonies, se produit une liquéfaction annulaire ; la zone liquéfiée

pig. |54. Staphylococcits pyogenes aureus. — Cultures sur Fig. 1S5. — Staphylocoque

plaques de gélatine. — 1, colonie de quarante- huit heures: doré. — Culture sur 2, colonie de cinq jours. gélose au huitième jour.

s'étend plus ou moins rapidement; dans le liquide trouble nagent des flocons jaunes.

Gélose. — Sérum solidifié. — A 37°, le long de la strie d'inoculation apparaissent en vingt-quatre heures de nombreuses colonies blanches arrondies qui confluent rapidement pour former une large bande plus ou moins lisse et humide; bientôt la strie prend une coloration allant du jaune sale au jaune orangé vif ; parfois la coloration ne se montre que vers le huitième ou dixième jour.

Pomme de terre. — C'est sur ce milieu que le Staphylocoque doré donne la coloration la plus intense. Vers le deuxième ou quatrième jour à 37°, il se produit une couche épaisse d'un jaune plus ou moins vif.

Lait. — Le Staphylocoque pousse en coagulant rapidement le lait.

LES STAPHYLOCOQUES PYOGENES.

STAPHYLOCOCCUS PYOGENES ALBUS.

Mêmes caractères que lo précédent, mais les cultures restent toujours blanches; sur gélose, la teinte est d'un blanc mat, porcelani-

que; la liquéfaction de l& gélatine est souvent plus lente qu'avec le Staphylococcus aureus.

STAPHYLOCOCCUS PYOGENES CITREUS.

Mêmes caractères que le Staphylococcus aureus, sauf la teinte des cultures qui estjaunecitron.

Article 111. — PROPRIÉTÉS RIOLOGIQUES.

§ 1er. — VITALITÉ. — VIRULENCE.

Vitalité. — Les staphylocoques ne forment pas de spores; néanmoins, ils conservent fort longtemps leur vitalité dans les cultures : dans le bouillon, on les retrouve vivants après douze et seize mois.

Dans les cultures, les staphylocoques résistent mal à l'action de la chaleur ; ils sont tués par une exposition de vingt-quatre heures à 55° ou de quinze minutesà 80°. Desséchés dans le pus, les substances albuminoïdes, ils résistent plusieurs minutes dans la vapeur d'eau à 100°.

Très sensibles aux antiseptiques quand ils sont pris dans les cultures, les staphylocoques sont beaucoup plus résistants quand ils se trouvent mélangés à des matières albuminoïdes desséchées.

Virulence. — La virulence des staphylocoques est soumise à des variations que rien ne peut permettre de prévoir. En règle, cette virulence baisse notablement dans les cultures anciennes ; pour la conserver, il importe de faire fréquemment des réensemencements et, de temps en temps, des passages par le lapin; les inoculations en série dans le péritoine des lapins exaltent la virulence. Le staphylocoque recueilli dans les milieux extérieurs se montre

Fig. 150 — Staphylococcus albus. — Strie sur gélose au huitième jour.

Fig. 157. — Staphylococcus citreus. — Strie sur gélose au huitième jour.

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES. 299

souvent inactif; parfois même le staphylocoque que l'on vient d'isoler d'un foyer purulent chez l'homme est absolument dépourvu de virulence vis-à-vis des animaux de laboratoire.

La présence de glucose dans les milieux de culture exalte la virulence des staphylocoques (Budjwid, Nicolas).

Le Staphylocoque, dans les cultures, produit des acides gras aux dépens des matières sucrées ; il transforme le lactose en acide lactique, et, dans certaines conditions, produit des acides acétique, valérianique, butyrique et propionique ; aussi les cultures présentent-elles rapidement une odeur aigre.

D'autre part, le Staphylocoque produit de petites quantités d'indol et des diastases liquéfiant la gélatine et peptonisant le blanc d'œuf.

Enfin les cultures contiennent des toxines.

I. — Christmas filtre sur la bougie Chamberland une culture de Staphylocoque doré en bouillon, puis il précipite le filtrat par 4 ou 5 volumes d'alcool fort. Le précipité est jeté sur un filtre de papier, lavé à l'alcool, puis repris par l'eau. La solution obtenue a des propriétés phlogogènes peu marquées : injectée dans la chambre antérieure de l'œil du lapin, elle produit une suppuration minime.

IL — Leber extrait des cultures une substance soluble dans l'alcool, cristallisable, qui a des propriétés phlogogènes marquées et produit de la suppuration et même des nécroses dans les tissus où elle est injectée ; Leber désigne cette substance sous le nom de phlogosine.

III. — Rodet et Courmont ont étudié plus complètement les produits toxiques du Staphylocoque pyogène.

a. Des cultures en bouillon âgées de vingt jours environ (35°) sont soumises pendant vingt-quatre heures à une température de 55°, pour tuer les microbes, puis filtrées sur papier. Le filtrat est faiblement toxique pour le chien et le lapin.

Chez le chieu, des symptômes d'empoisonnement se manifestent quand on en injecte une dose de 100,3 par kilogramme d'animal, mais la mort ne survient rapidement (au minimum en dix-sept heures) que si Ton injecte dans la jugulaire la dose formidable de 35 centimètres cubes par kilogramme; il se produit alors un abaissement de température, une tendance à l'arrêt de la respiration et du cœur, des vomissements, des convulsions et des tremblements.

Le lapin est encore moins sensible ; un lapin de 1 900 grammes ayant reçu 10 centimètres cubes de culture cbauflee n'est mort qu'au bout de six jours, après avoir présenté de l'amaigrissement et une diminution de poids.

La toxine est très altérable et perd rapidement ses propriétés par le vieillissement.

300 LES STAPHYLOCOQUES PYOGENES.

b. Une culture de vingt jours filtrée sur la bougie Chamberland s'est montrée moins toxique encore; après injection intraveineuse de doses atteignant 10 et 15 centimètres cubes, des lapins de 2 kilogrammes n'ont présenté qu'une élévation passagère de la température centrale sans perte de poids.

c. Des cultures âgées de vingt jours ont été décantées; le liquide clair a été filtré sur plusieurs feuilles de papier, puis le filtrat a été mélangé à trois ou quatre fois son poids d'alcool fort; le précipité recueilli sur un filtre, lavé à l'alcool et desséché, a été repris par l'eau.

1° La solution aqueuse obtenue s'est montrée peu toxique.

Pour tuer eu deux heures un chien de G kilogrammes, il a fallu eu injecter dans les veines une quantité correspondant à 200 centimètres cubes de culture ; les symptômes observés ont été : dyspnée, rythme de Cheyne-Stokes, abaissement de la température centrale, tremblements, convulsions, contractures.

Le lapin résiste mieux que le chien ; il ne succombe pas à des doses correspondant à 40 et 50 centimètres cubes de culture ; avec le précipité fourni par 140 centimètres cubes de culture, la mort n'est survenue qu'au bout de huit jours.

2° D'un autre côté, la solution alcoolique séparée par le filtre du précipité albuminoïde et évaporée dans le vide a fourni un résidu qui a été repris par l'eau.

Deux chiens de 9 kilogrammes n'ont pas succombé à l'injection intraveineuse de doses de cette solution correspondant à 260 et 500 centimètres cubes de culture : un chien de 10 kilogrammes a succombé à une injection représentant 210 centimètres cubes de culture, après avoir présenté del'anesthésie généralisée, l'abolition des réflexes, une résolution complète, enfin un arrêt du cœur et de la respiration.

Le lapin est peu sensible ; il n'a jamais succombé rapidement à l'inoculation des matières solubles dans l'alcool ; un sujet a survécu vingt jours à l'injection d'une dose représentant 85 centimètres cubes de culture.

Les auteurs concluent que les substances solubles dans l'alcool, d'une part, et les substances insolubles dans ce liquide, d'autre part, injectées séparément, sont plus toxiques que le mélange total. Ces deux groupes de substances auraient des effets antagonistes et se neutraliseraient partiellement dans les mélanges. La faible toxicilé des produits obtenus par Courmont et Rodet rend ces appréciations fort délicates et leurs résultats méritent confirmation.

IV. — Mosny et Marcano ont obtenu des cultures en bouillon qui, après filtration, tuaient les lapins en quelques secondes par injection intraveineuse à la dose de 10 centimètres cubes. A la dose de i à 2 centimètres cubes, le filtrat rend l'animal cachectique et la mort survient en cinq à six semaines : les animaux qui survivent à l'ino-

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES. 301

culation de la toxine ne présentent jamais d'immunité contre le Staphylocoque pyogène.

§ 3. - VACCINATION ET SÉROTHÉRAPIE.

Ces points de l'histoire des staphylocoques sont peu connus encore; les travaux sont peu nombreux et ont fourni trop souvent des résultats contradictoires.

Mosny et Marcano ont échoué à vacciner le lapin en lui injectant de petites doses de toxine active.

D'après Courmont, la seule toxine soluble dans l'alcool jouirait de propriétés vaccinantes, les produits précipités par l'alcool prédisposant au contraire à l'infection; en injectant la toxine soluble obtenue par la méthode que nous avons exposée plus haut, Courmont a pu obtenir une vaccination relative : le sérum des animaux ainsi traités parait atténuer la virulence du Staphylocoque ; de nouvelles recherches sont nécessaires pour obtenir une démonstration complète.

Les travaux de Viquerat et Kosc et de Parascandolo ont abouti à l'obtention d'un sérum préventif et curatif; ce sérum, obtenu en injectant des cultures virulentes en bouillon sucré, stérilisées par addition de 5 p. 100 d'acide phénique, serait antitoxique et microbicide.

Capman injecte à des lapins et à des chiens une culture filtrée de Staphylocoque préparée en bouillon peptonisé à 1 p. 100 et âgée de vingt jours (37°); après plusieurs injections de toxine, il laisse l'animal se reposer pendant quinze à vingt jours, puis il prélève du sang. Ce sang a des propriétés bactéricides et antitoxiques; injecté à des lapins et à des cobayes, il les préserve et les guérit même de l'infection staphylococcique.

LE MICR0C0CCUS TETRAGENES.

Le Micrococcus tetragenes a été signalé pour la première fois par Koch, dans le pus d'une caverne pulmonaire, et étudié par Gatfky.

Le Tétragène, très répandu dans l'air, est l'un des microbes qui s'associent le plus souvent au Bacille de Koch dans la tuberculose pulmonaire. Il se rencontre fréquemment dans la salive et le mucus nasal des sujets sains; il est susceptible de devenir pathogène et cause des angines (angines sa-" blouses de Dieulafoy et Appert ; Lartigau) et diverses suppurations (septicopyohémies, pleurésies purulentes, méningites suppurées, adénites cervicales, abcès dentaires, furoncles).

Maladie expérimentale. — La souris blanche est très réceptive; l'inoculation sous-cutanée de quelques gouttes de culture en bouillon entraine la mort par septicémie en vingt-quatre à quarante-huit heures; le sang et les viscères contiennent de nombreuses tétrades.

Le cobaye succombe en trois à cinq jours après l'inoculation sous-cutanée ou intrapéritonéale.

302 LÈS STAPHYLOCOQUES PYOGÈNES.

Chez le lapin, moins réceptif, l'inoculation sous-cutanée produit un abcès à évolution froide (Tissicr) ; l'inoculation inlnq.éritonéalc, une péritonite à pus épais.

Aspect microscopique. — Dans les crachats, le pus, le sang, le Tétragène apparaît sous forme de coccus isolés, de diplocoques ou de tétrades ; les éléments sont volumineux et leur diamètre dépasse souvent 1 y.; ils prennent parfois des formes ovoïdes, en haricot. Ils sont fréquemment entourés d'une capsule irrégulière.

Dans les cultures en milieux ordinaires on observe rarement les formes en tétrade, les éléments sont isolés ou groupés par deux, et leur diamètre n'excède guère 0,G à 0,7 ja, les capsules manquent; mais dans les cultures en

sérum de lapin non coagulé les formes en tétrade reparaissent en même temps que les capsules. , Coloration. — Le Tétragène se colore aisément par les procédés ordinaires ; il prend le Gram.

Les capsules se colorent par les méthodes ordinaires; elles sont souvent peu nettes et irrégulières.

Cultures. — Le Tétragène cultive à partir de-}- 15° dans les milieux ordinaires. A 20°, la culture est lente ; la température optima est aux environs de -f 37°. Il est aérobie.

Bouillon. — Léger trouble, puis Fig. 158. — Micrococcus telragenes Rein de dépôt épais, crémeux.

souris (1200/1). Gélatine. — La gélatine n'est pas

liquéfiée; les colonies isolées forment de petits points blancs, de 1 à 2 millimètres de diamètre, à surface bombée. L'ensemencement en piqûre donne, à la profondeur, de petites colonies blanches isolées à la surface un bouton blanc bombé. Chauffard et Ramond ont décrit un Tétragène liquéfiant la gélatine ; il existe des variétés chromogénes [M. t. aureus ; M. t. subflavus).

Gélose. — Colonies blanches confluant en un enduit blanchâtre, crémeux, très visqueux.

Pomme de terre. — Colonies arrondies confluant en un enduit blanc visqueux.

Sérum de lapin liquide. — Trouble, puis dépôt blanchâtre constitué par des microbes encapsulés.

Lait. — Pas de coagulation, culture peu abondante.

Recherche et diagnostic. — L'examen microscopique des exsudats montre le Tétragène avec sa forme caractéristique. L'isolement est aisé sur plaques de gélatine. L'inoculation à la souris permet d'identifier le Tétragène (septicémie avec nombreuxmicrobes encapsulés dans le sang, les viscères, etc.).

Propriétés biologiques. — La vitalité du Tétragène persiste plusieurs mois dans les cultures ; le microbe est tué par une exposition de quelques minutes à 60°. La virulence est très variable pour les différents échantillons du microbe, mais les races actives conservent presque indéfiniment leur virulence dans les cultures.

Les cultures filtrées ou chauffées à 60° sont très faiblement toxiques et ne sont pas pyogènes.

CHOOL OF MEDIOIN^ UNIVERSITY OF LEEDS.