CHAPITRE X
LE GONOCOQUE DE NEISSEK
Le Gonocoque est l'agent de la blennorragie (Neisser) ; on le rencontre dans le pus urétral (1), le pus des vaginites et des différentes complications génitales de la blennorragie (bartholinites, salpingites, métrites) ; il détermine certaines cystites, des affections suppuratives du petit bassin chez la femme, l'ophtalmie blennorragique et l'ophtalmie purulente des nouveau-nés. llallier l'a rencontré dans le sang d'individus atteints de rhumatisme blennorragique (gonococcie) ; Ghon et Schlagenhaufer dans les lésions de l'endocardite blennorragique, Pétrone et Kammerer dans le pus d'arthrites blennorragiques, maison a échoué aie déceler dans les articulations atteintes de rhumatismeblennorragique.il a été signalé dans Je pus de la redite blennorragique et d'une stomatite de même nature (Jesioneck).
Pendant la première période de la blennorragie, le Gonocoque existe d'ordinaire à l'état pur dans l'urètre, mais bientôt il se produit des infections secondaires et de nouveaux microbes viennent s'associer ou se substituer au gonocoque [Bacterium coli, microbes de la suppuration, diplocoques, microbes divers décrits par Burnm, Eraud et Hugounenq, Steinschneider, Legrain, Eisenberg, Bosc, etc.). Ces microbes associés peuvent causer diverses complications de la blennorragie : abcès, suppurations, endocardites, etc.
Article I. — MALADIE EXPÉRIMENTALE.
§ 1er. RÉCEPTIVITÉ. — SYMPTÔMES ET LÉSIONS.
Homme. — a. Welander a déterminé une blennorragie chez l'homme en injectant dans l'urètre du pus à Gonocoques.
(1) Il existe un certain nombre d'urétrites non gonococciennes (urélrilcs pseudo-gonorrhéiques de Bockart), parmi lesquelles nous citerons les urètriles dues aux caustiques, aux microbes ordinaires de la suppuration, staphylocoques, streptocoques (Bockart), à l'herpès génital, au Bacterium coli (Van der Bluyn et Haay, Besson). à la goutte, au rhumatisme, à la syphilis, à la tuberculose, etc. Les urétrites des animaux (chien, etc.) relèvent de microbes différant du Gonocoque.
b. Bumm, inoculant une culture pure de Gonocoque dans l'urètre d'une femme, obtint une blennorragie typique qui dura trois semaines ; le pus de l'urètre contenait le microbe spécifique.
c. Bockart a injecté dans l'urètre d'un paralytique général à la dernière période un centimètre cube d'une quatrième culture de Gonocoque sur gélatine. Il en résulta une blennorragie typique suivie d'une néphrite suppurée, le Gonocoque se retrouvait dans le pus de l'urètre et des abcès du rein.
cl. Bokaï inocula des cultures pures dans l'urètre de six étudiants et obtint six fois une blennorragie. Brenner, Wertheim, Finger, Schlagenhaufer, Kiefer, obtinrent également des résultats positifs.
Animaux. — Les animaux sont peu sensibles à l'inoculation du Gonocoque.
L'inoculation sous-cutanée produit une inflammation passagère non suivie d'abcès (Wertheim). Finger a cependant obtenu une fois un petit abcès.
Les inoculations urétrales échouent à produire la blennorragie chez le chien, le lapin, le cheval et le singe.
Legrain a obtenu chez le cobaye une légère conjonctivite purulente avec des gonocoques à l'intérieur des cellules de pus. Chez les jeunes lapins, le Gonocoque produit une conjonctivite purulente typique ; cependant le microbe, loin de se multiplier, disparait rapidement de la conjonctive oculaire ; l'inflammation est produite par la toxine: les cultures stérilisées la produisent (Morax).
En inoculant des cultures dans les articulations du lapin, Finger, Schlagenhaufer ont obtenu des arthrites aiguës éphémères.
§ 2. - RECHERCHE DU GONOCOQUE.
On recherche le Gonocoque dans le pus de l'urétrite et des diverses suppurations blennorragiques.
Pour recueillir le pus urélral, désinfecter le méat, faire sourdre une goutte de pus en comprimant la verge de la racine à l'extrémité et recueillir cette gouttelette avec une pipette ou une ose.
a. Examen microscopique. — Dans la confection des lamelles de pus, avoir soin de ne pas comprimer fortement la goutte de pus entre les deux lamelles et d'opérer très doucement la séparation de celles-ci pour ne pas briser les cellules de pus, ce qui mettrait les Gonocoques en liberté et leur ferait perdre un de leurs meilleurs caractères. Colorer la préparation selon les procédés exposés plus loin, de manière à différencier le Gonocoque des espèces associées.
6. Cultures. — Pour obtenir des cultures, il est bon de prélever
324 LE GONOCOQUE DE NEISSER.
le pus pendant les premiers jours de l'urétrite ; plus tard, la production d'infections secondaires rendrait la recherche moins aisée. On pratiquera de préférence l'ensemencement en strie sur des plaques de gélose au sérum, de façon à obtenir des colonies séparées ; on peut aussi faire un isolement par la méthode ordinaire sur plaques de gélatine acide (Voy. p. 320).
Remarque. — Dans la blennorragie chronique, alors que l'écoulement est réduit à une simple goulte, le meilleur pr océdé pour rechercher le Gonocoque consiste à faire uriner le malade, au réveil, dans un verre conique ; on ajoute un fragment de thymol et on laisse au repos. Bientôt des filaments blanchâtres de mucus ou de muco-pus se déposent au fond du verre ; on prélove de ces filaments avec une pipette et on en prépare des lamelles que Fou traite comme plus haut.
Ce mode de recherche ne se prête pas à l'obtention des cultures; pour obtenir celles-ci, il faudrait recueillir purement l'urine dans un verre stérile, y prélever immédiatement un filament avec une pipette stérile et l'ensemencer sur gélose au sérum.
Article D. — CARACTÈRES MORPHOLOGIQUES.
§1«. - ASPECT MICROSCOPIQUE
Le Gonocoque se présente sous forme de petits grains ayant l'aspect de reins ou de haricots ; leur diamètre varie de 0,4 à 0,6 «x ; ils sont
d'ordinaire réunis par deux, les éléments accouplés se regardent par leur face concave ; quelquefois, on trouve des groupements en amas, mais jamais de chaînettes. Dans les cultures, les grains, très inégaux, sont arrondis ou ovalaires.
Les deux éléments d'un couple sont réunis par une gangue muqueuse, analogue à la capsule du Pneumocoque, très difficilement visible ; on arrive à la colorer dans les Tiff. 171. — Gunococcus Meisseri (pus de bien- cultures âgées en se servant
^orragie). - Bleu phéniqué (Reich. ; Obj. de la fuchsine de Ziehl. 1/12 imra.; Oc. III). .
Dans les cultures, les gonocoques présentent des mouvements d'oscillation et de translation (Eraudet Hugounenq).
Dans le pus blennorragique, les Gonocoques sont quelquefois libres, mais plus souvent contenus dans les cellules de pus ou les
GAB ICTÈRES MORPHOLOGIQUES.
cellules épithéliales ; cette inclusion du Gonocoque dans les cellules constitue une des caractéristiques de ce microbe.
Dans le pus de l'urétrite, le Gonocoque se rencontre à l'état de pureté pendant les premiers jours; au début, les microbes sont peu nombreux et se trouvent dans les leucocytes polynucléaires ; les cellules épithéliales abondent, mais un très petit nombre d'entre elles contiennent des microbes ; vers le troisième jour le nombre des gonocoques augmente, beaucoup de cellules du pus contiennent le microbe; bientôt après, les cellules épithéliales disparaissent, un à cinq sur six des globules de pus renferment des Gonocoques, très peu- de ceux-ci sont libres. Dès ce moment, on peut constater l'entrée en jeu de microbes associés. Plus tard, les cellules épithéliales redeviennent très nombreuses, peu d'entre elles contiennent le Gonocoque; ce n'est que quand l'écoulement passe à l'état chronique que les cellules épithéliales présentent de nouveau de nombreux microbes à leur intérieur, les globules du pus disparaissent alors presque complètement.
Coloration. — Le Gonocoque se colore facilement par les couleurs basiques d'aniline, mais il ne prend pas le Gram. Vabsence de coloration par la méthode de Gram sert de base an diagnostic (G. Roux).
A. Faire d'abord une coloration simple avec la fuchsine de Ziehl diluée ou la thionine phéniquée; tous les microbes se colorent.
B. Colorer une lamelle au violet phéniqué, l'examiner, puis lui faire subir la méthode de Gram ; les Gonocoques se décolorent, seuls les microbes associés tels que les Staphylocoques, le diplocoque décrit par Legrain, Bumm, etc., restent colorés.
C. Faire subir à une lamelle la double coloration par un des procédés basés sur le principe suivant : on fait une méthode de Gram, les microcoques résistant au Gram sont seuls colorés, puis on fait agir une solution colorante autre que le violet et les Gonocoques prennent cette deuxième teinte.
Procédé de Steinscfuieider. — 1° Faire agir le violet d'Ehrlich, puis la solution de Gram, décolorer à l'alcool absolu, laver à l'eau.
2° Faire agir alors pendant une minute une solution aqueuse de vésuvine ; laver, sécher, monter.
Les Gonocoques et le fond sont colorés en brun, les microbes résistant au Gram ont une teinte violette.
Procédé de Nicolle (procédé recommandé). — 1» Faire agir le violet phéniqué, le liquide de Gram, puis décolorer par l'alcoolacétone (p. 145), laver à l'eau.
2° Faire agir alors pendant quelques secondes une goutte d'une solution hydro-alcoolique de fuchsine :
:*2G LE GONOCOQUE DR NEISSEH.
Solution saturée do fuchsine dans l'alcool à 95°. 5 centimètres cubes. Eau distillée 100
Laver, sécher, monter. Les Gonocoques sont colorés par la fuchsine, les autres microbes sont violets.
Conditions de culture. — Le Gonocoque est aérobie ; il cultive assez difficilement et exige des milieux spéciaux. Il se développe entre + 21° et 39°, la température optima est comprise entre 36° et 37°. Les milieux à base de sérum donnent les meilleurs résultats.
Bouillon. — Dans le bouillon ordinaire à 30°-37°, le développement est insignifiant; vers le deuxième jour, il se produit un trouble, puis un léger dépôt grisâtre se précipite et le liquide s'éclaircit.
Urine (Finger). — Dans l'urine non alcalinisée, additionnée de 0,5 p. 100 de peptone et stérilisée, le Gonocoque se développe mieux que dans le bouillon : il produit un trouble notable et un précipité assez abondant. Hammer emploie de préférence une urine fortement albumineuse, stérilisée à l'autoclave ou par filtration sur porcelaine.
Gélatine acide (Turro). — Le Gonocoque se développe assez bien à 22° sur la gélatine acide (gélatine ordinaire non alcalinisée), mais les cultures sont fragiles et le développement s'arrête dès le troisième ou quatrième passage. Il ne se produit pas de liquéfaction.
Piqûre. — Au bout de plusieurs jours, apparition d'une très légère ligne blanche le long de la piqûre ; la culture reste maigre.
Colonies isolées. — Petites colonies punctiformes, saillantes, blanches, à surface hémisphérique, restant très limitées.
Gélose ordinaire. — En ensemençant en strie une cerlaine quantité de pus blennorragique sur de la gélose ordinaire, on obtient un développement très grêle ; le microbe emprunte au pus luimême les matériaux albuminoïdes qui lui sont nécessaires; on obtient ainsi une couche vernissée très mince. La culture a peu de vitalité ; les passages successifs sur gélose sont impossibles, le développement ne se produisant plus dès le deuxième passage.
Gélose de Wertheim. — Liquéfier par la chaleur des tubes de gélose stérilisée (environ 6 centimètres cubes de gélose par tube) ; faire refroidir à -4- 45° et ajouter purement au contenu de cliaque tube environ 4 centimètres cubes de sérum humain ou de liquide d'ascite stérile. Mélanger par agitation, puis incliner le tube et le laisser refroidir; ensemencer après solidification.
Strie. — A 37° les ensemencements en strie donnent au bout de deux à trois jours une bandelette étroite, mince, grisâtre, demitransparente, à surface humide el brillante.
i Colonies isolées. — On peut couler la gélose de Wertheim dans des boites de Pétri, l'y laisser solidifier, puis pratiquer à la surface des ensemencements en strie sans recharger l'ose (p. 89.). A 37°, dès la vingtquatrième heure, apparaissent de petites colonies punctiformes, transparentes ; les colonies s'étendent ensuite et vers le deuxième ou quatrième jour, elles ont la dimension d'une tête d'épingle, leurs bords sont légèrement sinueux (examen à la loupe), leur surface est hémisphérique et leur centre devient blanchâtre, semi-opaque.
Gélose de Kral. — Kral remplace dans la gélose de Wertheim le sérum humain par le sérum de veau et obtient un développement analogue à celui que nous venons de décrire.
Gélose de Pfeiffer. — Ghon et Schlagenhaufer employent le milieu de Pfeiffer, aisé à préparer : sur des plaques de gélose, on étend quelques gouttes de sang humain pur et frais. Les caractères de la culture sont les mêmes que ceux décrits plus haut.
Gélose-sang. — Ce milieu (Voy. p. 55) convient fort bien à la culture du Gonocoque (Bezançon et Griffon).
Gélose de Heiman. — Mélange de deux parties de gélose ordinaire et d'une partie de sérum de pleurésie stérilisé par chauffage discontinu (Voy. p. 47). Le milieu doit être neutre: si le sérum est alcalin, il sera mélangé à une gélose légèrement acide.
Gélose de Nasstikoff. — Recommandée par Steinschneider. Un jaune d'œuf recueilli purement (Voy. p. 55) est mélangé intimement à trois fois son volume d'eau stérilisée. Liquéfier par la chaleur des tubes de gélose stérilisée (6 centimèlres cubes de gélose par tube) ; laisser refroidir à + 4o° et ajouter purement au contenu de chaque tube 2 centimètres de l'émulsion de jaune d'œuf. Mélanger doucement, incliner le tube et laisser refroidir.
Gélose de Steinschneider. — S'obtient en mélangeant une partie d'urine humaine recueillie purement et deux parties de gélose stérilisée (opérer comme pour la gélose de Wertheim).
Sérum de Bumm. — Bumm utilise le sérum de sang humain solidifié; il recueille purement du sang pendant l'accouchement: aussitôt après la section du cordon, on lave au sublimé l'extrémité placentaire de celui-ci, le placenta restant dans l'utérus; puis on dispose sous cette extrémité l'orifice d'un ballon flambé et on y recueille le sang qui s'écoule. On peut ainsi obtenir jusqu'à 100 centimètres cubes de sang ; ce sang abandonne au bout de dix-huit à vingt-quatre heures un sérum parfaitement clair, qui est solidifié par le procédé ordinaire.
Il est plus aisé d'utiliser du sang aspiré dans une veine de l'avantbras (Voy. p. 193). Les caractères de la culture sur sérum humain
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sont les mêmes que ceux de la culture sur gélose de Wertheim.
De Christmas remplace le sérum humain par le sérum de lapin coagulé dans des tubes de petit diamètre.
Pomme de terre. — Pas do développement.
Article III. — PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES.
§ 1e''. - VITALITÉ. — VIRULENCE.
Le pus blennorragique est stérilisé en quelques minutes par une exposition à la température de -f- b5°; de même le séjour pendant quelques heures à la glacière à 0° arrête définitivement le développement des cultures. L'exposition à l'air et la dessiccation stérilisent rapidement le pus à Gonocoque. Le microbe ne résiste pas aux antiseptiques les plus faibles.
Les cultures présentent une vitalité minime; le microbe y meurt en deux ou trois semaines ; les ensemencements en série deviennent rapidement infertiles; en général, les tubes restent stériles après quatre à cinq passages.
Les cultures récentes en milieux favorables sont virulentes, mais cette virulence est très éphémère ; les lésions produites chez les animaux par les cultures relèvent uniquement de la toxine qu'elles contiennent.
La toxine du Gonocoque a été étudiée par de Christmas ; les recherches de Christmas ont été confirmées par Wassermann et Nicolaysen qui ont montré que la toxine se trouve confinée presque exclusivement dans le corps du Gonocoque, d'où elle ne diffuse que très lentement dans le milieu ambiant.
Préparation. — De Christmas a d'abord utilisé comme milieu de culture un mélange de liquide dascite (un tiers) et de bouillon peptonisé (deux tiers). Aujourd'hui il préfère un mélange d'eau de viande et de liquide d'ascite. Après développement, la culture est filtrée.
Faire macérer pendant quelques heures, dans un litre d!eau tiède, 500 grammes de viande de veau fraîche et hachée; ne pas ajouter de sel; ajouter à volonté 2 à 3 grammes de gélatine. Chauffer ensuite à 105° pendant une demi-heure; filtrer, concentrer au quart du volume primitif, stériliser. Mélanger 25 parties de ce bouillon à 75 parties de liquide dascite.
Le Gonocoque pousse mal dans ce milieu si on ne l'y a pas accoutume par des passages successifs en bouillon additionne du quart, puis de moitié de son volume de liquide d'ascite. Après accoutumance, la rosis-
PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES
tance et la fonction toxigène du microbe augmentent : la survie du Gonocoque dans le liquide de Christmas est de quarante à cinquante jours. L'ensemencement sera pratiqué avec une culture sur sérum de lapin âgée de deux à trois jours.
Douzeheures après l'ensemencement, la culture devient trouble, il se forme un voile crémeux à la surface, puis le liquide s'éclaircit et il se dépose une couche grisâtre et visqueuse émettant des prolongements flottant dans le liquide.
Le maximum de toxicité est atteint vers le vingtième ou trentième jour à 37°.
Propriétés. — La toxine possède les propriétés générales des diastases: l'alcool fort, le sulfate ammoniquela précipitent des cultures filtrées; elle est soluble dans la glycérine. Elle tolère un chauffage de quinze minutes à 65°, s'altère entre 65° et 75° et est rapidement détruite à 75°-80°. Elle ne dialyse pas à travers le parchemin.
La gonotoxine est très active pour les animaux de laboratoire réfractaires au Gonocoque.
L'inoculation sous-cutanée ou intrapéritonéale de l à 2 centimètres cubes de toxine tue parfois le cobaye; d'ordinaire il faut 5 à 10 centimètres cubes de toxine dans le péritoine pour amener la mort de cet animal. Sous la peau du cobaye et du lapin, l'inoculation est suivie de la formation d'un abcès bientôt envahi par des microbes d'infection secondaire.
Dans la plèvre du lapin, l'injection de toxine produit un épanchement purulent stérile.
La gonotoxine injectée dans la substance cérébrale à la dose de I /500e de Centimètre cube tue lè cobaye en quatre à six heures ; des doses moindres n'amènent pas la mort et confèrent à l'animal une forte immunité qui lui permet de résister à de nouvelles inoculations intracérébrales. De fortes doses de toxine injectées sous la peau à de nombreuses reprises finissent par immuniser contre l'inoculation intracérébrale.
Chez l'homme, on obtient une urétrite manifeste en injectant clans la partie antérieure de l'urètre et y laissant deux à trois minutes 2 centimètres cubes d'une dilution de toxine au dixième.
Sérum antitoxique. — La chèvre ayant reçu dans le tissu cellulaire sous-cutané de fortes doses de gonotoxine a un sérum antitoxique.
Le mélange de toxine et de sérum anlitoxique est inactif : la neutralisation ne s'accomplit pas immédiatement, elle exige trois à quatre heures à 15°. Un demi-centimètre cube du sérum obtenu par de Christmas neutralise 10 centimètres cubes de toxine.
Injecté isolément dans le cerveau avant la toxine, le sérum préserve l'animal pendant trois jours contre l'injection intracérébrale de toxine ; injecté après la toxine, il est sans effet préservatif ou thérapeutique.
Injecté sous la peau, dans les veines ou le péritoine, à forte dose (1 à 5 centimètres cubes), le sérum a des propriétés préventives à condition que l'inoculation de toxine ne soit faite qu'au bout de quarante-huit heures.
