ASSOCIATIONS MICROBIENNES

L'importance des associations microbiennes dans la diphtérie a été mise en lumière par Roux et Yersin.

Le Bacille de Klebs-Lôffler se trouve rarement à l'état pur dans les fausses membranes. Parfois les microbes qui l'accompagnent

sont en petit nombre et dénués d'importance, mais souvent on voit, à côté du bacille spécifique, un nombre considérable d'autres bactéries; ces microbes interviennent alors dans la genèse de la diphtérie et constituent des associations dont dépend la gravité de la maladie. Les principales de ces associations sont les suivantes :

1° Coccus Brisou. — Roux et Yersin, Martin, ont rencontré souvent, à côté du Bacille de Klebs-Lôffler, un petit coccus qu'ils ont appelé coccus Brisou, du nom de l'enfant chez lequel on l'a trouvé pour la première fois. Le coccus Brisou se rencontre isolé, en diplocoques, ou en amas; il reste coloré parleGram et, sur sérum coagulé, donne de petites colonies blanches, peu saillantes, régulièrement arrondies. « Les associations de ce coccus avec la diphtérie sont toujours bénignes. »

2° Staphylocoques pyogènes. — Les Staphylocoques blanc ou doré constituent une association plus grave que la précédente : les complications respiratoires sont fréquentes; dans un cas d'association au Staphylocoque doré, nous avons vu survenir, au cours de la convalescence, un phlegmon profond du cou.

3° Streptocoque. — Cette association est la plus grave ; la bronchopneumonie est fréquente ; les cas se terminent souventpar la mort.

Expérimentalement, Métin a montré la gravité de l'infection du cobaye par des mélanges du Bacille diphtérique avec le Staphylocoque ou le Streptocoque : le bacille pullule dans le sang, les organes, il abonde dans l'œdème au point d'inoculation.

io Bacterium coli. — Le Bacterium coli se rencontre fréquemment dans la bouche; il est tout naturel qu'on le rencontre parfois dans les membranes diphtéri tiques; cette association serait grave : trois cas observés par Blasi et Russo-ïravalli se sont terminés par la mort.

Des recherches expérimentales de Blasi et Russo-Travalli, il résulte que l'association du Colibacille augmente considérablement la toxicité des cultures du Bacille de Lôffler.

On a encore signalé l'association au Pneumocoque, au Bacille de Friedlànder, au Proteus vulgaris, etc.

Article II. — CARACTÈRES MORPHOLOGIQUES.

| 1". — ASPECT MICROSCOPIQUE

Le Bacille de Klebs-Lôffler se présente sous la forme de petits bâ tonnets de dimensions très variables. Relativement à leurs dimensions, on distingue trois variétés de Bacilles diphtériques :

A. — Bacilles courts, presque cocciformes, souvent associés par

Fig. 192. — Bacille de la diphtérie dans les cultures, forme petite.

deux, et disposés parallèlement les uns aux autres, mesurant en

moyenne 2 ;j.de long sur 0,8 de large (fig. 492).

B. — Bacilles moyens, mesurant 3 à 4 jjl de long sur 0,8 de large.

(les bacilles sont disposés parallèlement ou associés par deux bout à bout; souvent encore, ils sont unis par deux à angle plus ou moins aigu de manière à figurer un V ou un accent circonflexe (fig. 193).

C. — Bacilles longs, dont la longueur dépasse 4 et 5 p. ; ces bacilles, dans les cultures, peuvent être intriqués, enchevêtrés, en forme de véritables broussailles.

Ce sont eux qui fabriquent la toxine la plus active ; on les trouve dans les angines graves.

Par contre, les bacilles courts sont d'ordinaire à peu près inactifs (Martin).

Le Bacille de la diphtérie est immobile, il est droit ou légèrement courbé ; ses extrémités sont arrondies et parfois plus larges que le centre ; souvent les bacilles ainsi renflés et légèrement courbés prennent un aspect caractéristique que l'on ne saurait mieux comparer qu'à celui d'un cornichon. Dans les vieilles cultures et les membranes, on rencontre des

Fig. 193. — Bacille de la diphtérie dans les cultures, forme moyenne.

formes d'involution, plus ou moins renflées en forme de poire, de massue, d'haltères, etc. On ne connaît pas de spores an Bacille de Rlebs-Lûffler.

Coloration. — Le Bacille de la diphtérie se colore facilement par les couleurs basiques d'aniline. 11 prend le Gram, mais il faut avoir soin de ne pas pousser trop loin la décoloration, car la coloration du bacille ne résiste pas à l'action longtemps prolongée de l'alcool.

Dans les cultures et les frottis de membranes la coloration se fait très aisément avec le bleu composé de Boux, le bleu alcalin de Loffler ou la fuchsine de Ziehl diluée.

La méthode de Gram permet d'obtenir de belles préparations avec les frottis et coupes de fausses membranes.

Dans les bacilles colorés par le Fig m Bacillc de la diphtérie. - Frottis

bleu de méthylène, on voit des de fausse membrane. — Méthode de (îram granulations teintées autrement (Reich.-, Obj. 1/12 imm.; Oc. II). que le protoplasma {corpuscules

mé tac hr orna tiques de Babès; corpuscules polaires). Les auteurs allemands attachent à ces granulations une grande importance dans la diagnose du Bacille diphtérique.

Après coloration, le Bacille de la diphtérie, surtout dans les vieilles cultures, présente fréquemment des espaces vacuolaires irréguliers, qui ne prennent pas la couleur ; ce ne sont pas là des spores.

Remarque. — Dans les préparations montées au baume, le Bacille diphtérique perd assez rapidement sa coloration; pour avoir des préparat-ions persistantes, on colorera de la façon suivante :

1° Faire agir pendant une à trois minutes la fuchsine de Ziehl diluée. Laver à l'eau.

2° Faire agir do, môme façon le bleu composé de Roux. Laver, sécher, monter.

Conditions de culture. — Le Bacille diphtérique cultive à partir de + 20°; le développement devient minime à 40° et s'arrête à 42°. La température optima est comprise entre 35° et 37°

Le Bacille de la diphtérie est aérobie ; il se développe de préférence en présence d'un courant d'air. On obtient cependant un

LE BACILLE de la diphtérie:.

développement lenl dans les cultures anaérobies, mais la culture reste grêle et perd rapidement sa vitalité.

Bouillon. • Le bouillon de veau peptonisé donne des cultures plus riches que le bouillon de bœuf.

A 37°, au bout de douze à vingt-quatre heures, apparaissent de

petits points blancs, grumeleux, adhérents aux parois du vase, puis il se forme, à la surface, un voile constitué par des amas de bacilles enchevêtrés, parmi lesquels on trouve de nombreuses formes en massue. Il se produit un précipité au fond du tube et le bouillon reste limpide.

On obtient une culture plus luxuriante et plus rapide en disposant le bouillon Fig. 193. — Matras de Fcrnbach. dans un matras de Fernbach (fig. 195),

parcouru par un courant d'air pendant loute la durée du développement.

Pour utiliser le matras de Fernbach, on y verse par la tubulure centrale une quantité de bouillon suffisante pour en couvrir le fond sans atteindre le niveau des tubulures latérales. Ces tubulures latérales et la tubulure centrale sont bouchées à l'ouate; on stérilise à l'autoclave; l'ensemencemenl se pratique par la tubulure centrale, puis on la rebouche à l'ouate et on la recouvre avec un capuchon de caoutchouc. On relie une des tubulures latérales à la trompe a eau et on pratique une légère aspiration ; l'air appelé par la trompe entre par la tubulure opposée et balaye incessamment la surface du bouillon.

Dans les cultures en bouillon, il se développe dès les premiers jours une acidité très prononcée; puis la réaction devient alcaline en même temps qu'il se précipite du phosphate ammoniacomagnésien. — Dans les milieux glycérinés, la réaction acide est très marquée et persiste; le bacille perd rapidement sa vitalité dans ces milieux. — Dans le bouillon de Martin, le développement est très abondant, il ne se produitpas d'acidité du milieu et la virulence se conserve longtemps.

Sérum solidifié. — Le sérum est le milieu de choix pour la culture du Bacille de la diphtérie ; le développement y est très rapide.

Colonie* isolées (ensemencement en surface). — Dès la dix-huitième heure, apparition de points blancs grisâtres qui prennent rapidement le volume d'une tète d'épingle ; les colonies vues par transparence paraissent plus opaques à leur centre ; en vieillissant, elles s'agrandissent tout en restant régulières et se colorent parfois

en jaune pâle; les colonies augmentent de taille les jouis suivants et peuvent arriver à avoir 5 millimètres de diamètre.

Strie. — Le long de la strie, apparition de colonies analogues à celles décrites ci-dessus, devenant rapidement confluentes et formant une bande grisâtre assez large abords irrégulièrement découpés.

Les cultures des bacilles longs, courts et moyens ne se distinguent pas sur sérum, cependant les colonies des bacilles courts sont parfois plus blanches, plus humides et continuent à croître à la température ordinaire; en un mot elles sont identiques aux colonies du pseudo-bacille diphtérique d'Hoffmann.

Gélose. — Colonies fort semblables à celles qui poussent sur le sérum, parfois plus étendues et plus blanches.

Gélatine. — Sur de la gélatine dure (à 15 p. 100) à22°-24°, on obtient un développement très grêle de petites colonies blanches, puncliformes, le long de la piqûre. Pas de liquéfaction.

Pomme de terre. — Pas de développement apparent.

Albumine de l'œuf. — Sakaroff a recommandé, pour remplacer le sérum du sang, l'albumine de l'œuf coagulée par la chaleur. Au procédé donné par Sakaroff pour la préparation des tubes de blanc d'œuf, nous préférons celui indiqué page 55 (B).

L'ensemencement en surface donne, au bout de vingt-quatre heures, de petites colonies rondes à surface convexe, mates, peu transparentes, moins blanches que le fond; parfois, vers le douzième jour, leur couleur tourne au jaune rougeâtre ou prend des teintes chair.

Lait. — Développement abondant, sans coagulation.

Fig. 196. — Bacille de la diphtérie. — Isolement sur sérum (24° heure).

Article III. — RECHERCHE ET DIAGNOSTIC.

Le diagnostic de la diphtérie étant souvent impossible par les seules ressources de la clinique, on demande à la bactériologie le diagnostic précis de toutes les angines et particulièrement des angines pseudo-membraneuses.

Ce diagnostic comporte deux ordres de recherches : on doit d'abord déterminer si l'angine ou le croup observés relèvent du

?H-8 j . LE BACILLE DE LA DIPHTÉRIE.

Bacille de la diphtérie pur ou associé, puis, en cas de résultai positif, étudier la virulence du bacille isolé. Cette seconde partie de la recherche n'est pas indispensable dans la pratique; en règle générale, on considère comme plus virulents les bacilles à formes allongées; d'ailleurs, au point de vue du traitement, la seule constatation de la nature diphtéritique exige le traitement sérothérapique.

En présence d'une angine, pour obtenir un diagnostic bactériologique complet, on aura recours à V examen microscopique des frottis, aux cultures et aux inoculations. En pratique, l'examen microscopique et la culture suffisent ; le diagnostic réduit à ces deux opérations demande un maximum de vingt-quatre heures.

Prélèvement de l'exsudat. — Détacher la fausse membrane à l'aide d'un petit tampon d'ouate hydrophile fixé sur une pince à forcipressure ; quand la fausse membrane est très adhérente, on la saisit directement entre les mors de la pince ; quand il n'existe pas de fausses membranes, on racle légèrement la surface des amygdales ou du pharynx avec une petite spatule de platine ou de nickel.

Avant d'utiliser les fausses membranes recueillies, on les comprime très légèrement entre deux doubles de papier filtre stérilisé pour les débarrasser du mucus qui se trouve à leur surface.

Quand on veut expédier à un laboratoire éloigné un fragment de fausse membrane, on le dépose dans un petit tube stérilisé bouché à l'ouate ou on l'enveloppe dans un morceau de taffetas gommé que l'on place dans un tube de verre neuf et soigneusement bouché; les règlements exigent que, pour les transports par la poste, ce tube soit inclus dans une enveloppe métallique contenue elle-même dans une boîte en bois; sur l'étiquette qui porte l'adresse on doit faire mention du contenu du paquet.

A. Examen microscopique. — Avec une parcelle de l'exsudat préparer des frottis ; de ces frottis, les uns seront soumis à la simple coloration, les autres à la méthode de Gram :

1° Colorer au bleu de Roux, laver, sécher. Examiner avec l'objectit à immersion homogène.

2° Si l'examen précédent a révélé l'existence de bacilles, pour pousser plus loin le diagnostic, on colorera un frottis par la méthode de Gram : le Bacille de Loffler reste coloré et on pourra éliminer de cette façon un certain nombre de bacilles que l'on trouve fréquemment dans la bouche et qui ne prennent pas le Gram.

Mais si l'examen microscopique reste négatif, il faut savoir qu'il est parfois difficile de reconnaître le Bacille diphtérique au milieu d'un grand nombre d'autres microbes, et que lorsqu'on ne le trouve pas, on n'est pas autorisé à nier la diphtérie (Martin). // faut en tous cas pratiquer des ensemencements.

:CHOOL OF MEDICIN recherche et W^BfRSITY OF L329EDS

Au point de vue du pronostic, on tire des renseignements précieux de l'examen microscopique : la présence de bacilles longs indique une forme sévère ; il en est de même de l'association avec le Streptocoque ; la présence du coccus Brisou caractérise d'ordinaire les formes bénignes.

Coupes. — Après durcissement à l'alcool et inclusion dans la paraffine, on pratique des coupes perpendiculaires à la surface de la membrane ; la méthode de Gram avec double coloration donne de fort belles préparations.

Dans ces coupes, on note la présence de trois couches : la couche sus-jacente au derme est formée par un lacis fibrineux dont les mailles contiennent des cellules épithéliales et des leucocytes; audessus, une zone moyenne est constituée par de la fibrine granuleuse et contient peu d'éléments cellulaires; enfin, la couche superficielle est presque entièrement constituée par les microbes; les bacilles y sont disposés en amas dans lesquels ils sont placés parallèlement les uns aux autres; les formes en cornichons abondent; à côté des Bacilles diphtériques peuvent se trouver des microbes associés.

B. Cultures. — Les ensemencements doivent être pratiqués sur le sérum coagulé ou, à son défaut seulement, sur le blanc d'œuf.

Les différents milieux au sérum de Lôffler, Tochtermann, Joos, etc., n'ont aucun avantage sur le sérum coagulé et compliquent inutilement la technique.

On prend avec une ose forte de platine une parcelle de fausse membrane; on porte l'ose dans le tube de sérum et on ensemence par frottement sur toute la surface du sérum ; on ensemence de la même façon deux autres tubes sans recharger l'ose (Techn., p. 89). Quand il n'existe pas de fausses membranes, on pratique l'ensemencement en frottant sur le sérum la spatule avec laquelle on vient de racler la surface des amygdales ou du pharynx.

Les tubes sont placés à l'étuve à 37°, et doivent être examinés dès la vingtième ou vingt-quatrième heure; dès ce moment, on reconnaît facilement les colonies du Bacille diphtérique; il faut savoir que certains coccus donnent des colonies assez analogues, quoique plus humides et plus homogènes; aussi ne devra-t-on pas se contenter de l'examen microscopique, mais examiner au microscope les microbes constituant les colonies. Si l'on attendait plus de vingtquatre heures avant d'examiner les tubes, l'observation pourrait être gênée par le développement des microbes associés ou existant dans la membrane à l'état d'impuretés. Parmi les trois tubes ensemencés, on choisira pour l'examen celui où les colonies seront le mieux isolées.

Porter le diagnostic de diphtérie toutes les fois que V exsudât ensemencé sur sérum donne en vingt-quatre heures de nombreuses colonies de bacilles présentant Vaspect et les réactions colorantes du Bacille de Klebs- Lof fier.

C. inocula lions. Quand on veut obtenir des résultats rigoureux, on doit éprouver par les inoculations plusieurs des colonies diphtériques obtenues, une même fausse membrane pouvant contenir des bacilles de virulence différente.

On opère, pour chaque colonie, de la façon suivante : prélever purement une parcelle de la colonie et l'ensemencer en bouillon ; au bout de vingt-quatre heures ensemencer un centimètre cube de la culture sous la peau d'un cobaye adulte ; l'animal meurt plus ou moins rapidement suivant la virulence du bacille (Voy. p. 381). En cas d'échec, essayer de même la virulence chez un petit oiseau.

Article IV. — PROPRIÉTÉS RIOLOGIQUES.

g ter VITALITÉ ET VIRULENCE.

Vitalité. — Le Bacille de la diphtérie se conserve très longtemps vivant dans les cultures; les réensemencements sont fertiles même après cinq et six mois.

Pris dans une culture, à l'état humide, le bacille est très sensible à l'action des agents destructeurs. Les cultures en bouillon sont stérilisées en quelques minutes par une température de + 58°.

Les bacilles desséchés résistent mieux à la chaleur, et peuvenl rester vivants après une exposition de plusieurs minutes à 9ij°.

La résistance du Bacille de Klebs-Lôffler est encore beaucoup plus grande dans les fausses membranes. Une fausse membrane desséchée et exposée pendant une heure à une température de 95°-i00° peut encore donner des ensemencements fertiles.

La dessiccation dans les milieux albumineux altère très peu la virulence du Bacille diphtérique, une fausse membrane desséchée par Roux et Yersin et conservée à l'abri de la lumière à la température de la chambre donna encore des cultures après trois et cinq mois. Les bacilles provenant d'une culture sur sérum résistent moins à la dessiccation, surtout quand celle-ci est rapide.

L'exposition à la lumière des fausses membranes desséchées amène assez rapidement la mort du bacille ; une fausse membrane desséchée, conservée à l'air et au soleil par Roux et Yersin, ne contenait plus de bacilles vivants après un mois et demi. Une culture sur sérum desséchée et étalée en couche mince a été trouvée stérile

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES. 381

après une exposition de vingt-quatre heures à la lumière diffuse (Ledoux-Lebard).

Les antiseptiques détruisent rapidement le Bacille de Klebs-Lôffler dans les cultures; l'acide phénique à i p. 1 00, le bichromate à 2 p. 100 stérilisent instantanément celles-ci ; etc.

Quand on immerge des fils de soie dans une culture du Bacille de la diphtérie, puis qu'on les dessèche, le bacille, sur ces fils desséchés, se montre moins sensible aux antiseptiques : il résiste plusieurs minutes à l'acide phénique et au perchlorure de fer à 1 p. 100, à l'acide salicylique en solution alcoolique à 5 p. 100, etc. (Chantemesse et Vidal). Dans les fausses membranes desséchées, la résistance du bacille aux antiseptiques est encore plus grande.

Virulence. — Pour juger de la virulence d'un Bacille diphtérique, il faut le soumettre à l'épreuve suivante :

On fait une culture en bouillon et au bout de vingt-quatre à trente heures on en inocule un centimètre cube sous la peau d'un cobaye adulte pesant 400 à bOO grammes. Plusieurs cas peuvent se présenter :

a. Si le bacille est très virulent, l'animal succombe en vingtquatre ou trente heures.

6. Si le bacille est moyennement virulent, l'animal succombe en deux à six jours.

c. Si le bacille est peu virulent, l'animal succombe en huit à dix jours.

d. Si le bacille est très peu virulent, l'animal ne succombe pas ; il se produit un œdème suivi d'une escarre.

e. Enfin, si aucune lésion ne se produit, la virulence est nulle. La virulence du bacille retiré des fausses membranes est très

variable ; dans les diphtéries graves, les bacilles virulents sont très nombreux ; dans les diphtéries bénignes, on rencontre à côté de quelques colonies actives un grand nombre de colonies constituées par des bacilles non virulents. Dans la bouche des personnes saines, on trouve fréquemment, comme nous l'avons dit plus haut, un bacille non virulent ; ce bacille, que l'on peut rencontrer aussi dans des angines non diphtéri tiques, a été désigné par Lôffler sous le nom de pseudo-diphtérique; Lôffler, G. Hoffmann, etc., différencient absolument ce bacille du véritable Bacille diphtérique, mais Houx et Yersin ont insisté sur les motifs qui permettent d'identifier les deux bacilles; le Bacille pseudo-diphtérique n'est que le Bacille de Klebs-Lôffler dépourvu de virulence.

Discussion. — Les deux bacilles présentent des différences morphologiques insignifiantes. Le Bacille pseudo-diphtériquê est en général plus court que le Bacille de Klebs-Lôffler, mais nous savons depuis les observations do

Martin que la longueur du bacille légitime varie beaucoup et que, d'ordinaire, cette longueur permet de juger de sa virulence.

Le Bacille pseudo-diphtérique ne détermine jamais la mort du cobaye, mais il provoque parfois chez cet animal de l'œdème au point d'inoculation. Cependant un bacille qui ne tue pus le cobaye peut tuer les petits oiseaux; or Roux et Versin, prenant un tel bacille donnant de l'œdème au cobaye, ont pu remonter sa virulence en l'asssociant au Streptocoque. La virulence n'est ]>as un caractère fixe.

On pourrait faire cette objection à l'identification des deux bacilles, que l'on n'est pas encore parvenu à rendre actif un Bacille pseudodiphtérique dépourvu de toute virulence. Cette objection tombe devant une observation de Roux et Yersin : des bacilles virulents chez un malade atteint de diphtérie deviennent parfois moins virulents pendant la convalescence et finissent par être complètement inactifs ; or, on ne peut restituer leur virulence à ces bacilles légitimes devenus avirulents.

Martin a prouvé que certains bacilles courts ne tuant pas le cobaye sont des Bacilles diphtériques dégénérés. (1). Bien plus, dans un milieu de culture favorable, des bacilles non virulents pour le cobaye donnent fréquemment de la toxine ncutralisable par le sérum antidiphtérique.

Atténuation. — Dans les vieilles cultures, le Bacille de la diphtérie perd beaucoup de sa virulence, mais un réensemencement en bouillon lui rend d'ordinaire toute son activité.

11 n'en est plus de même quand on cultive un bacille virulent sur la gélose glycérinée, ou en bouillon, dans un ballon de Fernbach, en présence d'un courant d'air à 39°. Dans ces conditions, le bacille perd rapidement et d'une façon définitive sa virulence et ne produit plus que de l'œdème quand on l'inocule au cobaye (Roux et Yersin).

Le même phénomène se produit quand on conserve au contact de l'air une fausse membrane diphtéritique desséchée ; les bacilles y gardent longtemps leur vitalité ; mais, dans les cultures obtenues par des ensemencements répétés de parcelles de cette fausse membrane, on voit chaque jour croître le nombre des colonies de bacilles non virulents. Les bacilles ainsi atténués artificiellement prennent tous les caractères du Bacille pseudo-diphtérique.

Restitution et exaltation de la virulence. — On ne peut restituer sa virulence à un bacille atténué au point d'être sans action sur le cobaye (Roux et Yersin).

(1) Expérience de Martin. — Une culture on bouillon d'un bacille long, très actif, a élé réensemencée en bouillon au bout de huit mois ; le bouillon est resté stérile; au contraire, un ensemencement sur gélose recouverte de bouillon de veau récemment préparé a donné une culture de bacille court. Ce bacille est resté court dans les cultures suivantes; il ne tue pas le cobaye, mais lui donne de l'œdème ; dans la sérosité de l'œdème on retrouve du bacille court.

Ce bacille court artificiellement obtenu tue le moineau : or si on inocule un moineau neuf et un moineau ayant reçu du sérum antidiphtérique, avec 1/10 de centimètre cube de culture en bouillon de ce bacille, le témoin meurt, le moineau-sérum résiste. On se trouve doue en présence d'un bacille court, non virulent pour le cobaye et sûrement diphtérique.

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES

Au contraire, Roux et Yersin ont pu exalter le bacille très peu virulent, donnant un léger œdème au cobaye : ils inoculent ce bacille mélangé à une culture virulente de Streptocoque ; le cobaye succombe avec des symptômes de diphtérie et la virulence du bacille retiré de la sérosité de l'œdème est notablement accrue.

D'après Blasi et Russo-Travalli, l'association avec le Colibacille exalte aussi la virulence du Bacille de Klebs-Lôffler.

Trumpp a restitué leur virulence à des bacilles à peu près inactifs en les inoculant en même temps qu'une petite dose de toxine diphtérique.

Les passages en série chez le cobaye et le lapin n'exaltent pas la virulence du Bacille de la diphtérie (Roux et Yersin). Bardach, en faisant des passages successifs chez le chien, a obtenu, au bout du vingt-cinquième passage, une exaltation de la virulence, exaltation manifeste pour le chien, mais très légère pour le cobaye.

En pratiquant des cultures en série dans des tubes de collodion en péritoine de lapin, Martin a exalté la virulence pour cet animal; la virulence pour le cobaye n'est pas modifiée.

Roux et Yersin ont démontré que la diphtérie est une intoxication produite par le. poison très actif fabriqué par le bacille ; ils ont mis en évidence la présence de ce poison dans les cultures en bouillon du Bacille de Klebs-Loffler.

Les premières recherches de Roux et Yersin n'avaient abouti qu'à la production d'une toxine peu active tuant le cobaye à la dose de 30 centimètres cubes; aujourd'hui Martin prépare une toxine tuant le cobaye adulte à la dose de 1/200° et môme l/500e de centimètre cube.