TÉTANOS EXPÉRIMENTAL

Quel que soit le mode d'inoculation employé, on observe un fait constant, c'est que le Bacille du tétanos n'envahitjamais l'organisme : on ne le retrouve absolument qu'au lieu de l'inoculation.

Quelques heures après celle-ci, le nombre des bacilles est en voie de diminution et bientôt on ne peut plus constater la présence du ferme que par les cultures. Quand on a inoculé une culture à dose strictement suffisante, les produits recueillis après la mort dans la région infectée ne sont pas réinoculables ; au contraire, le pus recueilli dans la plaie d'un tétanique est inoculable aux animaux réceptifs, mais il est impossible d'effectuer plus de quatre passages, au maximum; dès le second passage, l'animal inoculé meurt moins rapidement.

Inoculation de terre ou de pus tétanique. — L'inoculation se fera de préférence sous la peau ou dans les muscles de la cuisse chez le cobaye ou la souris.

Symptômes et lésions. — Au lieu d'inoculation il se produit de la tuméfaction; la région est empâtée et douloureuse ; puis, au bout de trois ou quatre jours apparaissent les symptômes du tétanos. Ceux-ci débutent toujours par les régions les plus voisines du lieu inoculé; dans le cas actuel, la rigidité du membre postérieur inoculé sera le premier symptôme, puis les contractures se généralisent : il se produit des attaques convulsives sous l'influence des plus légères excitations (attouchement, courant d'air, bruit, etc.); le tableau symptomalique reproduit exactement celui que l'on observe chez l'homme, et la mort survient vingt-quatre à quarante-huit heures après le début des accidents tétaniques.

A l'autopsie, on trouve au point d'inoculation, soit un foyer purulent, soit une sorte d'escarre jaune et sèche ou un exsudât membraneux, épais et cohérent; les tissus voisins sont le siège d'une infdtration œdémateuse. A l'examen microscopique, on trouve constamment à côté du Bacille de Nicolaïer de nombreux microbes associés parmi lesquels une ou deux espèces dominent ; les lésions purulentes, membraneuses, nécrotiques sont dues à ces microbes associés. Les viscères sont sains et présentent seulement une légère congestion liée à la gène respiratoire qui précède la mort.

Inoculation de cultures pures. — Les inoculations de cultures pures peuvent être pratiquées sous la peau, dans les muscles, le péritoine, les veines, sous la dure-mère, sur la conjonctive oculaire ; seule, l'inoculation par les voies digestives échoue ; la voie souscutanée ou intramusculaire constitue le mode d'infection le plus rapide et le plus sûr.

Des doses très faibles de cultures en bouillon suffisent pour con-

férer le tétanos aux animaux réceptifs : un cinquantième de centimètre cube donne à La souris et au cobaye un tétanos typique débutant douze à vingt beures après l'inoculation et entraînant la mort en trente-six ou quarante beures. Le lapjn exige des doses de 0cc,!i à lcc,5, encore les premiers symptômes ne surviennent-ils que du deuxième au huitième jour et la mort seulement trois à dix jours après le début du tétanos.

Symptômes et lésions. — Quelle que soit la dose de culture inoculée, il se produit avant l'apparition des premiers symptômes une période d'incubation dont la durée varie avec l'activité de la culture, la dose injectée et la résistance de l'animal; en règle générale, le tétanos est d'autant plus intense et plus rapidement mortel que la période d'incubation a été plus courte. Quand cette période dépasse quatre à cinq jours chez le cobaye et huit jours chez le lapin, le tétanos prend la forme chronique, dure dix à trente jours et peul aboutir à la guérison.

En tous cas, le tétanos commence par la région inoculée, puis se généralise si la dose de culture injectée est suffisante ; si cette dose est extrêmement faible, les symptômes tétaniques peuvent rester limités au membre ou au groupe de muscles intéressés par l'inoculation.

A l'autopsie, on ne trouve aucune lésion au point d'inoculation ; quelquefois cependant, il existe un peu d'hyperémie ou un œdème léger, très circonscrit. Il n'existe aucune lésion des viscères.

Le Bacille du tétanos injecté en culture ne pullule pas dans l organisnie des animaux et, au contraire, y disparaît rapidement : déjà, au bout de huit à dix heures, le nombre des bacilles est très minime; après vingt-quatre heures, il est souvent impossible de constater la présence des bacilles par l'examen microscopique; mais en ensemençant un petit lambeau du tissu conjonctif prélevé au point d'inoculation, on obtient une culture, même quand la mort n'est survenue que plusieurs jours après l'inoculation. Les produits recueillis dans la région infectée ne sont jamais inoculables.

Les cultures filtrées sur la bougie Ghamberland provoquent absolument les mêmes symptômes que les cultures entières; nous reviendrons plus tard sur ce fait, mais, dès à présent, il suflit a établir que la culture inoculée provoque le tétanos grâce à la toxine qu'elle contient.

Inoculation des spores pures (Vaillard, Vincent et Rouget). — Quand on chauffe pendant trois heures à -f- 80° une culture tétanique sporulée en bouillon, la toxine est détruite et le liquide ne contient plus que des spores qui n'ont pas été altérées par le chauffage.

On peut inoculer au cobaye des doses de 0,5 et 0,6 centimètre cube de ces cultures chauffées sans quel'animal présente aucun symptôme tétanique : les spores pures ne germent pas dans les tissus

vivants et sains et ne peuvent par conséquent y fabriquer la toxine qui produit Je tétanos. Les spores ainsi inoculées à l'état pur sont rapidement englobées et détruites parles phagocytes.

Si l'on ajoute aux spores, avant de les injecter, une substance cbimiotaxique négative, telle qu'une gouttelette d'acide lactique, par exemple, les leucocytes ne peuvent aborder les spores, celles-ci, abandonnées à elles-mêmes, ne tardent pas à germer et le tétanos éclate.

On arrive au même résultat en protégeant mécaniquement les spores contre les phagocytes, par exemple en mélangeant les germes avec un peu de sable stérile et enfermant le tout dans un petit étui de papier filtre préalablement stérilisé ; le sac de papier constitue une barrière que ne peuvent franchir les leucocytes, les spores germent à son intérieur, fabriquent la toxine, et l'animal succombe au tétanos.

Quand on produit au point d'inoculation un traumatisme tel qu'une brûlure, une attrition violente des tissus, etc., la phagocytose se trouve entravée, les leucocytes ne peuvent plus aborder les spores, celles-ci se développent et le tétanos se manifeste.

Aussi curieux et important dans l'étiologie du tétanos est le rôle des microbes favorisants : quand un animal succombe à l'inoculation d'une terre tétanigène, on trouve dans le pus, à côté du bacille de ÎS'icolaïer, des microbes étrangers; Vaillard et Rouget ont isolé plusieurs de ces microbes et ont obtenu des cultures qui, mélangées à des spores pures, favorisent le développement du tétanos de la même façon que l'adjonction d'une substance chimiotaxique négative; la terre qui contient des spores tétaniques ne donne le tétanos que si elle renferme en même temps de ces microbes favorisants.

Expérience. — On prend une petite quantité de terre tétanigène et on la divise en deux lots : un lot est gardé comme témoin, l'autre est délayé avec soin dans de l'eau stérile, aspiré dans une pipette à étranglement, scellé dans cette pipette et chauffé pendant une heure à 8ô°. Les spores tétaniques résistent à ce chauffage; au contraire, les microbes non sporulés sont tués. Si on inocule à des cobayes de la terre non chauffée, ces cobayes succombent au tétanos ; au contraire, les cobayes ayant reçu la même quantité de terre chauffée restent indemnes.

D'autre part, on a fait des cultures aérobies avec la même terre; ces cultures injectées à des cobayes provoquent des lésions purulentes, mais jamais le tétanos. Inocule-t-on à un troisième lot de cobayes un peu de terre chauffée additionnée d'une petite quantité de la culture aérobie, les animaux succombent tous au tétanos.

Article 11. — CARACTÈRES MORPHOLOGIQUES.

Le Bacille du tétanos se rencontre tantôt sous la forme non sporulée, tantôt sous la forme spondée.

Besson. — Techn. microb., 2« édit. 26

«w LE BACILLE DU TÉTANOS.

Dans les cultures jeunes, dans certains pus, on voit des bâtonnets très tins, allongés, à bouts non arrondis, mesurant 3 à 4 p de long sur 0,3 à 0,4 [j. de large, et qui présentent, à l'abri de l'oxygène, des mouvements lents et llexueux ; ces mouvements cessent dès que se forme la spore.

Dans les cultures à 37° âgées de trente-six à quarante-huit heures, et quelquefois dans le pus, on rencontre des formes sporulées; vers le dixième jour on ne trouve guère dans ces cultures que des bacilles avec spores; dans les cultures à 20 ou 25°, la formation des spores est tardive et ne commence guère qu'au dixième jour.

Fig. 198. — Bacille du tétanos. — Pus de Fig. 199. — Bacille du tétanos. — Culture

cobaye (association avec un coccus). — en bouillon. — Formes sporulées. —

Thioninc phéniquée (Reich. ; Obj. 1/12 Tliionine phéniquée (Reicli. ; Obj. 1/12

imm. ; Oc. II). imm. ; Oc. 1J).

Les bacilles sporulés se présentent sous la forme de bâtonnets grêles, assez courts, portant à une de leurs extrémités une petite sphère exactement terminale, réfringente et dont le diamètre mesure deux à quatre fois la largeur du bacille : c'est la forme dite en épingle.

Dans les vieilles cultures, le corps du bâtonnet se désagrège et l'on ne voit plus que les spores ; à côté de celles-ci, on peut rencontrer des formes d'involution renflées, irrégulières, en haltères, etc.

Coloration. — Le Bacille du tétanos se colore aisément par les couleurs basiques d'aniline; il prend le Gram. Quand on colore des bacilles sporulés par les méthodes ordinaires, les bâtonnets seuls et les contours des spores fixent la matière colorante, le centre de celles-ci reste incolore, on a une figure très caractéristique rappelant l'aspect d'une raquette.

On colore aisément les spores par un des procédés exposés page 148.

Conditions de culture. — Le Bacille du tétanos est anaérobie; il est cependant moins exigeant sous ce rapport que le Vibrion septique : il peut se développer dans des milieux contenant de petites quantités d'oxygène et s'accoutumer à vivre dans un air faiblement raréfié. Dans la pratique des cultures il faut néanmoins le traiter comme un anaérobie strict.

11 se développe entre -j- 14° et 43° ; au-dessous de 20° la culture est minime ; les spores se forment très lentement au-dessous de 25° ; la température optima est de 38°. A 42° et 43° les bacilles se développent rapidement, mais peu d'entre eux forment des spores.

Le Bacille de Nicolaïer se développe sur les milieux usuels à base de bouillon, neutres, légèrement alcalins ou légèrement acides, mais il est indispensable que ces milieux soient préparés avec du bouillon frais (Kitasato). Le bouillon de bœuf ordinaire lui est très favorable; au contraire, les liquides organiques comme l'albumine de l'œuf, le sérum frais, etc., donnent des cultures pou abondantes.

Bouillon. — A l'abri de L'air, entre + 37° et 39°, le développement est rapide; vers la vingt-quatrième heure apparaît un trouble général, en même temps que de fines bulles de gaz gagnent la surface du liquide; le trouble s'accentue les jours suivants, puis, vers le quinzième jour, la culture se ralentit et il se forme un précipité au fond du vase; le bouillon s'éclaircit.

Pendant la culture, il se dégage en quantité modérée de l'hydrogène, de l'azote et des carbures d'hydrogène ; la culture dégage une odeur puante caractéristique que l'on a comparée à celle de la corne brûlée.

Gélatine. — Culture en profondeur. — La piqûre profonde dans un tube de gélatine privé d'air (p. 105), donne au bout de quatre à six jours, aux environs "de -f- 20°, un développement de petits points nuageux, d'où partent, à angle droit, de très fines et nombreuses aiguilles; le nuage s'étend, envahit progressivement la gélatine et

Fig. 200. — Bacille du tétanos. — Culture en gélatine (piqûre).

D'après Kitasato.

commence à la liquéfier vers le dixième jour ; il se forme alors au fond du tube un dépôt floconneux au-dessusduquel la gélatine est claire et fluide. Les spores ne se forment que lorsque la liquéfaction a commencé. Il se dégage quelques bulles de gaz.

Colonies isolées (tube de Vignal). — Vers le quatrième ou sixième jour, apparition de petits points blanchâtres, formant bientôt des sphères nuageuses d'où partent de fins rayons disposés en houppe; des bulles de gaz se produisent au voisinage des colonies; vers le dixième ou quinzième jour, la liquéfaction commence et se poursuit lentement; les colonies forment des flocons blanchâtres nageant dans la gélatine liquéfiée.

Gélose. — A 37° l'ensemencement en piqûre profonde produit rapidement une culture nuageuse peu caractéristique ; de nombreuses bulles de gaz fragmentent la gélose.

Sérum. — En sérum coagulé, inoculé par piqûre et recouvert ensuite d'une couche de gélose, on obtient une culture nuageuse, le sérum n'est pas liquéfié (Sanchez Toledo et Veillon).

Pomme de terre. — Sur la pomme de terre, à l'abri de l'air, le Bacille de Nicolaïer pousse difficilement; il forme « une couche mince, humide, luisante, assez semblable à celle que donne le Bacille typhique, composée de très longs bâtonnets, sans renflement ni spore ». (Vaillard et Vincent).

Lait. — Le Bacille du tétanos se développe dans le lait sans le coaguler.

Fig. 201. — Bacille du tétanos. — Culture en gélatine (colonies isolées).

D'après Fraenkel et l'feiffer.

Article 111. — RECHERCHE ET ISOLEMENT.

Quand on veut rechercher et isoler le Bacille de Nicolaïer dans une terre, on inocule à un cobaye un fragment de cette terre, puis on isole le bacille du cadavre de l'animal.

La recherche du bacille dans le cadavre d'un homme ou d'un animal doit être effectuée exclusivement au niveau de la plaie tétanique. Elle sera conduite de la façon suivante :

a. Examen microscopique. — Des lamelles préparées avec le pus ou les produits membraneux recueillis dans la plaie sont colorées