SÉRO-DIAGNOSTIC DE LA FIÈVRE TYPHOÏDE

D'ordinaire, la propriété agglutinante apparaît dans le sang des typhoïdiques dès lespremiers jours de la maladie; assez souvent cette apparition est retardée ; elle ne manque que par exception (une fois sur 163 cas de Widal et Sicard, deux fois sur 98 cas que nous avons étudiés). Elle peut disparaître pendant les premières semaines de la convalescence ; elle manque d'ordinaire au bout de six à huit mois, mais a pu être observée après trois et sept ans.

Une réaction positive obtenue selon les règles que nous allons indiquer constitue un signe de certitude de la fièvre typhoïde (1) ; un

m II faut toujours penser à la possibilité d'une fièvre typhoïde antérieure ayant laissé après elle lu propriété agglutinante. Dans trois ou quatre observations ou a observe l'agglu-

PROPRIÉTÉS RIOLOGIQUES. 435

résultat négatif obtenu avec le sang d'un malade suspect fournit seulement une probabilité contre le diagnostic de fièvre typhoïde, surtout si la recherche a été pratiquée pendant les premiers jours de la maladie; l'examen doit alors être répété les jours suivants; la probabilité est d'autant plus grande que l'examen a été fait à une période plus avancée de la maladie.

La réaction agglutinante peut être mise en évidence par plusieurs procédés lents ou rapides, mais quel que soit le procédé employé on devra toujours se conformer aux règles suivantes :

1° Le sang destiné à l'examen est recueilli purement, soit par ponction d'une veine du pli du coude (Voy. p. 193), soit plus simplement par piqûre de la pulpe du doigt à la lancette (Voy. p. 192) ; le sang est reçu dans un petit tube de verre stérilisé.

2° Pour les examens à distance, le sang peut être envoyé dans le tube de verreoùon l'a recueilli, bouchéavecun bouchonflambé ; mais, la dessiccation n'altérant pas la propriété agglutinante dans le sang, il e>t plus simple, pour les envois à un laboratoire éloigné, de recueillir quelques gouttes de sang sur un morceau de papier ou une lame de verre et de l'y laisser dessécher. Pour utiliser le sang desséché, on le dissout dans une ou deux gouttes d'eau stérile. Dans de nombreux cas où nous l'avons employé, ce dernier procédé nous a toujours donné de bons résultats; le sang séché sur lame de verre nous a paru plus actif que celui qui était desséché sur papier. Le sang desséché ne peut être utilisé que pour le séro-diagnostic par le procédé extemporané.

3° Au moment de l'usage, il faut toujours s'assurer par un examen microscopique que la culture que l'on emploie pour le séro-diagnostic est pure : on conçoit les erreurs qui pourraient résulter de l'usage d'une culture impure.

4° Avoir soin de toujours verser le sérum dans la culture et non de faire tomber les gouttes de culture dans le sérum.

1. Procédé lent. — Ce procédé exige l'emploi d'un sérum rigoureusement pur : le sang recueilli par ponction d'une veine du pli du coude est abandonné au repos dans un tube stérile jusqu'à séparation du caillot, puis on aspire le sérum dans une pipette Pasteur.

a. A un tube contenant 6 à 10 centimètres cubes de bouillon stérile on ajoute une dizaine de gouttes du sérum à examiner et on ensemence avec une trace d'une culture typhique ; on a toujours soin d'ensemencer en même temps, comme témoin, un tube de bouillon simple ; les tubes sont placés à l'éluve à 37°. — On note un

tination chez des malades atteints d'affections non lypliiques; nous-mêmes l'avons obtenue dans un cas de pneumonie franche chez un jeune homme, sans qu'on pût soupçonner une dothiéneniérie ancienne.

léger retard de la culture dans le tube additionné de sérum, puis au bout d'une huitaine d'heures on y voit apparaître de légers grumeaux ; vers la dix-huitième heure l'aspect devient caractéristique: les microbes sont réunis au fond du tube en petits flocons blanchâtres et le bouillon reste absolument clair; les grumeaux ne se laissent pas dissocier par agitation du tube. Au contraire, dans le tube témoin le bouillon est trouble et présente les ondes miroitantes caractéristiques de la culture du Bacille d'Eberth.

La réaction n'est pas toujours aussi nette : parfois le bouillon, an lieu de rester clair, présente un trouble irrégulier, sans ondes, et dû à la précipitation d'une très fine poussière dont chaque grain, examiné au microscope, est une agglomération de microbes. Quelquefois aussi la réaction est d'abord caractéristique, puis, au bout de dix-huit à vingt-quatre heures, le bouillon se trouble au-dessus du précipité. L'examen à l'œil nu doit toujours élre complète' par V examen microscopique qui décèle les amas de petites dimensions et permet de reconnaître la structure de ces amas.

6. On peut encore ajouter le sérum à une culture typhique en bouillon âgée de vingt-quatre à trente-six heures; le mélange est placé à l'étuve à 37°. Quand la propriété agglutinante du sérum est considérable, au bout de quelques heures la culture devient grumeleuse et s'éclaircit rapidement en même temps que se précipitent au fond du tube les amas bacillaires; quand le sérum est peu actif, il se forme des grumeaux, mais la clarification n'est jamais complète. Toujours il est nécessaire de confirmer par l'examen microscopique les observations faites à l'œil nu.

11. Procédé exteinporané. — Ce procédé est le plus rapide et le plus sensible; déplus il n'exige que quelques gouttes de sang recueilli par piqûre du doigt. C'est donc à lui que l'on devra s'adresser dans la plupart des cas.

Il exige l'emploi d'une culture âgée de un à deux jours. Le plus grand soin doit être apporté dans le choix de cette culture ; il est essentiel qu'elle soit pure et il est indispensable qu'elle soit récente, car, dans les cultures anciennes, il se forme de faux amas qui fausseraient les résultats de l'opération. Ces faux amas existent parfois même dans les cultures âgées de vingt-quatre heures : il est nécessaire de toujours examiner au microscope la culture au moment de l'employer. Rejeter toute culture dans laquelle il existerait des amas de bacilles. Pour se mettre à l'abri de toute cause d'erreur, on aspire dans une pipette Pasteur une quantité de culture suffisante pour pratiquer la recherche, on en porte une trace sur une lame et on l'examine au microscope; le reste du contenu de la pipette sert immédiatement à faire le séro-diagnostic.

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES

On peut utiliser pour le séro-diagnostic le sang total, mais ce procédé plus rapide en apparence ne l'est pas en réalité, car il faut attendre avant de pratiquer l'examen microscopique que la plupart des globules rouges se soient déposés au fond du vase contenant le mélange de sang et de culture, la présence de nombreux globules nuisant à la netteté de l'agglutination.

On conduira la recherche de la façon suivante :

A. Réaction avec le sérum. — Dans un petit verre conique on fait tomber 10 à 100 gouttes de la culture du Bacille d'Eberth et on y ajoute une goutte du sérum à éprouver. On porte de suite une goutte du mélange sur une lame, on recouvre d'une lamelle et on examine avec l'objectif 8 ou 9; quand le sérum possède la propriété agglutinante on peut voir de suite des amas de bacilles agglutinés et, entre ces amas, des bacilles libres plus ou moins nombreux. La réaction est encore plus nette si on examine la préparation au bout de quinze à vingt minutes : on aperçoit de nombreux îlots compacts formés parles bacilles agglomérés. L'aspect est caractéristique et rend toute er reur impossible. — L'agglulination est favorisée par une légère dessiccation de la périphérie de la goutte entre la lame et la lamelle ; elle est beaucoup plus nette au bout de quelques minutes et, dans les cas où le sérum ne possède qu'une activité minime, elle peut n'apparaître qu'après quarante à soixante minutes.

On peut colorer la préparation pour rendre les amas plus visibles ; le procédé indiqué par Guillemin donne de bons résultats :

Mélanger une goutte de sang entier avec î) gouttes de bouillon stérile; ajouter une goutte du mélange à 2 à 5 gouttes de la culture typhique. Étaler sur une laine une grosse goutte de la dilution ; placer à la chambre humide pendant une à deux heures; dessécher lentement, fixer par l'alcool-éther ; traiter par la solution d'acide acétique à 1 p. 10 pour dissoudre les hématies; laver, colorer au Ziehl, laver, sécher, monter dans le baume.

B. Réaction avec le sang desséché. — Le sang desséché, comme nous l'avons dit plus haut, est dissous au moment de l'emploi dans i à 2 gouttes d'eau; cette solution est versée dans un verre conique

Fig

205. — Sëro-diagnostic île la fièvre typhoïde. Procédé deJ.-H. Guillemin (I) .

Grossissement : 700/1.

(1) Cliché Ch. Basset de La Rochelle.

conlenanl 10 à tiO gouttes de culture en bouillon. On laisse reposer un instant pour permettre la séparation des globules rouges qui généraient l'observation et on pratique l'examen comme dans le cas précédent.

C. "Réaction avec le bacille mort. —Le phénomène de l'agglutination

n'est pas lié à une réaction vitale des bacilles : il apparaît quand on fait usage de cultures tuées. De ce fait on peut tirer une application utile au séro-diagnoslic : on n'a pas toujours sous la main une culture récente de Bacille typhique; avant de pratiquer l'examen il faut réensemencer une culture ancienne et perdre par conséquent une douzaine d'heures. Aussi y a-t-il parfois avantage à se servir d'une Fig. 206.,— Séro-diagnoslic de la lièvre typhoïde; culturetuée, l'expérience ayant réaction avec le sang complet, looo/i. montré qu'une telle culture

garde pendant plusieurs semaines sa sensibilité vis-à-vis du sérum agglutinant. Le procédé suivant est à recommander (Widal et Sicard) :

A une culture typhique âgée de seize à vingt-quatre heures et ayant subi l'épreuve de l'examen microscopique, on ajoute un peu de formol du commerce (à raison de 2 gouttes de formol pour 15 centimètres cubes de culture) ; les bacilles sont tués, restent « comme embaumés » et gardent intégralement pendant plusieurs semaines l'aptitude à l'agglutination. On a soin de couvrir le tampon d'ouate du tube contenant la culture avec un capuchon de caoutchouc ; on peut ainsi conserver au laboratoire des cultures tuées de la même façon que I on garde un réactif chimique. Au moment du besoin on agite légèrement le tube pour répartir uniformément les microbes dans le bouillon et on mêle à quelques gouttes de cette culture morte une goutte de sérum, en opérant comme il a été dit plus haut.

Mensuration du pouvoir agglutinatif. — Le pouvoir agglutinât if existe à un degré variable dans le sérum des typhoïdiques ; tantôt il est très faible, tantôt au contraire il est tellement énergique que la formation des amas se produit encore dans les dilutions supérieures à i/o 000e, et à 1/12000°.

La recherche de la propriété agglutinante devra toujours commencer par l'examen de la dilution au dixième; au-dessous de cette dilution la constatation de l'agglutination laisserait place au doute

PROPRIETES BIOLOGIQUES.

(Voy. Bacterium coli) ; mais il ne suffit pas de faire cette seule épreuve : on doit mesurer plus exactement l'intensité du pouvoir agglutinatif en le recherchant dans des dilutions au vingtième, au trentième, etc.

En pratique, quand on dispose d'une faihle quantité de sang, on pourra se contenter de deux épreuves, l'une avec le mélange au dixième, l'autre avec une dilution au cinquantième.

Widal et Sicard distinguent :

Le pouvoir agglutinatif très faible Inférieur à 1/100.

faible De 1/100 à 1/200.

moyen De 1/200 à 1/500.

— intense De 1/500 à 1/2 000.

— ' 1res intense. . Supérieur à 1/2 000.

Remarque. — Dans ces mensurations il importe que les gouttes de culture et de sérum mélangées soient égales entre elles ; on obtient une précision suffisante par le procédé suivant : On prend un tube de verre d'environ 20 centimètres de long et ou en bouche les deux extrémités à l'ouale ; on étire la partie moyenne à la lampe, comme pour la préparation des pipettes de Pasteur, mais sans séparer les deux pipettes obtenues ; on stéri lise le tube ainsi préparé et au moment du besoin on coupe la partie effilée en son milieu : on obtient ainsi deux pipettes donnant des gouttes sensiblement égides, l'une sert pour la culture, l'autre pour le sérum.

Au point de vue du pronostic, il ne semble point que l'intensité du pouvoir agglutinatif puisse fournir des renseignements certains sur la gravité de l'affection; parfois ce pouvoir est très marqué dans les cas de fièvre sévère, mais ce n'est pas là un fait constant.