PRODUITS SOLUBLES

I. — Hammerschlag épuise par l'alcool-éther des Bacilles tuberculeux desséchés et obtient un extrait qui est toxique pour le lapin et le cobaye; les animaux auxquels on injecte ce produit meurent après avoir présenté des phénomènes convulsifs.

Auclair a obtenu un extrait éthéré de Bacille tuberculeux produisant les lésions de la pneumonie tuberculeuse quand on l'injecte dans la trachée du cobaye.

Weyl a extrait des bacilles une substance qui, injectée sous la peau des cobayes, provoque une nécroseau point d'inoculation.

Zuelzer a isolé des cultures un alcaloïde qui tue les cobayes en trois à quatre jours avec une violente élévation de la température, de la dyspnée, des hémorragies muqueuses, etc.

II. — Koch, Mafucci, Budden, Grancher, Straus et (iamaléia, Borrel observent que les cultures sur gélose stérilisées par la chaleur restent nocives pour les animaux etpeuvent, à doses suffisantes, entraîner des suppurations, la cachexie et la mort , chez le cobaye. Les bacïïles tués, injectés dans lesangou le péritoine, provoquent la formation de véritables tubercules dans lesquels on trouve des bacilles morts, mais ces tubercules ne se généralisent pas et ne sont pas réinoculables.

III. Tuberculiue. — La fuberculine a été préparée par Koch, en 1890, au moyen d'un procédé d'abord gardé secret.

La tuberculine est préparée ainsi qu'il suit à l'Institut Pasteur :

On fait une culture du Bacille de la tuberculose aviaire en bouillon glycériné, dans un matras (le Bacille humain et le Bacille aviaire sécrètent également de la tuberculine, mais le Bacille aviaire se développant plus rapidement, il va avantagea l'utiliser). Il est indispensable que la culture se développe en voile; le voile apparaît du quinzième au vingtième jour à 37°; la culture est complète au trente-deuxième ou trente-cinquième jour.

La culture totale est stérilisée à 100° pendant quinze minutes, puis on la concentre au dixième au bain-marie; le liquide obtenu, filtré sur papier, constitue la tuberculine brute.

La tuberculine est un liquide brunâtre, sirupeux, elle répand une légère odeur suave caractéristique; elle n'a pas une composition définie, c'est un siinple extrait des cultures stérilisées en bouillon glycériné, extrait qui contient, à côté des substances sécrétées par le bacille, celles qui préexistaient dans le bouillon. On n'a pu encore extraire le principe actif de la tuberculine.

On a cherché à purifier cette fuberculine brute :

a. En l'additionnant de 20 volumes d'alcool fort, on obtient un pré-

cipité brun conlenanl la substance active mélangée àde nombreuses matières étrangères; le tannin, l'acide picrique, les sels métalliques, le ferrocyanure de potassium et l'acide acétique déterminent également la formation d'un précipité albuminoïde qui entraîne la substance active; Kocb, llunter et Klebs ont échoué à purilier ce précipité.

b. En précipitant la tuberculine brute par 3 volumes d'alcool à 66°, Kocb obtient un précipité floconneux qui, après dessiccation, abandonne une poudre blanche, c'est la tuberculine purifiée, contenant de nombreux principes étrangers, mais qui est très active : elle tue le cobaye à la dose de 1 milligramme. Celte métliode de préparation est très dispendieuse, les neuf dixièmes de la luberculine restent dissous et se trouvent perdus.

Il n'y a aucun avantage à utiliser la tuberculine purifiée, elle a les mêmes propriétés que la tuberculine brute.

Action de la tuberculine sur l'homme et les animaux. — La tuberculine brute injectée à petites doses à des animaux sains ne produit aucun accident, ou élève très légèrement la température; un cobaye supporte sans troubles une injection de 2 centimètres cubes de tuberculine; le lapin supporte très bien l'injection de 5 centimètres cubes de tuberculine brute, il présente un peu de fièvre et un amaigrissement passager, mais il guérit vite; les bovidés, le chien ne réagissent pas à des doses de 10 centimètres cubes. L'homme est beaucoup plus sensible que le cobaye; une injection de 0CC,25 provoque chez l'homme sain une indisposition assez grave : la température s'élève jusqu'à 39°, il survient des frissons, de la diarrhée, des vomissements (Kocb ; la dose de 0ce,01 peut déjà produire une légère élévation de la température ; l'homme est 1 000 à 1 500 fois plus sensible que le coba j e à la tuberculine.

Chez les animaux et l'homme tuberculeux, l'inoculation de faibles doses de tuberculine provoque des réactions intenses et des troubles graves pouvant aboutir rapidement à la mort.

Un demi-centimètre cube de tuberculine tue rapidement un cobaye tuberculisé depuis cinq à six semaines : il se produit une élévation brusque de température suivie d'un abaissement progressif et l'animal meurt dans le coma. A l'autopsie, on trouve une congestion intense autour des points tuberculeux, les organes sont rouges, congestionnés et présentent des taches eechymotiques.

Chez les bovidés tuberculeux, des doses de 0",30 à 0«,40 amènent dès la sixième heure une élévation de la température centrale qui passe de 36° à 39° et 40°, puis, au bout de quelques jours, tout revient à la normale; des doses plus fortes de tuberculine pourraient entraîner la mort de l'animal.

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES

L'homme tuberculeux réagit avec une intensité formidable à l'inoculation de la tuberculine : un quart de centimètre cube le tuerait infailliblement.

Les closes soi-disant curatives de Koch étaient de 0CC,003 à 0CC,004 ; après L'inoculation il survenait des frissons, la température s'élevait jusqu'à 41°, souvent il se produisait de la toux, des nausées, des vomissements, de l'ictère, etc. ; au niveau des tuberculoses cutanées on voyait se produire une réac tion inflammatoire intense. D'après Koch, ces symptômes devaient durer douze à quinze heures, puis l'aire place à une amélioration progressive des lésions préexistantes ; il est inutile de rappeler les désastres que la tuberculine a à son actif.

Inoculation intracèrèbrale. — Un cobaye de 500 grammes, qui tolère sous la peau 1 centimètre cube de tuberculine, meurt quand on lui injecte dans le cerveau 3 à 4 milligrammes de la même tuberculine (Lingelsheim, Borrel).

Un cobaye tuberculisé depuis douze jours succombe à l'inoculation intracèrèbrale de 1 /10e de milligramme de tuberculine; au quaranl ième jour de l'infection tuberculeuse, le cobaye est tué rapidement, avec du hoquet, des convulsions, des secousses musculaires, par l'inoculation intracèrèbrale de 1/1 000° de milligramme de tuberculine; ces faits expliquent les accidents de la méningite tuberculeuse, seule forme de tuberculose où l'action du poison sur la cellule nerveuse soit mise en évidence (Borrel).

Les toxines tétanique, pesteuse, etc., ne sont pas plus actives dans le cerveau du cobaye tuberculeux que dans le cerveau du cobaye sain. Seule la rnalléine agit comme la tuberculine : la malléine non concentrée, inoifensive pour le cobaye tuberculeux quand on l'injecte sous la peau à la close de 3 à 4 centimètres cubes, tue le même animal à 1/100" et 1/1000' de centimètre cube quand ou l'inocule dans le cerveau (Borrel).

Diagnostic de la tuberculose par la tuberculine. — A. — Nocard a montré que la tuberculine est un réactif précieux de la tuberculose des bovidés. Chez ces animaux le diagnostic précoce de la tuberculose est le plus souvent impossible par les moyens de la clinique ; or il est très important au point de vue de la prophylaxie de reconnaître dès le début les animaux atteints.

Les bovidés tuberculeux, si minimes que soient leurs lésions, réagissent à l'inoculation d'une dose de 0sr,30 à 0sr,40 de tuberculine brute; leur température s'élève de 1°,5 à 3°. Les animaux non tuberculeux ne réagissent pas dans les mêmes conditions.

On opère de la façon suivante :

i° Préparer une tuberculine diluée :

Tuberculine brûle

Iviu bouillie et plicniquéc ù 5 p. 1 000

1 centimètre cube.

0 centimètres cubes.

5fiâ LE BACILLE DE L.\ TUBERCULOSE.

Cette solution s'altère assez rapidement ; elle doit toujours être employée fraîche.

2° L'animal à éprouver est mis au repos, on lui prend la température rectale la veille elle jour de l'opération.

3° On injecte sous la peau de l'encolure, suivant la taille de l'animal, 3 à 4 centimètres cubes de tuberculine diluée, en prenant toutes les précautions d'asepsie ordinaires.

4° A partir de la douzième heure après l'injection, el de la douzième à la vingt-quatrième heure, on prend trois fois la température de l'animal. Tout animal qui présente une élévation de température atteignant 1°,4 doit être considéré comme tuberculeux. Un animal qui présente une élévation minime de 0°,5 à 0°,8 est sain. Quand l'élévation de la température est comprise entre 0°,8 et 1°,4, l'animal est simplement suspect et doit être soumis à une nouvelle épreuve, après un intervalle d'un mois.

B. — Chez l'homme on a utilisé la tuberculine pour reconnaître la tuberculose dans les cas douteux (Grasset, etc.). Cette épreuve, toujours dangereuse, ne doit être pratiquée qu'avec une extrême prudence et s'applique de préférence aux tuberculoses chirurgicales. En aucun cas la dose de tuberculine injectée ne devra dépasser 0ff,002. On utilisera la solution suivante :

Tuberculine brute 4 centimètres cubes.

Eau bouillie phéniquée à b p. 1 UOO Q. S. pour 1 000 centimètres cubes.

Un centimètre cube contient 0^,004 de tuberculine brute. Après avoir pris soigneusement la température pendant deux à trois jour- , on injecte un demi-centimètre cube de la solution : on prend la température toutes les huit heures pendant trente-six heures et on observe avec soin l'organe supposé atteint par le bacille, la réaction locale présentant la plus grande importance au point de vue du diagnostic.

IV. Tuberculines TA, TO et TR. — Koch a étudié récemment un certain nombre de produits complexes retirés, par divers procédés, des cultures du Bacille tuberculeux. Ce sont les tuberculines TA, TO et TR ; cette dernière aurait une action d'arrêt sur l'évolution de la tuberculose.

Tuberculine TA {Tuberculine alcaline). — Les bacilles isolés par lîllration d'une .culture virulente sont traités par une sotuTîoTTde soude à 1 p. 10: ,-i pi'ès un cou tact de t rois jours à la température de la chambre les bacilles sont morts et le liquide peut être filtré sur papier. Après neutralisalioti. le filtrat est clair, légèrement jaunâtre, il renferme .le nombreux cadavres de bacilles; sou inoculation produit les mômes effets, mais un peu plus persistants, que l'injection de tuberculine ordinaire; de plus il se produit

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES

fréquemment des abcès à pus stérile. Après filtration sur bougie, TA donne des ètfcts identiques à ceux de la tuberculine ordinaire.

Tubercidines TO et TR. — Les bacilles retirés d'une culture virulente sont desséchés dans le vide à l'abri de la lumière, puis portés dans un inortier d'agate et broyés longuement; cette opération, très dangereuse, doit être pratiquée avec les plus grandes précautions. La poudre obtenue est délayée dans de l'eau dist illée et l'émulsion est soumise à une centrifugation prolongée pendant quarante à quarante-cinq minutes ; on obtient ainsi deux couches : l'une liquide"; opalescente, ne contenant plus de bacilles, est ilécantée, elle constitue la tuberculine TO.

La couche boueuse inférieure est desséchée, broyée de nouveau, délayée dans de l'eau distillée et soumise à la centrifugation; le résidu obtenu est traité de la même façon; on recommence plusieurs fois l'opération, et on mélange les liquides obtenus à chaque centrifugation. Le liquide provenant de ces centrifugations constitue la tuberculine TR.

Les tubercidines TO et TR sont très différentes.

La tuberculine TO n'est pas modifiée par l'addition de 50 p. 100 de glycérine; ses propriétés smn^jirp.sqiip; Identiques à celles de la tuberculine ordinaire; ses propriétés immunisantes snnt nulles ou peu marquées.

La tuberculine TR donne un précipité blanc floconneux par addition de 50 p. 100 de glycérine; elle n'est pas modifiée par l'addition de 20 p. 100 de glycérine, addition qui permet sa conservation. Elle jouit de propriétés immunisantes manifestes. Chez l'homme, l'inoculation répétée de très petites doses confère l'immunité contre la tuberculine ordinaire et les tubercidines TR et TO : les injections de quantités notables de ces produits ne donneni plus de réaction.

V. Tuberculine de Maragliano. — C'est une tuberculine aqueuse, obtenue en faisant macérer pendant une cinquantaine d'heures à 9o°-100°, dans de l'eau distillée en quantité égale au volume du liquide de la culture employée, les bacilles retirés d'une culture en bouillon glycériné; la macération est ensuite réduite au dixième au bain-marie et liltrée sur papier. Le produit obtenu a les mêmes propriétés que la tuberculine ordinaire; il aurait des qualités vaccinantes; il tue le cobaye sain de 500 grammes à la dose de o centimètres cubes; le cobaye tuberculeux succombe à l'injection de 0ee,10 à 0CC,20 de cette tuberculine.

Précipitée par l'alcool, cette tuberculine donne une poudre tuant le cobaye à la dose de 1 /25 000e et le lapin àla dose de 1 /33 000e de leur poids.

VI. Toxalbumine. — Maragliano, Bezançon et Gouget ont étudié le liquide contenant des toxalbumines, obtenu en filtrant les cultures sur la bougie de porcelaine et en concentrant le filtrat au dixième de son volume, dans le vide, à 30°. Le produit obtenu diffère entièrement des tuberculines, il tue les animaux avec de l'hypothermie, sans jamais produire d'hyperthermie, même à dose non mortelle; il esl plus toxique que la tuberculine;

LE UAC1LLE DK LA TUUEHCULOSK

[. — Gr an cher el Martin atténuent, par le vieillissement, des cultures de tuberculose aviaire, puis les inoculent au lapin; en donnant successivement des cultures de moins en moins vieilles, ils arr ivent dans quelques cas à conférer une certaine immunité à l'animal.

II. — lléricourt et Richet stérilisent des cultures de tuberculose aviaire par plusieurs chauffages successifs à 80°, puis les injectent au lapin à la dose de 10 à 20 centimètres cubes; ce procédé leur a permis de conférer l'immunité à quelques animaux.

III. — Courmont et Dor filtrent des cultures en bouillon glycérine et injectent le filtrat à des lapins en môme temps ou avant l'inoculation de virus tuberculeux; avec le Bacille aviaire ils ont réussi à conférer l'immunité deux fois sur quatre expériences, mais ils ont échoué avec le Bacille humain.

En résumé, on est arrivé, dans quelques cas, à vacciner le lapin contre la tuberculose aviaire, mais on a toujours échoué dans les essais dirigés contre la tuberculose humaine. Le cobaye n'a jamais pu être immunisé.

IV. — Koch pensa à immuniser et même à guérir les animaux et l'homme avec sa première tuberculine; de ses recherches et de celles de ses élèves (Pfuhl, Kilasato, etc.), il ne reste rien aujourd'hui.

Au moyen d'inoculations répétées de tuberculine ÏR, Koch a immunisé les animaux de laboratoire contre les poisons du Bacille tuberculeux ( Voy. plus haut), et il a proposé l'emploi de cette tuberculine dans le traitement de la tuberculose humaine; les résultats favorables qu'il a annoncés n'ont guère été confirmés jusqu'à présent.

Chez l'homme lu tuberculine TR s'emploie à de très faibles doses. Le produit livré par le laboratoire de Koch doit être dilué dans de l'eau glycérinée à 20 p. 100: on commence par en injecter 1/500* de milligramme, puis on répète les injections tous les deux jours en augmentant fentement la dose, de façon à ne jamais obtenir d'élévation de température supérieure à (J°,5; les effets immunisants ne se montrent que lorsqu'on atteint les doses de 0,5 et 1 milligramme.

V. — De Lannoïse a essayé d'appliquer au traitement de la tuberculose humaine un produit qu'il dénomme organotoxine et sur la préparation duquel il donne des renseignements incomplets : des cultures du Bacille tuberculeux en bouillon glycérine, âgées de trois à quatre mois, sont étendues, « après stérilisation, avec un mélange d'eau el de glycérine, pour obtenir les toxines à divers degrés». Des injections répétées de ce produit (l'auteur n'indique pas

PROPRIÉTÉS BIOLOGIQUES. 557

les quantités employées) auraient produit; des améliorations chez des tuberculeux « ayant encore une certaine vitalité ».

§ 4. — SÉROTHÉRAPIE.

Les tentatives de sérothérapie de la tuberculose n'ont, jusqu'à présent, donné aucun résultat démonstratif.

Richet et Héricourt, injectant à des lapins du sérum de chien avant l'inoculation du Bacille de Koch, ont pu retarder chez ces animaux la marche de l'infection ; malheureusement les succès ne furent toujours que très relatifs et inconstants. Il en fut de même des résultats obtenus par Berlin et Picq par l'injection de sérum de chèvre.

Behring et Niemann échouèrent également avec le sang d'animaux traités par la tuberculine.

Bernheim a essayé sans succès le sang provenant d'animaux inoculés avec des cultures de tuberculose filtrées et non chauffées; les résultats obtenus par Babès et Broca ne furent pas plus concluants.

Maragliano enfin a obtenu un sérum doué de propriétés antitoxiques évidentes. Il injecte à des animaux, à doses croissantes, un mélange de trois parties de tuberculine ordinaire et d'une partie de l'extrait de cultures filtrées sur porcelaine et non chauffées (Voy. p. 555). Après six mois de traitement et quand trois semaines se sont écoulées depuis la dernière injection, les sujets peuvent être saignés; leur sérum détruit in vitro les propriétés toxiques de la tuberculine et protège le cobaye contre ce poison : 1 centimètre cube de sérum préserve le cobaye sain contre une dose mortelle de tuberculine, 2 à 4 centimètres cubes rendent le cobaye tuberculeux capable de supporter sans accidents une dose de tuberculine qui le tuerait en quelques heures; les résultats obtenus dans l'infection par le Bacille de koch ne sont pas encore concluants.

Agglutination. — Arloing a montré qu'on pouvait obtenir des cultures homogènes du Bacille de Koch en le cultivant en bouillon glycérine dans des matras cylindriques à fond plat et fréquemment agités; de telles cultures, âgées d'une dizaine de jours, se prêtent à l'obtention du phénomène de l'agglutination. Elles sont agglutinées à des proportions variant de 1 p. 5 à 1 p. 20 par le sérum des animaux ayant reçu des inoculations de tuberculine ou de bacilles vivants et par le sérum de la plupart des hommes tuberculeux (90 p. 100). Le phénomène ne se produit qu'après quelques heures de contact: on dépose le mélange de sérum et de culture dans de petits tubes de verre, stérilisés et maintenus inclinés et on observe plusieurs fois dans les vingt-quatre heures; la clarification est rare-

^8 LE HACILLE DE LA TUBERCULOSE

ment, totale; le diagnostic, pour être complet, exige l'examen microscopique des amas. Jusqu'à présent le séro-diagnostic de la tuberculose ne semble guère applicable à la clinique.

PSEUDO-TUBERCULOSES.

A côté du Bacille de Koch il existe un certain nombre d'autres microorganismes pathogènes, capables de déterminer dans les tissus la formation de tubercules.

Le Bacille de la lèpre, celui de la morve, donnent lieu à la formation de véritables tubercules. A propos des Streptothricées nous verrons qu'un certain nombre de ces micro organismes produisent des pseudo-tuberculoses chez l'homme et les animaux.

Enfin certaines bactéries peuvent donner lieu à des lésions simulant à s'y méprendre celles que cause le Bacille de Koch; on peut ramener ces pseudo-tuberculoses à deux types : la pseudo- tuberculose zooçjléique de Malassez et Vignal, Chantemesse, etc.; la pseudo- tuberculose bacillaire de Charrin et Roger, Dor, Courmont, Du Gazai et Vaillard, Legrain, etc.

Les descriptions des différents auteurs concordent mal, peut-être se rapportent-elles à un certain nombre de variétés voisines d'un même micro organisme. 11 nous suffira d'avoir signalé l'existence de ces microbes; leur description ne saurait entrer dans le cadre de cet ouvrage.