LES HÉMATOZOAIRES DU PALUDISME

Plasmodium malarise. — Plasmodium vivax. — Laverania malaria.

L'agent pathogène du paludisme a été découvert par Laveran; c'est un parasite polymorphe appartenant à la classe des Sporozoaires.

RECHERCHE

L'Hématozoaire doit être recherché dans le sang des impaludés, de préférence un peu avant les accès ou au début de ceux-ci. Chez certains cachectiques, les parasites se rencontrent dans le sanmême dans l'intervalle des accès, mais, en règle, ils disparaissent

du sang périphérique pendant les périodes d'apyrexie, surtout quand les malades sont soumis à la médical ion quinique. Les corps en croissant résistent mieux que les autres formes à cette médication. La recherche portera de préférence sur le sang frais.

Examen du sang: frais. — On lave le doigt du malade au savon, puis à l'alcool, pour débarrasser la peau de toute matière grasse, et on en pique la pulpe avec une épingle flambée. La première goutte de sang est essuyée avec un linge fin et les suivantes sont recueillies sur des lames de verre scrupuleusement propres (Voy. p. 128). Chaque goutte de sang est immédiatement recouverte d'une lamelle. Quand la goutte de sang est un peu grosse, on presse légèrement sur la lamelle et on essuie le sang qui suinte sur les bords de celle-ci, de manière à obtenir une couche de sang très mince dans laquelle les hématies soient étalées à plat et non disposées en piles. Dans la plupart des cas, il est inutile de border à la paraffine, le sang, en se coagulant sur les bords de la préparation, formant une occlusion suffisante. La préparation doit être examinée avec l'objectif 8 ou 9. Pour étudier les mouvements des éléments parasitaires il est bon de border à la paraffine, afin de supprimer les mouvements que l'évaporation du sang imprime aux hématies.

On peut colorer le parasite vivant; pour cela on dépose sur la lame, à côté de la goutte de sang, une goutte de solution de bleu de méthylène dans une solution aqueuse de chlorure de sodium à 0sr,75 p. 100; on recouvre d'une lamelle, les deux gouttes se mélangent et bientôt les parasites ont absorbé la matière colorante qui n'est pas toxique pour eux; on les distingue alors plus facilement sur le fond incolore (Neveu-Lemaire).

Examen du sang- desséché. — On peut encore utiliser, pour la recherche et l'étude de l'Hématozoaire, des lamelles desangdesséclnVs.

Pour cela on prépare des lamelles de sang selon la méthode ordinaire (Voy. p. 212) ; les lamelles sontséchées à l'air, puis fixées dans la flamme ou mieux par l'alcool-élher. Pour l'examen sans coloration, ces lamelles sont montées à sec par simple application sur une lame porte-objet à laquelle on les fixe en bordant à la paraffine.

Coloration. — Les Hématozoaires peuvent être colorés par divers réactifs, en particulier par le bleu de méthylène, le violet de gentiane, le violet-dahlia et l'hématoxyline de Bœhmer. En général l'examen des préparations colorées est moins instructif que celui des préparations fraîches.

Les lamelles de sang sont préparées comme nous l'avons dit plus haut ; après l'action de la chaleur, il est bon de compléter la fixation en versant sur la préparation quelques gouttes d'alcool-éther.

LES HÉMATOZOAIRES.

1° Bleu de méthylène. — a. Faire agir sur la lamelle pendant trente secondes une solution aqueuse saturée de bleu de méthylène, laver, sécher et monter dans le baume. Les globules rouges ne sont pas colorés, les noyaux des leucocytes et les parasites fixent le bleu, ces derniers restent plus pâles.

b. Faire agir d'abord une solution d'éosine à 0,5 p. 100, puis colorer avec la solution aqueuse de bleu et terminer comme plus haut; on obtient ainsi une double coloration : les hématies sont colorées en rose, les noyaux des leucocytes et les parasites en bleu. Ce procédé est celui que recommande Laveran.

c. Colorer les lamelles par le mélange éosine-bleu de méthylène de Chenzinsky (Voy. p. 218).

2° Violets. — Le violet de gentiane ou le violet-dahlia en solution aqueuse saturée, l'hématoxyline de Bœhmer, sont laissés en contact seulement quelques secondes avec les lamelles; puis on lave, on sèche et on monte dans le baume de Canada. Les hématies ne sont pas colorées; les noyaux des globules blancs et les parasites sont teintés en violet; les grains de pigment sont peu visibles.

Coloration des noyaux. — La coloration des noyaux des hématozoaires est malaisée et exige des procédés spéciaux.

Procédé de Romanowsky . — Le sang desséché sur des lamelles est placé à l'étuve sèche entre 105° et 110° pendant une heure environ; les lamelles sont ensuite plongées, pendant au moins deux heures, dans le bain suivant préparé récemment :

Solution aqueuse saturée de bleu de méthylène (1) 2 volumes.

— d'éosine à 1 p. 100 o —

Au sortir du bain colorant les lamelles sont lavées à l'eau, séchées et montées dans le baume. Les noyaux des hématozoaires se colorent en rouge violet, et leur protoplasma se colore en bleu. Ce procédé échoue parfois.

Procédé de Laveran. — Procédé de choix. — Il est basé sur l'emploi du bleu de Borrel.

Préparation du bleu de Borrel. — Placer dans un flacon de 150 centimètres cubes environ de capacité quelques cristaux d'azotate d'argent et 50 centimètres cubes d'eau distillée; après dissolution remplir le flacon avec une solution de soude, agiter. Le précipité noir d'oxyde d'argent est soigneusement lavé à plusieurs reprises à l'eau distillée; la dernière eau de lavage décantée, on la remplace par une solution aqueuse saturée de bleu de méthylène, on agite à plusieurs reprises, laisse sept à huit jours en contact, puis on décante le liquide qui constitue le bleu de Borrel.

Les lamelles de sang desséché sont fixées par un séjour d'une

(1) Employer le bleu médicinal de Hôchst et l'éosine soluble à l'eau.

heure dans l'alcool absolu, puis elles soul placées dans Ja solution colorante suivante préparée au moment du besoin :

Bleu de liorrel (I) 1 centimètre cube.

Solution aqueuse d'éosine à 1 p. 100. . . 5 centimètres cubes, lîau distillée 4 —

Mélanger avec soin; les solutions d'éosine et de bleu sont filtrées au moment où l'on fait le mélange; celui-ci ne doit pas être filtré.

Le mélange est placé dans des verres de montre, les lamelles sont disposées à la surface du liquide, la face enduite en bas, de manière à ce qu'elles surnagent pendant que la coloration s'opère. Après un contact plus ou moins long avec le bain colorant (cinq à dix minutes pour l'Hématozoaire du paludisme dans les lamelles récemment préparées; plus longtemps pour les lamelles anciennes; plusieurs heures pour les Hématozoaires des oiseaux), les lamelles sont lavées à grande eau, puis soumises pendant environ une minute à l'action d'une solution aqueuse à 5 p. 100 de tannin. Enlin les lamelles sont lavées de nouveau à l'eau distillée, séchées et montées dans le baume.

Avant de monter dans le baume, il est bon d'examiner la préparation à sec ; si la coloration est trop intense ou s'il existe un dépôt abondant, on lave à l'alcool absolu.

Les hématies sont colorées en rose et les noyaux des leucocytes en violet foncé. Les noyaux des Hématozoaires se colorent en violet ou en rouge violacé, leur protoplasma se teinte en bleu pâle.