PRÉLÈVEMENT ET TRANSPORT DE L'ÉCHANTILLON
col de façon à obtenir une effilure coudée longue de 5 à 6 centimètres. L'effilure restant ouverte, on porte le matras dans la flamme de la lampe d'émailleur et on le stérilise en le chauffant fortement; du même coup l'air contenu dans l'appareil est expulsé, on scelle l'extrémité effilée avant que le matras n'ait commencé à se refroidir. Après refroidissement on entoure la partie inférieure du matras d'un cercle de plomb maintenu par des fils de fer et destiné à produire l'immersion; une longue corde, C, fixée à l'appareil permet de le descendre dans le puits. Un fil métallique mince, f, est enroulé et fixé autour de l'extrême pointe de l'effilure du matras; ce fil doit être assez long pour que l'opérateur en tienne constamment une extrémité en main, l'appareil étant immergé (fig. 277).
Pour faire la prise, l'opérateur, tenant la corde et le fil métallique, descend le matras dans le puits ; quand l'appareil est arrivé à la profondeur désirée, l'opérateur tire brusquement sur le fil métallique et brise ainsi l'effilure : l'eau se précipite dans le matras, il ne reste plus qu'à remonter celui-ci et à sceller l'effilure brisée dans la flamme d'une lampe à alcool.
Appareils divers. — Il existe une grande variété d'appareils permettant le prélèvement de l'eau à une profondeur déterminée ; le matras de Miquel suffit le plus souvent ; nous citerons les modifications de G. Roux, Russell, Ogier; certains appareils, tels que celui de J.-H. Guillemin, assurent l'occlusion automatique du flacon aussitôt après son remplissage.
Transport. — Les germes se multipliant très rapidement dans l'eau à la température ordinaire, il importe que l'échantillon soit placé pendant lout le temps qui s'écoulera jusqu'au moment de l'analyse dans des conditions empêchant cette multiplication; on y parvient en maintenant l'échantillon aux environs de 0° ; quand le laboratoire est éloigné, on utilisera de préférence le mode d'emballage suivant :
La fiole contenant l'échantillon est placée dans un étui métallique où elle doit entrer à frottement doux (un étui semblable à ceux qui contiennent le sulfate de quinine, certains vésicatoires, etc., convient li és bien) ; pour plus de sécurité, onessure l'adhérence du couvercle et du corps de l'étui à l'aide d'une bague de caoutchouc disposée en couvre-joint. — L'étui ainsi préparé est placé dans une deuxième boite métallique (une boite à biscuits Palmers convient très bien) que l'on emplit de glace concassée en gros fragments; la boite métallique elle-même est placée dans une caisse de bois de plus grandes dimensions, qui reçoit, autour de la boîte métallique, de la sciure de bois très modérément tassée. Ce dispositif permet à l'échantillon de rester à la température de la glace fondante pendant vingtquatre à soixante-douze heures, suivant la saison et la quantité de glace employée ; l'expédition au laboratoire devra toujours être faite par les voies les plus rapides.
On peut se passer de la deuxième boite métallique et se contenter
d'entourer l'étui d'une certaine quantité de glace et de verser autour de la sciure de bois ; il faut alors une très grande quantité de sciure pour absorber l'eau de fusion de la glace.
Renseignements. — A chaque envoi d'eau on doit joindre certains renseignements destinés à éclairer l'expert et à le guider dans son appréciation ; nous donnerons comme exemple le questionnaire en usage dans les laboratoires du service de santé militaire :
Renseignements pour l'analyse de Veau de
1° Autorité qui a prescrit l'analyse.
2° Causes qui motivent l'analyse (épidémie de , source à capter,
appréciation d'une eau de boisson ).
3° Provenance de l'échantillon (source, puits, galerie filtrante, citernes,
réservoirs, dire la profondeur du puits, de la citerne, du réservoir
et la hauteur do l'eau au moment du prélèvement).
4° Point où l'échantillon a été recueilli (à l'origine d'une source ou au robinet d'une canalisation? dans un puits ou à la pompe qui le
dessert? ); — ne jamais recueillir le premier jet d'un robinet ou d'une
pompe. — Si l'échantillon a été prélevé dans une rivière, un puits, un
réservoir , dire s'il provient de la surface ou du fond ou d'un point
intermédiaire. Indiquer la date du dernier nettoyage des citernes ou réservoirs, dire s'il existe des poussières à la surface, des boues au fond.
5° Y a-t-il eu des chutes de pluie ou des fontes de neige dans les jours qui ont précédé le prélèvement de l'échantillon ?
L'eau est-elle devenue trouble? Le niveau de l'eau est-il supérieur ou inférieur au niveau normal ?
6° Causes de souillures permanentes ou accidentelles auxquelles l'eau paraît exposée.
7° Usages auxquels l'eau est destinée (boisson, cuisines, lavabos, abreuvage des chevaux ).
8° L'eau est-elle bue sans épuration préalable? Indiquer, s'il y a lieu, l'appareil d'épuration employé.
90 Température ambiante au moment du prélèvement de l'échantillon.
10° Température de l'eau au mé\ne moment.
11° Jour et heure du prélèvement.
12° Observations diverses.
Article 11. — ANALYSE.
g jer. NUMÉRATION DES GERMES.
On a proposé de très nombreux procédés de numération des germes de l'eau. Les uns (Miquel) sont basés sur la méthode d'isolement par dilution en milieux liquides (Voy. p. 82); les autres utilisent la méthode d'isolement sur plaques de gélatine (méthode de Koch). Nous ne pouvons entreprendre l'étude et la critique de ces diverses méthodes; nous décrirons avec soin les procédés que nous employons ordinairement.
ANALYSE
le recouvre, puis
Règles générales. — Dans la numération des germes de l'eau, on adopte généralement comme unité de volume le centimètre cube : on dit qu'une eau contient, par exemple, 50000 germes par centimètre cube.
La numération s'opérant toujours en milieux aérés, on ne tient pas compte des anaérobies ; quand on énonce le nombre de germes que contient une eau, on sous-entend toujours le mot aérobies. On pourrait, en utilisant les méthodes d'isolement des anaérobies, se renseigner également sur le nombre de ces microbes dans une eau, mais celte opération, grosse d'ailleurs de difficultés (présence des anaérobies facultatifs, etc.), n'est pas entrée dans la pratique.
On ne s'adresse jamais, pour la pratique de la numération, à un centimètre cube d'eau : cette quantité d'eau contient un trop grand nombre de microbes, les plaques seraient rapidement envahies et l'opération serait interrompue; on opère sur une fraction de centimètre cube et l'on ramène ensuite le nombre obtenu à l'unité de volume.
A. Procédé de la dilution. — 1<> Le goulot de la fiole contenant l'échantillon est débarrassé de la cire qui passé dans la flamme du bec de Bunsen; avec un tire-bouchon flambé on soulève avec précaution le bouchon de façon à pouvoir l'enlever facilement par la suite à l'aide de deux doigts (1).
2° Préparer sur la table de travail :
Une pipette graduée de 10 centimètres cubes;
Une pipette graduée de 2 centimètres cubes;
Un compte-gouttes normal, donnant 20 gouttes au centimètre cube;
Tous ces instruments ont été flambés et leur grosse extrémité est bouchée à l'ouate ; Un verre à pied, couvert de papier et flambé ; Un tube d'eau stérilisée ;
Plusieurs tubes de gélatine stérilisée et liquéfiée au bain-marie; Plusieurs fioles de Gayon, bouchées à l'ouate et stérilisées (fig. 278).'
(I> Avant de déboucher ln fiole, l'agiter pour établir fhomogéuéilé du liquide et mélanger "e dépôt qui a pu se produire au fond. 5
Fig. 278. — Fiole de Gayon.
3° Avec les précautions ordinaires, on prélève avec la grande pipette 9 centimètres cubes d'eau stérile, que l'on porte dans le verre flambé.
Avec la pipette de 2 centimètres cubes, on prélève ensuite 1 centimètre cube de l'eau à analyser et on l'ajoute aux 9 centimètres cubes d'eau stérile; on mélange avec l'extrémité de la pipette. On a ainsi dilué au dixième l'eau à analyser.
4° On flambe le col de la fiole de Gayon, on enlève le bouchon d'ouate et avec le compte-gouttes normal on laisse tomber dans la fiole deux gouttes du mélange pris dans le verre. Ces deux gouttes représentent un dixième de centimètre cube du mélange, c'est-à-dire un centième de centimètre cube de l'eau à analyser.
5° On saisit un tube de gélatine liquéfiée (la température de la gélatine doit être telle que le tube puisse très aisément être conservé dans la main), on en flambe l'orifice eton verse rapidement le contenu dans la fiole de Gayon. On replace le bouchon d'ouate sur la fiole, puis on communique à celle-ci des mouvements d'oscillation pour bien mélanger les gouttes d'eau et la gélatine; cela fait, on dispose la fiole sur un plan horizontal et froid où la gélatine ne tarde pas à faire prise .
On a en définitive opéré un isolement sur plaque de gélatine por-. tant sur un çentième de centimètre cube de l'eau à analyser.
6° Les colonies ne tardent pas à se développer sur la gélatine ; chacun des germes contenus dans l'eau donne naissance à une colonie : compter ces colonies sera compter les germes contenus dans la gouttelette d'eau ensemencée. Chaque jour on inspecte la fiole en la retournant defaçon à la voir par sa face plane ; les colonies apparaissent par transparence à travers le fond de l'appareil. Si le troisième jour, par exemple, on note douze colonies, on écrira sur la feuille d'expérience :
3c jour 5 août 12 colonies.
Pour ne pas être exposé à compter deux fois les mêmes colonies, on les marque sur le fond de la fiole, au fur et à mesure de la numé ration, d'un point d'encre fait avec la plume à écrire.
Si le lendemain (quatrième jour), à côté des douze colonies marquées à l'encre, on en trouve huit nouvelles, la feuille d'analyse portera :
3« j0U|. 5 août 12 colonies.
Si le cinquième jour ont apparu dix colonies, on ajoute :
gt jour 7 août 30 colonies (20 -f 10).
La numération est d'ordinaire terminée du quinzième au ving-
ANALYSE. 657
lième jour; à cette époque aucune colonie nouvelle ne se développe jplus. Supposons que l'on trouve alors :
20" jour 22 août' 64 colonies,
■ on obtiendra le nombre de germes aérobies par centimètre cube ■en multipliant par 100 le chiffre 64, soit
L'eau soumise à l'analyse contient donc 6 400 germes aérobies par centimètre cube.
Il est bon de préparer, pour un même échantillon, plusieurs fioles de 'Gayon que l'on numérote 1, 2, 3, etc. On fait la moyenne des résultats fournis par chaque opération et on obtient ainsi un chiffre beaucoup plus voisin de la réalité. Il arrive d'ailleurs fréquemment que les résultats obtenus avec chaque fiole soient les mêmes à un très petit nombre de bactéries près.
Mais, dans le cas que nous venons d'étudier, nous avons supposé que la liquéfaction de la gélatine ne venait pas entraver la numération. Il n'en est malheureusement pas ainsi le plus souvent; les eaux contiennent fréquemment, en proportion notable, des bac- • téries liquéfiantes, si bien que dès les premiers jours les plaques de gélatine peuvent être envahies par la liquéfaction : la numération devient alors impossible. On doit continuer la numération tant que la plaque n'est pas totalement envahie, puis on note la date de la liquéfaction. Si nous trouvons par exemple :
2e jour 26 colonies.
5* — Liquéfaction totale.
nous formulons ainsi les résultats de l'analyse :
10 200 (102 X 100) germes aérobies par centimètre cube ; ce chiffre est de beaucoup inférieur à la réalité, la liquéfaction de la gélatine ayant interrompu la numération dès le cinquième jour.
Si la numération avait été interrompue seulement vers le huitième jour, on écrirait :
10 200 germes aérobies par centimètre cube; ce chiffre est inférieur à la réalité, la liquéfaction de la gélatine ayant interrompu la numération le huitième jour.
La phrase restrictive sera ajoutée toutes les fois que la liquéfaction sera survenue avant le dixième jour environ.
Remarque. — Beaucoup d'eaux renferment, à cùté des bactéries, des moisissures qui se développent sur les plaques; on comptera
Bb»son. — Teçkn. microb., 2e edit. 42
ces moisissures à pari,, on dira par exemple qu'une eau contient :
I 256 gennes aérobies et 300 moisissures par centimètre cube.
B. Procédé de la pipctlc au 1 /50° de centimètre cul>e. — La méthode des dilutions a l'inconvénient d'être un peu longue et de multiplier les causes de souillure entre des mains peu expérimentées, aussi lui préfère-t-on souvent ce procédé, beaucoup plus expéditif.
On utilise des pipettes fabriquées par Alvergniat, très soigneusement jaugées et donnant environ 50 gouttes au centimètre cube; les difficultés de la construction ne permettent pas d'obtenir des pipettes donnant toutes exactement 50 gouttes, certaines donneront 48, 52, 54 gouttes au centimètre cube, mais chacune d'elles porte gravé sur le verre le nombre exact des gouttes qu'elle fournit au centimètre cube.
Supposons que nous ayons une pipette donnant 52 gouttes au centimètre cube; après l'avoir flambée soigneusement, nous y aspirons un peu d'eau à analyser et nous laissons tomber une goutte de cette eau directement dans la fiole de Gayon; nous ajoutons la gélatine et nous opérons la numération comme plus haut, à partir du temps 5.
En multipliant par 52 le chiffre des colonies développées dans la fiole, on obtient le nombre des germes aérobies par centimètre cube; si nous avons compté 96 colonies, nous aurons :
96X52 = 4992 germes aérobies par centimètre cube.
II importe de faire toujours deux ou trois numérations et de prendre une moyenne,
