PROCÉDÉS PAR BARBOTEMENT

L. Procédé de Straus et Wurtz. - Un cylindre de verre porte à son extrémité inférieure un petit appendice qui reçoit 10 centimètres cubes de gélatine liquéfiée, à la surface de laquelle on place quelques gouttes d'huile (fig. 283). '

La partie supérieure du cylindre porte une tubulure latérale munie d'un tampon d'ouate et un orilice central rode, obture hermétiquement par un tube de verre dont l'extrémité inférieure plonge jusqu'au fond de l'appendice à gélatine et dont l'extrémité supérieure, se terminant au dehors, est munie d'un tampon d ouate, un

PROCÉDÉS ACTUELLEMENT EMPLOYÉS

stérilise l'appareil à l'autoclave. Pour l'usage, on plonge l'appendice inférieur dans de l'eau à 40° environ, pour liquéfier la gélatine, on relie la tubulure latérale à un aspirateur et on enlève la bourre d'ouate qui obturait le tube central. L'air aspiré descend par le tube central et vient barboter dans la gélatine où il se dépouille de ses germes (la couche d'huile empêche la gélatine de mousser pendant l'opération). Quand on a fait passer 10 litres d'air, on arrête l'aspiration. En soufflant doucement par la tubulure latérale, on fait monter la gélatine plusieurs fois dans le tube centrai pour le laver ; enfin on prépare des plaques avec la gélatine.

Cet appareil est très commode, mais beaucoup de germes s'arrêtent dans le tube d'arrivée qui est très long et présente des irrégularités, aussi les résultats obtenus ne sont-ils pas très rigoureux ; de plus, on ne peut opérer que sur une petite quantité d'air.

II. Procédé de Miquel. — Un ballon Pasteur porte une tubulure centrale descendant jusqu'au fond de sa panse et deux tubes latéraux situés cà la partie supérieure. Un capuchon de verre rodé obture le lube central; une des tubulures latérales est bouchée à l'ouate, l'autre est effilée et fermée à la lampe, elle sert à la répartition du liquide

Fig. 283. - Appareil de Fig. 284. Ballon de Miquel.

Straus et de Wurtz.

quand l'opération est terminée (fig. 284). On place dans le ballon 30 centimètres cubes d'eau et on stérilise le tout à l'autoclave. Pour l'usage, on relie à l'aspirateur la tubulure bouchée à l'ouate et on

enlève le capuchon de verre qui couvre la tubulure centrale Pendant l'aspiration, l'air barbote dans l'eau du ballon; quand l'aspiration est terminée, on fait monter plusieurs fois le liquide dans la tubulure centrale pour la laver et recueillir les germes qui s'y sont déposés, puis on brise l'extrémité de la tubulure effilée et on répartit le liquide dans un grand nombre (trente à cinquante) ballons de culture contenantdu bouillon. La plongée du tube dans le liquide n'est pas suffisante et beaucoup de germes échappent à l'observation.

111. Procédé de Laveran. — Procédé de choix. — Laveran emploie un dispositif très simple, peu fragile et qui donne des résultats très exacts. Deux tubes de verre fermés à leur extrémité inférieure sont réunis au niveau de leur tiers supérieur par une tubulure horizontale. Chacun des tubes verticaux est obturé à sa partie supérieure par un bouchon de caoutchouc traversé par une pipette qui plonge jusqu'à la partie inférieure de l'appareil. Un des tubes porte un trait gravé sur le verre et délimitant une capacité de 10 centimètres cubes à partir du fond du tube ; une des pipettes est graduée en dixièmes de centimètre cube; l'orifice supérieur de chaque pipette est obturé par un tampon d'ouate ; dans le tube jaugé on place 10 centimètres cubes d'eau sucrée à 1 p. 100, puis l'appareil est stérilisé à l'autoclave.

Pour l'usage, on enlève le tampon de coton garnissant la pipette qui plonge dans l'eau sucrée et on met l'autre pipette en communication avec l'aspirateur. L'air aspiré barbote dans l'eau sucrée, passe dans la première branche, s'engage dans le tube horizontal, descend dans la deuxième branche et s'échappe par la pipette en communication avec l'aspirateur. On peut faire passer ainsi une très grande quantité d'air dans l'appareil.

Le barbolement terminé, on aspire doucement l'eau sucrée dans la pipette d'entrée, de manière à la laver, puis on fait passer le liquide dans la deuxième branche et dans la deuxième pipette à plusieurs reprises différentes pour recueillir les germes qui ont pu s'y déposer; il ne reste plus alors qu'à prélever l'eau sucrée à l'aide de la pipette graduée pour la répartir dans les différents milieux de culture (plaques de gélatine, plaques de gélose).

Si, p r exemple, il est passé 200 litres d'air dans l'appareil et que

Fig. 285. — Tube de Laveran.

PROCÉDÉS ACTUELLEMENT EMPLOYÉS

l'ensemencement en plaque de gélatine d'un centimètre cube d'eau sucrée donne douze colonies, nous avons :

200 litres d'air contiennent 12 X 10 germes aérobies. 12 X 10 X 10 000

1 mètre cube clair contient — = 6 000 germes aérobies.

. Cette méthode présente l'avantage de fournir un matériel d'ensemencement abondant, représentant une grande quantité d'air et permettant la préparation de nombreuses plaques d'isolement et aussi la pratique des recherches spéciales des microbes pathogènes (1).

v (1) Voyez ce qui a été dit à propos de chacun de ces microbes. La recherche du Bacille tuberculeux devra toujours être faite par la méthode des inoculations au cobaye.