MILIEUX A BASE DE GÉLOSE
La gélose ou agar-agar est une algue de l'océan Indien et se trouve dans le commerce sous forme de lames fibrillaires sècbes.
dette substance a la propriété de former avec l'eau, par la cuisson, des gelées résistantes pouvant supporter, sans se liquéfier, les températures inférieures à + 60". La gélose sera donc substituée à la gélatine toutes les fois qu'on désirera obtenir un milieu solide pouvant supporter des températures supérieures à -f- 25°.
La préparation des milieux gélosés se trouve rendue laborieuse parce fait que l'agar-agar forme avec l'eau une gelée épaisse, se prenant facilement en masse, très difficile à filtrer. On tourne cette difficulté en modifiant les propriétés de la gélose par une cuisson prolongée ou par des procédés chimiques (action des acides).
De plus les gelées d'agar-agar seraient toujours l roubles si on n'avait soin de les clarifier au moyen de l'albumine; même après cette opération, elles restent légèrement opalescentes.
GÉLOSE ORDINAIRE.
Procédé recommandé. — C'est le produit obtenu par ce procédé que nous aurons en vue chaque fois que nous parlerons de gélose.
lo Préparer comme il a été dit page 28 un bouillon de bœuf peptonisé, s'arrêter au temps 5 inclus.
2° Ajouter alors à ce bouillon 15 à 20 grammes d'agar-agar (1,5 à 2 p. 100) coupé en menus fragments.
L'agardoit avoir préalablement trempé dans l'eau froide pendant une heure ou deux, puis avoir été exprimé dans un linge.
3° Porter le mélangea 100° dans une casserole émaillée et le maintenir à cette température, en ayant soin de remuer constamment, pendant le temps nécessaire à la dissolution de l'agar environ trente minutes).
4° Vérifier la réaction du liquide, réaction qui doit toujours être
neutre ou faiblement alcaline (la gélose se transforme en sucre quand elle est chauffée en milieu acide).
o° Laisser refroidir à 55°ou 60° et ajouter un blanc d'œuf délayé et battu dans 100 grammes d'eau. Bien mélanger le tout.
6° Porter le mélange à l'autoclave à 120° pendant au moins une heure. L'albumine se coagule en formant un magma qui entraine les impuretés.
7° Au sortir de l'autoclave jeter le liquide sur un liltre en papier Chardin mouillé et placé dans l'entonnoir à filtration chaude; couvrir l'entonnoir avec une plaque «L1 verre.
8° A mesure que le liquide filtré s'écoule de l'entonnoir, le recueillir dans un vase à saturation préalablement chauffé et le répartir aussitôt dans des tubes. Opérer très rapidement pour éviter la solidilication ; se servir d'un entonnoir pour faire la répartition afin de ne pas mouiller l'orifice des tubes. Verser 8 à 10 centimètres cubes par tube.
9o Stériliser à 115° pendant vingt minutes. Pendant que les lubes sont encore chauds, les disposer sur un plan incliné ou sur le plateau figuré page 53 afin que la gélose se solidifie en surface oblique ; laisser les tubes environ trente-six heures dans cette position.
Pour que la miuce couche de gélose ne se détache pas de la paroi du tube, quand on place celui-ci verticalement, on a recommandé d'ajouter au milieu une petite quantité de gomme arabique dissoute dans l'eau; nous déconseillons cette pratique qui communique toujours au milieu un trouble assez prononcé et qui est inutile ; si l'on exécute de point en point le procédé que nous indiquons ou obtient une gélose suffisamment adhérente.
Fig. 25. - Tube tic gélose inclinée.
Variante. — Bien que le procédé ci-dessus donne d'excellents résultats, on rend la filtration encore plus facile en usant de l'artifice suivant :
L'agar avant d'être ajouté au bouillon (temps 2) est mis à tremper pendant vingt-quatre heures dans une solution d'acide chlorhydrique à 0 p. 100 (eau, 500; HG1, 30). Au bout de ce temps on lave l'agar à grande eau, puis on le couvre avec une solution d'ammoniaque liquide à 5 p. 100 (eau, 500; ammoniaque, 25). Après quelques heures de contact, laver l'agar à grande eau, exprimer dans un linge et continuer la préparation comme nous l'avons dit.
La gelée ainsi oblenue est peu adhérente, aussi déconseillonsnous l'emploi de cette variante,
MILIEUX IJIi CULTURE
GÉLOSE DE MALM.
Au bouillon de Liebig ou de Cibils (Voy. p. 32) ajouter 2 p. 100 dagar. Opérer comme pour la gélose ordinaire.
