DISSÉMINATION A LA SURFACE DES MILIEUX SOLIDES
Quand on désire isoler les microbes contenus dans un corps solide tel qu'une fausse membrane, un crachat visqueux, etc. , on badigeonne avec une parcelle de ce corps la surface d'un milieu nutritif solide disposé soit en plaque, soit en tube incliné. Ce procédé, classique aujourd'hui pour l'isolement du bacille diphtéritique dans les fausses membranes, permet d'utiliser pour l'isolement des milieux nutritifs non liquéfiables par la chaleur : pomme de terre, sérum , par exemple.
En pratique on peut opérer de deux façons différentes :
A. Ensemencement en strie. — Nous prendrons comme type un isolement sur plaque de gélose.
Instrumentation. — Ose de platine avec fil moyen ou fort ;
Un tube de gélose ;
Une boîte de Pétri stérilisée.
Opération. — 1° Liquéfier la gélose et la couler dans la boîte de Pétri en observant les règles formulées plus haut.
Laisser la gélose se solidifier complètement.
2° Prendre alors avec l'ose une parcelle du produit à ensemencer. Soulever le couvercle de la boîte de Pétri, porter l'ose sur la surface de la gélose et couvrir celle-ci d'une série de stries rectilignes éloignées de quelques millimètres l'une de l'autre, sans recharger l'ose.
A chaque strie, l'ose abandonne un peu de la semence qu'elle porte avec elle, on conçoit que bientôt les stries ne seront plus ensemencées qu'avec un très petit nombre de microbes.
3° La plaque étant portée à l'étuve à 37°, les colonies se développent très abondantes au niveau des premières stries, de plus en plus rares et bien isolées au niveau des dernières.
B. Ensemencement en surface. — Nous décrirons un isolement sur sérum incliné ; opérer de même sur gélose, sur pomme de terre, etc.
Instrumentation. — Ose forte aplatie en palette ; Trois tubes de sérum solidifié incliné.
Opération. — 1° Prélever avec l'ose une petite quantité du produit à ensemencer.
Fig. 66. — Isolement sur plaque par la méthode des stries.
M ISOLEMENT DES GEMMES
2° Déboucher purement un tube de sérum, porter l'extrémilé de l'ose sur la partie la plus reculée de la surface du sérum, puis la ramener vers l'orifice du tube en la promenant transversalement de manière à badigeonner la totalité de la surface du sérum (tube [).
:j° Reporter immédiatement l'ose, sans la recharger, sur le second lube et opérer comme en 2 (tube 11).
4° Répéter l'opération sans recharger l'ose, sur le troisième tube (III |.
U° Porter les tubes à L'éttive à 37°.
Au cours de ces opérations l'ose s'essuie peu à peu et si; dépouille progressivement des microbes dont elle était chargée: sur le lube I se développeront des colonies nombreuses et confluentes, mais les colonies seront de plus en plus rares et bien isolées sur le sérum des tubes II et lll, c'est sur ces deux derniers tubes qu'on les observera.
Article II. — PROCÉDÉS BIOLOGIQUES.
Les méthodes d'isolement basées sur les propriétés biologiques demicrobes ne peuvent être utilisées que lorsqu'on se propose de rechercher et d'isoler un germe donné; on utilise alors certaines propriétés, connues à l'avance, de ce germe pour placer celui-ci dans des conditions propices à son développement et défavorables à la culture des autres microbes qui existent avec lui dans la semence.
La séparation des aérobies et des anaérobies stricts rentre dans cette catégorie de procédés d'isolement : ici on utilise la propriété qu'ont les aérobies de ne pouvoir se passer d'oxygène libre pour les éliminer dans les cultures faites à l'abri de l'air (chap. vi ).
Nous décrirons les procédés les plus fréquemment utilisés.
S 1er, DESTRUCTION PAR LA CHALEUR DES GERMES
