COEXISTANTS

Les bactéries non sporulées périssent rapidement quand elles sont exposées en milieu liquide à une température voisine de 00°; au contraire les microbes pourvus de spores supportent pendant plusieurs minutes des températures de 80° à 100° et même 105°.

Il sera facile dès lors de séparer une bactérie sporulée d'un mélange où entrent des microbes asporulés : il suffira de soumettre pendant quelques minutes le mélange à une température comprise, suivant la résistance de la spore à isoler, entre 803 et 10:->°, puis de l'ensemencer dans un tube de bouillon. C'est ainsi qu'on peut purifier une culture sporulée impure de B. anthracis en l'exposanl peu-

PROCÉDÉS BIOLOGIQUES

dant cinq minutes à une température de 80° à 85° ; l'infusion de foin, portée dix minutes à l'ébullition, donnera une culture pure du Bacillus subtilis; une infusion préparée de même avec des fragments de pomme de terre, mise à l'étuve pendant deux ou trois jours puis exposée pendant cinq minutes à une température de 105°, donnera une culture pure de B. de la pomme de terre, etc.

Pour utiliser ce procédé, il faut avoir soin de toujours opérer avec un mélange liquide, les microbes desséchés ou protégés par des particules solides résistant beaucoup mieux à l'action de la chaleur ; de plus il faut veiller à ce que toutes les parties de la culture soient soumises à la température choisie, sans quoi quelques bactéries pourraient échapper à l'action destructive de la chaleur et l'opération ne donnerait aucun résultat.

On opérera de la façon suivante :

1° Préparer une pipette Pasteur étranglée au-dessous de l'ouate (Voy. p. 70). Cette pipette doit être de petit diamètre.

2° Aspirer la culture de façon à remplir la pipette jusqu'à l'étranglement, sceller dans une petite flamme l'eflilure et l'étranglement.

3° Immerger complètement le tube clos ainsi préparé dans unbainmarie porté à la température choisie, maintenir cette température cinq à dix minutes suivant le cas, puis retirer le tube (pour les températures supérieures à 100° se servir de l'autoclave).

4° Essuyer le tube, flamber et briser entre les mors d'une pince une de ses extrémités, aspirer purement un peu de son contenu dans une pipette stérile et pratiquer les ensemencements définitifs.