CULTURE DES MICROBES ANAEHORI KS

G. Procédé du flacon. — Procédé recommandé. Ce procédé permet, comme le précédent, d'opérer sur de grandes quantités de bouillon et rend très aisés les prélèvements de culture.

I" Choisir un flacon de 1 à 2 litres de capacité et dont le col

admette un bouchon de caoutchouc à deux trous de moyen calibre. Le remplir aux deux tiers de bouillon (fig. 76).

2° Dans un des trous du bouchon, engager un tube de verre, A, recourbé à angle droit, dont une branche plonge de quelques centimètres dans le flacon et dont l'autre, extérieure, est munie d'un tampon de coton entre deux étranglements.

L'autre trou reçoit un tube I!

dont une branche plonge jusqu'au fond du flacon et dont l'autre, extérieure, se termine par une effilure solide, fermée au chalumeau.

3° Le bouchon étant bien assujetti, stériliser l'appareil à 115° pendant vingt minutes. Chauffer lentement pour ne pas briser le flacon.

4° L'appareil refroidi, bien assurer le bouchon, recouvrir les joints du flacon et du bouchon et ceux du bouchon et des tubes avec de la cire Golaz ; dessécher le tampon d'ouate du tube A en chauffant légèrement le tube à son niveau avec une flamme de gaz.

5° Pour ensemencer : flamber, puis briser avec une pince La pointe de l'effilure B ; plonger l'orifice dans le tube contenant la semence, aspirer par A pour faire pénétrer quelques gouttes de semence dans le bouillon du flacon, puis refermer l'effilure B au chalumeau.

6° Relier A à la trompe à eau ; faire le vide tout en immergeant les deux tiers inférieurs du flacon dans de l'eau à 35°-40° ; pratiquer plusieurs lavages à l'hydrogène.

7° Sceller au chalumeau, sous le vide, l'étranglement de la branche A au delà du tampon d'ouate. Porter à l'étuve.

Au bout de deux à trois jours, les gaz produits par la végétation du microbe anaérobie s'accumulent dans le flacon et gênent la continuation de la culture; il est bon de briser alors avec une forte pince l'extrémité scellée