ENSEMENCEMENTS PAR PIQURE

A. Procédé du tube à essai. — Procédé recommandé. — a. Gélatine. — 1° Prendre un tube de gélatine stérilisée et porter la gélatine à Tébullition en procédant avec précaution pour éviter la production demousse et les projections; maintenir l'ébullition pendant plusieurs minutes.

Avant l'ébullition, on peut ajouter à la gélatine quelques gouttes de la solution de sulfo-indigotate de soude : le microbe, en se développant, pro voquera la décoloration du milieu.

2o Refroidir rapidement la gélatine ; quand elle est devenue solide, l'ensemencer par piqûre avec le fil de platine tin.

L'ose entraînant toujours un peu d'air avec elle, ou la remplace avantageusement par le dispositif suivant. : on monte le fil de platine sur la paroi d'un tube de verre relié par un tuyau de caoutchouc au générateur d'hydrogène (fig. 78). Pour l'usage, flamber le fil de platine, prélever la semence,

CULTURE DES MICROBES ANAKlinWES.

puis ouvrir lu robinet de l'appareil à hydrogène et pratiquer l'ensemencement dans un courant de ce gaz. Ou évite ainsi toute pénétration d'oxygène.

3° L'énsemencement pratiqué, le tube de gélatine est plongé dans de l'eau très froide el, avec une pipette de Pasteur, on verse à la surface de la gélatine un peu de gélose liquéfiée ; on forme ainsi audessus de la culture un bouchon qui empêche le contact de l'air. Replacer le tampon d'ouate du tube.

On peut utiliser, au lieu de gélose, pour former \u bouchon protecteur, de l'huile, de la vaseline liquide, etc., préalablement stérilisées.

b. Gélose. — Opérer comme pour la culture en gélatine.

B. Absorption de l'oxygène par une < nlfnre aérobie (Roux). — Opérer comme dans le procédé ci-dessus; dès que Je bouchon de gélose esf solidifié, ensemencer sa surface avec une culture de Bacillus xubtilis; ce microbe, très aérobie, absorbe l'oxygène du tube et la culture anaérobie se développe au-dessous, à l'abri de ce gaz.

Pour faire une prise dans la culture anaérobi< sans la souiller par le Bacillus subtilis, laver extérieurement le tube au sublimé, puis le couper, par le procédé ordinaire, au niveau de la partie médiane de la culture ; la partie inférieure du tube étant détachée, on peut y puiser purement le microbe anaérobie.

de Roux. — 1° Préparer une pipette de Roux

Fig. 7S. — Use moulée sur tube creux pour l'ensemencement des cultures anaérobies.