I. Méthode de Loei eleh

Elle est basée sur l'emploi d'un mordant et d'une solution colorante.

1" Mordant. — A 10 centimètres cubes d'une solution aqueuse de tannin à 20 p. 100, on ajoute goutte à goutte une solution de sulfate de fer, jusqu'àceque le liquide devienne violet noir. On ajoute 1 centimètre cube d'une solution acjueuse ou alcoolic^ue de fuchsine (le violet de méthyle ou la décoction à 1 p. 8 de bois de campêclie est moins active). Les lamelles étant séchées à l'air, puis passées à la llamme, sont recouvertes d'une couche de mordant et maintenues à une distance de la flamme telle que le liquide fume faiblement ; on laisse encore la lamelle imprégnée de mordant pendant 1 à 1 minute 1/2.

Mais le liquide contenant des bactéries est riche en matières muqueuses, (ui albumine ou en gélatine; on en dilue au préalable une petite quantité

l) a. Prendre, tenir le Gram, ou se colorer par le Gram.

h. Ne pas prendre, ne pas tenir le Gram, signifie se décolorer sous raclion du Gram.

dans l'eau, d'abord dans une goutte d'eau distillée, puis un peu de celle-ci dans une autre, jusqu'à ce qu'on ait un liquide pauvre en matières solides.

11 y a beaucoup de microbes (acidifiants) qui se trouvent mieux de l'addition au mordant d'un alcali (une goutte d'une solution de soude caustique à 1 U/Oi, alors que d'autres (alcalinisants) réclament une réaction acide. On recherchera au préalable le degré convenable d'alcalinité ou d'acidité.

2" On lave à l'eau, puis dans l'alcool absolu.

3° Solution roloranie. — Solution saturée de fuchsine dans l'eau d'aniline, neutralisée par l'addition d'un nombre de gouttes d'une solution d'hydrate de soude à 1 0/0, sulYisant pour rendre cette solution transparente. On porte la solution par gouttes sur un couvre-objet, on chauffe une minute jusqu'à production de vapeurs. Quand on juge la teinte suffisante, on lave, et la préparation est prête.