ENSEMENCEMENTS SUR PLAGE

plus exacte : elle permet d'opérer sur l'eau telle qu'elle est en réalité. Notamment, au point de vue de la recherche du bacille typhique et des espèces peu résistantes, elle évite les altérations, môme très faibles, qui peuvent résulter du séjour de l'eau confinée dans un récipient.

Dans ce cas, notre matériel se compose de deux caisses renfermant Tune (fig. 26) :

Un ou deux paniers de cristallisoirs (ou boîtes de Pétri) enveloppés de papier et stérilisés ; chaque panier contient 8 cristallisoirs (diam. =-. 12 cm ; haut. = 2 cm.);

Fig. 26. — Nécessaire pour ensemencements sur place (Ed. Boivjean)

Un support en fil de fer contenant 10 à 20 tubes de gélatine capuchonnés ;

Un casier disposé pour recevoir 4 à 6 pipettes à numération, et un thermomètre sensible gradué en dixièmes de degré ;

Une longue pince à extrémités arrondies, une petite pince à bourre.

L'autre caisse renferme :

Un petit niveau d'eau et quelques petites cales de bois;

Une lampe éolipyle ;

Des fioles stériles, de 160 centimètres cubes, bouchées à l'émeri ;

La masse à prélèvements et le fil métallique;

Un flacon d'alcool, allumettes, etc.

On garnit de glace la boite à réfrigération (boite métallique rectangulaire à couvercle bien plat que Ton dispose horizontalement sur le sol à L'aide de petites cales de bois et en se guidant sur le niveau

.1. ÔGÎEîl ET ED. BÔNJEÀN. I/KAI'. BAC! KRIOLOGÎË.

d'eau placé sur le couvercle). On opère ensuite comme s'il s'agissait de Faire une culture au laboratoire : on fond la gélatine dans les tubes, on la coule dans les cristallisoirs ; Lorsque sa température est au-dessous de 37°, ce dont on peut se rendre compte facilement à la main en louchant le dessous du cristallisoir, on ensemence avec une quantité déterminée de l'eau prélevée directement, ou prise dans une des fioles de 150 centimètres cubes à l'aide d'une pi pelle : lorsque Ton juge l'eau relativement pure, on emploie jusqu'à 1 centi-

Fig. 27. — Matériel bactériologique.

mètre cube et même 2 centimètres cubes : si l'eau parait devoir renfermer un assez grand nombre de germes, on ensemence avec 1/30, 1/15, 1/5 de centimètre cube. Après avoir mélangé intimement l'eau et la gélatine, on place le cristallisoir sur la boîte réfrigérante : lorsque la gélatine est bien solidifiée, on enveloppe le cristallisoir dans son papier stérile et on le replace dans le panier. On fait ainsi 4 à 6 cristallisoirs pour chaque eau.

L'eau de chaque fiole sert ultérieurement à la recherche des germes pathogènes ou suspects sur un volume d'environ 150 centimèlres cubes; ces ensemencements sont effectués au laboratoire.

ENSEMENCEMENTS AU LABORATOIRE EN VUE DE LA NUMÉRATION, DE LA SPÉCIFICATION ET DES RECHERCHES DES GERMES PATHOGÈNES. Voici l'indi-

ENSEMENCEMENTS Al) LABORATOIRE.

cation des différents objets nécessités par les examens bactériologiques des eaux (fig. 27 et 28) :

Fioles Pasteur de 50 centimètres cubes de capacité renfermant 10 centimètres cubes de bouillon (fig. 27, E);

Fioles Pasteur de 250 centimètres cubes de capacité renfermant 100 centimètres cubes de bouillon:

Fioles Pasteur de 50 centimètres cubes renfermant 10 centimètres cubes de solution de peptone ;

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ga. a :^«HHF,f JhL

Fig. 28. — Matériel bactériologique.

Fioles Pasteur de 50 centimètres cubes renfermant 10 centimètres cubes de lait;

Tubes renfermant 10 centimètres cubes de gélatine, droits et inclinés (fig. 28, B);

Tubes renfermant 10 centimètres cubes de gélatine Elsner, droits et inclinés.

Tubes de gélose; de gélatine-artichaut; droits et inclinés, etc.;

Tubes de Roux, avec morceaux de pomme de terre ;

Solution d'acide phénique à 5 p. 100 dans une pipette Dupré (fig. 27, H);

Cristallisoirs doubles, en verre blanc à surface régulière et bien plane (diamètre 12 cm. ; hauteur 2 cm.) (fig. 28, A);

Boîtes de Roux ;

Pipettes à ensemencements (fig. 28, D) ;

Pipettes effilées à numération, donnant de 30 à 50 gouttes par centimètre cube (chiffre indiqué sur une étiquette), enfermées dans un tube de verre bouché avec du coton, le tout stérile;

Table réfrigérante (fig. 27, F) : celle que nous employons a l'avantage

de refroidir rapidement un assez grand nombre de cristallisoirs; elle

se compose d'une tablette en cuivre, très plane, assez épaisse, sous

laquelle est fixé un réservoir de 22 centimètres de hauteur occupant

toute la surface de la tablette. Ce réservoir est alimenté par un

entonnoir latéral, dans lequel on charge de la glace et de l'eau; l'eau

en excès provenant de la fusion de la glace s'écoule par un trop-plein

fixé à l'autre extrémité de latablette, après avoir baigné complètement,

^^ sans interposition de lame d'air isolante, toute

4^ M Bk. la surface intérieure de la tablette;

^^^ fl A Bain-marie pour fusion des tubes de géla-

^^AJ| 1 tine(fig.

H ^P^^^^^i Numérateur à secteur (E. Bonjean) que l'on

^^T ^L Peu^ fabriquer soi-même à l'aide d'un carton

^^ blanc, en traçant des circonférences d'un dia-

Fig. 29. - Numérateur mètre égal à celui des cristallisoirs ou boîtes à secteur. de culture, et en découpant des secteurs d'une

surface représentant 1/20, 1/10, 1/5 de la surface totale des cercles. On fixe le numérateur ainsi préparé sur une feuille noire (fig. 29);

Enfin tout le matériel courant d'un laboratoire de bactériologie bien outillé, par exemple une étuve de Roux réglée à 42°, une autre de 30 à 36°, un microscope avec toute la série des objectifs et oculaires; animaux d'expériences, principalement des cobayes, etc.

Toute la verrerie doit être stérilisée au four à flamber pendant au moins deux heures à 150 degrés.

La bactériologie des eaux exige beaucoup d'ordre et de soin. Nous ne saurions trop attirer l'attention sur la nécessité d'un étiquetage très lisible, très précis de tous les récipients employés.

Tous les milieux de cultures, avant d'être ensemencés, doivent séjourner au moins quarante-huit heures à l'étuve à 25° et y rester stériles. Les plus grandes précautions doivent être apportées dans la préparation de ces milieux, dans leur répartition et stérilisation. Une stérilisation insuffisante des milieux gélatinisés (gélatine ordinaire, Elsner, artichaut, etc.) peut être aussi préjudiciable qu'une stérilisation exagérée : dans le premier cas les tubes cultivent, dans l'autre cas la gélatine ne se solidifie plus et devient infertile même après ensemencement.

Les milieux de culture doivent être conservés à l'abri de la lumière et employés, autant que possible, peu de temps après leur préparation. Généralement leur qualité diminue lorsqu'ils ont été insolés ou lorsqu'ils sont trop vieux.