PRÉPARATION DES MILIEUX DE CULTURE

Enfin, dans toutes les opérations d'ensemencements et d'examen, il faut prendre toutes les mesures possibles pour travailler dans do* endroits calmes et à l'abri ries poussières atmosphériques.

PRÉPARATION DES MILIEUX DE CULTURE. — Bouillon «le boeuf. — On coupe 5 kilogrammes de viande bien dégraissée en fragments que Ton passe ensuite au hache-viande et que l'on introduit dans un vase de grès avec 5 litres d'eau et 80 grammes de sel gris ; on laisse macérer au frais pendant douze heures. On place ensuite le pot de grès dans l'autoclave, et l'on chauffe pendant quatre heures de 60° à 100°, puis une heure à 110°; le bouillon est alors filtré grossièrement sur une toile métallique neuve flambée et le résidu est exprimé à la presse.

On laisse refroidir complètement le bouillon ainsi obtenu, puis on le filtre sur du papier Chardin mouillé ; on ajoute 50 grammes de peptone Defresne, 20 grammes de glycérine, et on complète le volume à 10 litres avec de l'eau ordinaire.

Au moyen rie lessive rie soude diluée, ou d'une solution de carbonate de soude, on alcalinise jusqu'à réaction nettement bleue au papier de tournesol sensible; on chauffe le bouillon vingt minutes dans l'autoclave à 110° et on le filtre sur papier Chardin; il ne reste plus qu'à le répartir dans des vases bouchés à l'ouate (ballons, fioles Pasteur, tubes à essai, etc.) et à stériliser à 110° pendant environ quinze minutes.

Gélatine nutritive. — On dissout, d'une part, 150 grammes de gélatine rie bonne qualité dans 600 centimètres cubes de bouillon, au bain-marie, et d'autre part 10 grammes de sucre et 15 grammes de peptone Defresne dans 200 centimètres cubes de bouillon. On mélange les solutions et on complète le volume à 1 litre avec du bouillon. On alcalinise jusqu'à réaction nettement bleue au tournesol (l'alcalinité correspond à peu près à 1 gr. 5 NaOH par litre); on refroidit vers 35 à 40° et on « colle » à l'aide d'un blanc d'oeuf ; on passe à l'autoclave pendant vingt minutes à 105°, et on filtre sur papier Chardin. La gélatine ainsi préparée est répartie dans des tubes à essai bouchés avec riu coton et stérilisés. Ces tubes, chargés de 10 centimètres cubes de gélatine, sont passés pendant quinze minutes à l'autoclave à 105°, rieux fois, à vingt-quatre heures d'intervalle.

Milieu de Holz. — On prépare avec le suc de pommes rie terre crues fraîchement exprimé une gélatine dont le degré d'acidité est établi de façon que 10 centimètres cubes nécessitent pour leur neutralisation 2,4 à 3,3 centimètres cubes d'un alcali normal-décime (sourie à 4 grammes par litre, ou potasse à 5 gr. 61, ou carbonate de soude à 5 gr. 300 par litre).

On utilise aussi le milieu de Holz, phéniqué à raison de 0,05 d'acide phéniqué p. 100.

Milieu d'Elsner. — On épluche le plus rapidement possible et on passe au hachoir 500 grammes de pommes de terre, en ayant

soin de recueillir la purée obtenue dans 900 centimètres cubes d'eau bouillie, pour éviter le noircissement qui se produirait au contact de l'air. On laisse macérer au frais et à l'abri de la lumière pendant vingt-quatre heures; on filtre ensuite sur papier Chardin.

Dans la moitié du liquide obtenu, chauffé au bain-marie, on dissout 150 grammes de gélatine, puis on refroidit vers + 40D et on ajoute l'autre moitié préalablement neutralisée avec une solution de soude diluée. On fait dissoudre ensuite 10 grammes d'iodure de potassium, et on complète le volume à 1 litre avec de Peau ordinaire. On chauffe vingt minutes à 105°, on filtre sur papier Chardin et on répartit le milieu dans des tubes à essai bouchés au coton et stérilisés. Les tubes, chargés d'environ 10 centimètres cubes de ce milieu d'Elsner, sont ensuite stérilisés deux fois, à vingt-quatre heures d'intervalle, à la température de 105° pendant quinze minutes. — On prépare aussi des tubes inclinés, pour les cultures en stries.

Gélose. — On chauffe à Tébullition 400 centimètres cubes de bouillon dans lequel on a introduit 20 grammes de gélose coupée en petits morceaux.

Lorsque la solution est effectuée, on ajoute 15 grammes de peptone Defresne, 10 grammes de glycérine et on complète à 1 litre avec du bouillon. Les autres opérations sont les mêmes que celles que l'on effectue pour la préparation de la gélatine, c'est-à-dire : alcalinisation, collage au blanc d'œuf, filtration sur papier Chardin, répartition dans les tubes à essais et stérilisation. On prépare des tubes inclinés pour les cultures en stries.

Solution de peptone :

Peptone de bonne qualité et donnant nettement

de l'indol après culture du B. coli 30 grammes.

Eau 1000 —

La solution faite à chaud est filtrée et répartie dans des fioles Pasteur (10 centimètres cubes).

Lait. — Le lait est réparti dans les fioles (10 centimètres cubes) : on stérilise à 105°, en deux reprises espacées de vingt-quatre heures.

Bouillon de panse de porc. — Le bouillon de panse de porc préparé d'après les indications de Louis Martin constitue la meilleure solution de peptone.

Hachis d'estomac de porc 200 grammes.

Acide chlorhydrique pue 10 —

Eau à 50° 1000 —

On maintient à une température de 50°, afin que la pepsine stomacale digère les tissus et les transforme en peptone, pendant douze à vingt-quatre heures : le milieu est très acide et il ne se développe pas de germes. On chauffe à 100° et on filtre au papier Chardin; on