ACTION DES DROGUES SUR LES DIFFÉRENTES ESPÈCES DE BACILLES
Dans les expériences de De La Croix, la nature des bacilles sur lesquels portait l’expérience était restée indéterminée et différentes espèces se trouvaient mêlées sur le même terrain de culture. Aussi Koch a-t-il cherché à étudier l’action des antiseptiques sur une forme définie de microzymas soigneusement cultivés au préalable.
Les bacilles choisis par Koch, pour servir à ses expériences, sont le micrococcus prodigiosus, la bactérie du pus et le bacillus anthracis; les deux premières espèces ne forment pas de spores et leur destruction est par suite relativement facile par les désinfectants, mais il n’en est pas de même du bacillus anthracis qui forme des spores sur lesquels on a pu étudier la puissance des divers désinfectants.
Dispositif des recherches concernant l'action des agents antiseptiques sur la reproduction des bacilles.
Pour assurer la pureté des cultures choisies et éviter leur mélange avec d’autres espèces de bacilles, Koch a eu soin de cultiver les deux premières variétés sur des coupes de pommes de terre au lieu de solution. Sur une des coupes il dépose des types purs de mycrozymas et sur d’autres coupes des mycrozymas semblables soumis à l’action des antiseptiques. Les mycrozymas avaient-ils été détruits par le désinfectant on n’obtenait aucune culture ; d’autres fois on pouvait les reproduire, et la comparaison de cette nouvelle génération avec celle de la culture témoin permettait d’apprécier par son plus ou moins d’abondance, la puissance variable de l’antiseptique.
Pour cultiver le bacillus anthracis, Koch se servit d’un mélange de gélatine et de bouillon, ou de gélatine et de peptone, stérilisés et étendus sur une lame de verre stérilisée et exposée à une chaleur suffisante pour amener la solidification du terrain de culture. A l’aide du microscope on peut ainsi suivre de jour en jour le développement des bacilles.
La solution antiseptique était versée dans des tubes à analyse de moyen calibre où plongeaient des fils de soie trempés d’abord dans un liquide contenant les bacilles, puis desséchés.
De temps en temps, à l’aide d’un fil de platine flambé, on prenait un des fils de soie et on le plaçait sur une de ces lames de verre qu’on étudiait alors au microscope; on pouvait ainsi juger de la force nécessaire de la solution et du temps pendant lequel il était indispensable de faire agir la solution pour détruire complètement les bacilles et leurs spores.
Le résultat des expériences faites selon cette méthode avec l’aeide phénique se montra des plus surprenants. On s’attendait ;'i voir l’acide phénique détruire rapidement les spores et on constata au contraire
qu’en solution à 1/100 celui-ci n’avait aucune action sur eux, même après quinze jours de contact; à 2/100, il retardait légèrement leur développement, mais rien de plus; à 3/100 il tuait les spores au bout de sept jours; au bout de trois jours à 4/100 et de vingt-quatre heures à 5 p. 100.
Cette influence comparativement faible de l’acide phonique sur les spores et la longueur nécessaire du temps qu’il lui faut pour agir, montrent qu’on ne peut pas compter sur lui comme désinfectant universel. Néanmoins, il exerce une action puissamment destructive sur les microzymas, qui n’ont pas encore formé de spores.
Le sang frais d’un animal mort d’anthrax charbonneux contient seulement des bacilles et pas de spores. Mêlé à son volume d’une solution à 1 p. 100 d’acide phénique, on peut l’injecter à un animal sans produire presque aucun désordre chez celui-ci.
La solution à 1/2 seulement p. 100 n’amènerait pas ce résultat, de sorte que la dose limite gît entre 0,50 et 0,25 p. 100 du mélange.
L’action de l’acide phénique sur les autres microzymas adultes ou leùrs spores, est presque la même que sur le bacillus anthracis.
Le tableau suivant donne les résultats obtenus par Koch avec d’autres substances; les chiffres indiquent le nombre de jours pendant lesquels les spores ont été soumises à l’action de l’antiseptique avant leur culture d’épreuve.
Les chiffres foncés indiquent que les spores ont été détruites et leur germination arrêtée par le contact de l’antiseptique au bout du temps désigné. L’astérisque * indique que leur vitalité a simplement subi une diminution et que la culture a été très médiocre, la croix (f) indique que leur germination n’a été que retardée, et la croix f* que la germination s’est montrée à la fois rare et retardée.
Les antiseptiques ont été divisés en trois classes. La première contient les antiseptiques liquides; la seconde, les antiseptiques en solution aqueuse; la troisième, les antiseptiques en solution alcoolique, éthérée ou huileuse.
1er GROUPE.
Eau distillée 7 15 20 35 90
Alcool absolu .... 1 3 5 10 12 20 30 40 50 65 110
Alcool (1 à 1 d’eau) . . 1 3 20 30 40 50 65 110
Alcool (1 à 2 d’eau). . . 1 3 20 30 40 50 65 110
Ether 1 5 8*30
Acétone 2 5*
Glycérine
Acide butyrique . .
Huile à manger . .
Bisulfure de carbone .
Chloroforme. . . .
Benzol
Ether de pétrole . .
Huile de térébenthine
io
Groupe II. — Solutions
dans l’eau.
Eau chlorée fraîchement préparée ....
Brome (2 p. 100 d’eau)
Eau iodée (1 à 7,000)
Acide chlorhydrique (2 p. 100 d’eau) . . .
ÎO
Ammoniaque
Chlorure d’ammonium (5 p. 100 d’eau) . .
Sel commun (solution saturée)
Chlorure de calcium (id.)
Chlorure de baryum (5 p. 100 d’eau) . . .
Chlorure de fer (5 p. 100 d’eau)
Bromure de potassium (5 p. 100 d’eau) . .
Iodure de potassium (5 p. 100 d’eau) . . .
Sublimé corrosif (1 p. 100 d’eau) . . . .
Arsenic (1 p. 100 d’eau)
io
Eau de chaux
Chlorure de chaux (5 p. 100 d’eau). . . .
Acide sulfurique (1 p. 100 d’eau) ....
Sulfate de zinc (5 p. 100 d’eau)
Sulfate de cuivre (5 p. 100 d’eau ....
Sulfate de fer (5 p. 100 d’eau
Sulfate d’aluminium (5 p. 100 d’eau) . . .
Alun (4 p. 100 d’eau)
Chromate de potasse (5 p. 100 d’eau). . .
Bichromate de potasse (5 p. 100 d’eau) . .
Alun de chrome (5 p. 100 d’eau) ....
Acide chromique (1 p. 100 d’eau) ....
Permanganate de potasse (5 p. 100 d’eau) .
— — (1 p. 100 d’eau) .
Chlorate de potasse (5 p. 100 d’eau) . . .
Acide osmique (1 p. 100 d’eau
Acide borique (5 p. 100 d’eau)
Borax (5 p. 100 d’eau)
Hydrogène sulfureux dissous
Sulfure d’ammonium
Huile de moutarde et eau
Acide formique (p. sp. 1,120)
Acide acétique (5 p. 100 d’eau)
Acétate de potasse (solution saturée) ....
Acétate de plomb (5 p. 100 d’eau)
Savon noir (2 p. 100 d’eau)
Acide lactique (5 p. 100 d’eau)
Tannin (5 p. 100 d’eau)
Triméthylamine (5 p. 100 d’eau)
Chloropicrine (5 p. 100 d’eau)
Acide benzoïque (solut. aq. saturée) ....
Benzoate de soude (5 p. 100 d’eau) ....
Acide cinnamique (2 p. 100) aq. : 60, alcool 40.
Indol (en excès dans eau)
Scatol fen excès dans eau)
Leucine (1/2 p. 100 d’eau)
Quinine (2 p. 100) eau : 40 et alcool 60 parties).
Quinine 1 p. 100 dans l’eau -f- HCI) ....
IG
Groupe III. — Solutions dans l’alcool
l’éther ou l’huile.
Iode (1 p. 100 alcool) • . . .
Acide valérianique (5 p. 100 éther) ....
Acide palmitique (5 p. 100 éther)
Acide stéarique (5 p. 100 éther)
Acide oléïque (5 p. 100 éther)
Xylol (5 p. 100 alcool)
Thymol (5 p. 100 alcool)
Acide salicylique (5 p. 100 alcool)
Acide salicylique (5 p. 100 huile)
Huile de Dippel (5 p. 100 alcool)
Huile de menthe poivrée (5 p. 100 alcool) . .
De l’examen attentif de ces tableaux il ressort que la méthode ordinaire de séparation des ferments figurés et des ferments non figurés, par précipitation à l’aide de l’alcool, et d’une solution de glycérine, ne peut être considérée comme une méthode offrant quelque garantie d’exactitude, puisque ni l’alcool ni la glycérine ne sont capables d’agir sur la vitalité des ferments figurés.
L’action remarquable, exercée par l’éther et l’essence de térébenthine, tous deux excellents véhicules de l’ozone, comparativement à l’action exercée par les autres liquides, est digne de fixer l’attention. Cette action est conforme aux résultats des récentes observations de P. Bert et de Regnard, concernant l’action destructive qu’exerce l’eau oxygénée sur la bactérie charbonneuse.
Les spores du bacille charbonneux opposent une curieuse résistance à l’action de certains agents qui se montrent doués, vis-à-vis d’autres
ferments, de propriétés très nuisibles, tels que l’acide chlorhydrique dilué à 2 p. 100, l’acide salicylique à 1 p. 100 ou les solutions concentrées de chlorure de sodium, de chlorure de calcium, les solutions des sels métalliques telles que celles de borax ou d’acide borique, de chlorate de potassium, d’acide benzoïque, de benzoate de soude, d’acide cinnamique, de quinine.
Action des médicaments sur le développement et la pullulation des bacilles. — Pour étudier l’action des antiseptiques sur le développement et la pullulation des bactéries, Koch se sert de verres de montre ou même de cristallisoires à fond plat dans lesquels il place quelques gouttes de sérum sanguin ou d’un mélange de thé de bœuf, et de solution de peptone, additionnée d’une proportion variable de l’agent antiseptique sur lequel doit porter l’expérience. Dans chacun des vases il plonge un fil de soie préalablement trempé dans le liquide contenant les bactéries, puis desséché. Un des vases ne contenant que du liquide de culture sans addition d’antiseptique lui sert de témoin et permet à l’observateur d’apprécier l’influence qu’a pu exercer sur le développement des bacilles l’antiseptique employé dans les autres vases.
Ces expériences ont fait constater la différence entre la façon de réagir du bacillus anthracis et celle des autres microzymas vis-à-vis de l’acide phénique.
Une solution à 1/1250 et une autre à 1/850 de cet acide ont suffi pour empêcher le développement du bacillus anthracis, tandis qu’il n’a pas fallu moins d’une solution à 1/500 pour obtenir le même résultat sur les autres bacilles. Il y a donc des microzymas qui sont plus résistants à l’action de l’acide phénique que le bacille anthracis.
Le tableau suivant montre le titre nécessaire des diverses solutions antiseptiques pour entraver ou empêcher complètement le développement du bacille anthrax :
Enti
ave.
Prévient.
Iode
1 pour
Brome
Chlore
Acide osmique ....
Permanganate de potasse.
Sublimé
1 pour
. 1 pour 300,000
Alcool allylique ....
Essence de moutarde . .
. 1 pour 33,000
Thymol
Huile de menthe poivrée .
Essence de térébenthine . 1
— de clous de girofle 1 Arsénite de potasse. . . 1
Acide chromique. . . . 1
— picrique . . . . 1
— cynahydrique . . 1
Entrave.
Prévient.
. . 1 pour 33,000
. . 1 pour 10,000
. . 1 pour 5,000
. . 1 pour 8,000
Les antiseptiques suivants ont à peu près la même puissance que l’acide phénique :
Solution de : Entrave. Prévient.
Acide borique . . .
. 1 pour
. . 1 pour
Borax
Acide chlorhydrique
— salicylique . - .
— benzoïque . . .
Camphre
Savon noir ....
Quinine
Eucalyptol
Hydrate de chloral . .
Chlorate de potasse . .
Acide acétique . . .
Benzoate de soude . .
Alcool
Acétone
50 (pas
d’action).
Chlorure de sodium . .
Influence du dissolvant. — Si une solution aqueuse phéniquée à 5 p. 100, possède une action destructive bien marquée sur les spores et sur les bacilles adultes, au contraire, une solution du même agent et au même titre dans l’huile ou l’alcool n’exerce pas la moindre action antiseptique. Le tableau précédant montre aussi l’influence du dissolvant sur les propriétés antiseptiques de l’iode.
Influence du liquide avec lequel l’antiseptique est mêlé. — Cette influence est quelquefois des plus marquées, surtout à l’égard de l’iode, du brome ou du chlore. En solution aqueuse ces agents sont de puissants antiseptiques, mais mêlés à des liquides alcalins, tels que le sérum sanguin, ils se convertissent en bromures, iodures et chlorures et leur action est, du fait de cette conversion, extrêmement affaiblie. L’action du sublimé ou des huiles éthérées ne subit aucune modification dans des conditions analogues.
Influence de la température sur l'action des antiseptiques. — Les hautes
températures accroissent considérablement la puissance des antiseptiques.
Les spores du bacille anthracis, exposées aux vapeurs d’acide phénique, à la température de 15 à 20° C., restent inaffectées même après un contact de quarante-cinq jours de durée. Si on élève la température jusqu’;'» 55° le cas change du tout au tout. Au bout d’une demi-heure l’effet reste à peu près nul, mais au bout d’une heure et demie la plupart des spores sont détruites. Au bout de trois heures leur nombre a diminué notablement, et si on prolonge la durée de l’expérience pendant cinq ou six heures, toutes ont disparu.
Modifications que la chaleur et la nature du terrain de culture font subir aux bactéries. — On peut, par la culture d’une bouture prise sur un arbre fruitier sauvage, rendre le fruit de cet arbre, primitivement âcre et désagréable, savoureux et comestible.
Or, ce qu’on peut obtenir des représentants supérieurs du règne végétal, peut aussi être réalisé sur les représentants inférieurs du règne animal et les bacilles eux-mêmes sont susceptibles de subir des modifications profondes sous l’influence des conditions différentes dans lesquelles on les cultive.
Pasteur a, par exemple, montré que le bacille charbonneux se développe et se multiplie dans le bouillon de bœuf mieux que partout ailleurs, à une température de 25° à 40° C. Plus haut ou plus bas son développement est retardé, et complètement entravé au-dessous de 15° ou au-dessus de 45° C.
Cultivés à une température où leur développement se fait avec une certaine difficulté, par exemple vers 42°-45°, les bacilles cessent de former des spores et croissent seulement en longs filaments. Des bacilles frais, injectés sous la peau d’un animal, entraînent rapidement la mort de celui-ci par suite du charbon malin, mais si ces bacilles ont été pendant un temps suffisamment long, maintenus dans une haute température, ils perdent de leur virulence et au bout de cinq à six semaines ils finissent par mourir.
Quand des individus appartenant à la première culture sont placés dans du thé de bœuf frais, les individus de cette deuxième culture possèdent toutes les propriétés virulentes des individus de la première culture; ceux-ci postés à leur tour dans un milieu qui leur convient, donnent une troisième génération, qui conserve et perpétue la puissance léthale de leurs ascendants.
Quand on cultive les bacilles à la température de 35°, non seulement
les microzymas se multiplient rapidement, mais ils forment des spores d’un degré défini de virulence et ces spores peuvent être conservées, inaltérées, pendant des années dans des tubes scellés, tandis que les filaments des bacilles adultes meurent quand on les prive d’air.
Quand des bacilles du charbon dont la virulence a été diminuée par la culture, sont injectés à un animal, ils ne produisent plus qu’un malaise plus ou moins passager au lieu de provoquer une mort fatale comme ils l’eussent fait dans d’autres circonstances.
Par suite de la pullulation de ces bacilles non virulents dans l’économie, celle-ci paraît subir une sorte d’accoutumance en vertu de laquelle l’injection subséquente de bactéries virulentes produit sur elle une action moins puissante. Si la première injection a été faite avec des bactéries possédant une très faible virulence, il est très possible que l’animal en expérience succombe à l’injection consécutive de bacilles très virulents, mais s’il a été injecté avec des virus à virulence suffisamment graduée, chaque inoculation ne provoquera que des troubles légers et l’inoculation subséquente de bactéries très virulentes sera désormais impuissante à amener la mort.
Les modifications que déterminent dans le sang et l’intimité des tissus vivants l 'inoculation du virus charbonneux ou du vaccin, bien que probablement assez légères, sont cependant suffisantes pour conférer l 'immunité de l’organisme contre l’infection ultérieure. Cette immunité est ordinairement permanente bien qu’elle doive diminuer avec le temps, à moins toutefois que l’âge du sujet tende par lui-même à la rendre permanente en diminuant sa réceptivité.
L’âge, en effet, est susceptible de conférer l’immunité contre l’infection de l’organisme par certaines espèces de bacilles; les jeunes chiens, par exemple, sont très facilement affectés par le charbon malin, tandis que les vieux chiens sont, au contraire, à l’abri de ses atteintes.
La différence des espèces entraîne aussi des différences dans l’immunité. C’est ainsi que le rat et la souris des champs sont indemnes des atteintes du charbon malin, tandis que les mêmes espèces citadines y sont au contraire extrêmement exposées.
De même, le mouton d’Algérie résiste très bien à cette affection charbonneuse qui décime les moutons de France.
On ignore jusqu’ici s’il est possible, à l’aide d’agents thérapeutiques de modifier assez l’organisme pour le mettre à l’abri de l’infection par
les bactéries pathogéniques. C’est une étude dont la poursuite paraît devoir être féconde en révélations intéressantes.
