DES CELLULES ET DES TISSUS ANIMAUX

Génékalités. — La cellule animale possède en fait la même constitution que la cellule végétale : elle présente un corps protoplasmique composé essentiellement de protoplasma hyalin et de microsomes, limité par une membrane cutanée, renfermant, sauf dans des cas très rares, un noyau organisé absolument comme celui des plantes ; les vacuoles y sont peu communes et celles qu’on y rencontre sont le plus souvent contractiles, c'est-à-dire susceptibles de s’annihiler sous la pression du protoplasma, pour reparaître plus tard lorsque cesse cette action ; elle contient en outre des produits de réserve et de désassimilation. Le protoplasme est ordinairement nu et ce fait suflit pour imprimer aux tissus animaux un faciès tellement différent de celui que possèdent les tissus végétaux, que toutes les personnes qui se sont adonnées entièrement, tout d’abord, à l’étude des uns ont ensuite une certaine peine à s’habituer aux autres. La division du travail physiologique étant poussée beaucoup plus loin chez les animaux supérieurs que chez les végétaux qui leur sont comparables, les formes cellulaires sont plus nombreuses chez les premiers. Enfin, l’absence de paroi distincte du corps protoplasmique facilite à un tel point la formation de symplastes que l’on rencontre fréquemment chez les animaux des individualités physiologiques (fibre musculaire striée, etc.) manifestement pluricellulaires, mais dont on ne connaît pas encore la constitution élémentaire d’une façon indiscutable, ce qui ne simplifie point Thistologie animale.

Ces principes posés, nous vérifierons quelques-uns des faits que nous venons de faire connaître. Nous choisirons nos exemples de façon à faire constater en même temps certaines des propriétés du protoplasme qui sont faciles à observer chez les animaux en raison, justement, de l’absence de paroi chez la cellule: la contractilité, les déplacements amiboïde et ciliaire, etc...

Ayant détaché d'un foie aussi frais que possible quelques petits morceaux, on les plongera pendant 24 heures dans un liquide dissociant : l’alcool au tiers ou le sérum iodé (T). Grattant alors doucement leur surface avec le scalpe], on en détachera une pulpe brune qui, étant dissociée sur une lame dans un peu du liquide provenant de la macération, montrera au microscope une grande quantité de petites masses polyédriques de 2o à 30 [i- de diamètre : les cellules hépatiques, qui se présentent avec un contour très net, un protoplasma granuleux réticulé et un noyau central également réticulé possédant plusieurs nucléoles (fig. 6, pl. XXXIV). On pourra y rencontrer en outre des granulations pigmentaires foncées, de petits globules très réfringents de graisse, ce qui est presque normal chez les êtres civilisés et domestiqués, enfin des gouttelettes jaunes de 1 à 2 ade diamètre, qui se résolvent au milieu du protoplasnia si Ton vient à traiter la préparation par l’eau. Ces dernières sont formées par de la bile, comme le prouve la coloration rouge-violet que prend l’élément en additionnant le véhicule 1° d’un tiers environ de son volume d’acide sulfurique, 2° d’une petite quantité d’une solution aqueuse à 25 p. 100 de sucre de canne. Le noyau et le corps protoplasmique deviendront plus évidents si on les traite parle carmin ou le picrocarminate d’ammoniaque, comme il a été dit à la page 43.

On se procurera ensuite des Amœha prmceps (le protée) dont on rencontre de nombreuses variétés dans Teau douce aérée de nos mares, de nos bassins et de nos rivières. Ils rampent à la surface des dépôts vaseux qui recouvrent les plantes et les pierres submergées et ne sont pas rares au printemps sur les lentilles d’eau. Les ayant détachés soit par le grattage au moyen du scalpel, soit avec un pinceau, soit par agitation violente de leur support dans une petite quantité d’eau, on les étudiera dans le liquide qui les baigne, entre la lame et la lamelle disposées à la façon ordinaire ; ils se fixeront immédiatement à l’un ou à l’autre des verres et, dès qu’on les aura aperçus, ils seront faciles à suivre, bien qu’ils glissent continuellement à leur surface où ils semblent couler comme une goutte d’huile, se déformant sans cesse en produisant des pseudopodes obtus qu’ils émettent et rétractent alternativement, faisant passer une partie de leur masse dans

(1). Le sérum iodé ou iodsénim de ScliuKze se fait au moyen du liquide amniotique de femme ou de brebis. Ou prépare d’abord un sérum sur-iodé avec 10 gr. de cette matière et 1 gr. (le teinture d’iode ; on libre. On obtient riodsérum par addition de 1 gr. du précédent liquide à 100 gr. d’eau de l’amnios; le mélange se décolore assez rapidement et doit recevoir de temps en temps une nouvelle quantité de sérum sur-iodé pour se conserver.

Xéiodsérum artificiel de Sclmltze, plus facile à obtenir, est d’un emploi plus répandu; il se compose d’une solution de blanc d’œuf 30, dans 200 d’eau additionnée de 0,40 de sel murin, à la(iuelle on ajoute 1 p. 100 de teinture d’iode.

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Iciii* intérieur [am^ fig-. 14, XL). Ils progressent ainsi du mouvement amihüule^ allant à la reclierclie des particules alimentaires qu’ils font pénétrer dans leur corps pour en tirer les éléments utiles et les rejeter ensuite. Leur taille varie entre 50 et 400 [j-; ce sont des animaux monocellulaires; ils sont nettement limités par une couche cutanée, et on ne distinguera nulle part aussi bien Thyaloplasma que chez ces individus au moment où ils

émettent un pseudopode (fig. 250), car celui-ci est d’abord formé entièrement par du protoplasma dépourvu complètement de microsomes. On rencontre dans la partie granuleuse, outre le noyau qui est nucléolé, des vésicules contractiles et aussi les corps les plus divers servant à l’alimentation de l’être. On doit fixer les amibes par l’acide osmique avant de les colorer ; on emploiera un centimètre cube d’acide au centième par 30 grammes d’eau contenant des amibes. A cette dose l’acide foudroie pour ainsi dire les individus sans altérer leur forme en quoi que ce soit; c’est de cette façon qu’opère Certes pour l’étude microscopique de la faune des eaux : tous les individus tués tombent en quelques heures au fond du vase et on peut ensuite les rassembler par décantation dans une quantité minime de liquide. Les petites espèces se conservent presque indéfiniment dans l’eau additionnée d’acide osmique.

Pour observer la progression de la cellule au moyen des cils vibratiles, nous nous adresserons encore à des êtres monocellulaires, aux infusoires. Il est difficile d’indiquer, comme pour les Diatomées et pour les mêmes raisons, une espèce type; toutes les mares, les cours d’eaux peu rapides : rigoles, etc., en contiennent une grande variété; les algues filamenteuses en abritent en abondance dans leurs touffes ; ils pullulent dans toute infusion végétale abandonnée. Pour plus de commodité nous nous en tiendrons à cette dernière source et, ayant placé une poignée de foin dans un cristallisoir, nous l’arroserons d’eau tiède en quantité suffisante pour la submerger et nous abandonnerons la macération à elle-même, dans un lieu chaud, pendant trois ou quatre jours au moins. Le liquide sera peut-être recouvert à ce moment par unmycoderme formé par le Bacillus subtilis, mais il renfermera en tout cas une quantité d’infusoires telle qu’il suffira d’en puiser une

goutte avec une pipette et de i’observer avec une amplification de 200 diamètres pour voir le champ du microscope sillonné incessamment par des individus tellement agiles que leur étude serait impossible si le liquide de culture fort impur ne contenait une foule de corps en suspension qui leur font obstacle et modèrent leur allure. Deux espèces prédomineront : Pa7"ameciiim Aureha et Colpoda cuciilliisÿ elles appartiennent l’une et l’autre au sous-ordre des HolotricJies que caractérise un corps couvert sur toute sa périphérie de cils très fins, toujours plus courts que le corps et paraissant disposés suivant des lignes longitudinales. Ces cils sont des émanations directes du protoplasma ; en battant l’eau d’un mouvement rythmé, ils permettent la progression de Tindividu. La paramécie est elliptique, longue de 200 à 250 (lig. 251 et 252); ses cils sont diposés sur 40 à

Fig. 251. — Schéma d’une pa- Fig. 252. — Paramecium Aurélia. ramécie. a, substance inter- Coujugatiou d’après Balbiani. a, ueU^, orifice buccal; c, anus; «, noyaux; r, u, vésicules conrf, vacuoles contractiles tractiles.

(Hayeck).

Fig. 253. — Vorticella microstoma. a, infundibulum ; è, h' , bourgeons; c, noyau; vésicule contractile.

50 rangées longitudinales; elle présente sur le côté [b fig. 251) un infundibulum simulant une bouche par où les aliments pénètrent dans le protoplasma et un peu plus bas une dépression c, l'anus?, par laquelle se fait l’évacuation du résidu de la digestion. Le corps comprend comme toujours un protoplasma nucléé protégé par une membrane cutanée. Immédiatement au-dessous de celle-ci se trouve à chaque extrémité une vacuole contractile animée d’un mouvement très régulier de systole et de diastole, qui prend dans le premier temps une apparence étoilée très remarquable. Le colpode à casque est bien plus petit : il n*a que 20 à 90 [x. Sa bouche est latérale et présente sur sa lèvre inférieure un faisceau de longs cils ; elle h la forme d’une fente. Sa membrane cutanée est molle et flexible.

TECHNIQUE SPÉCIALE

Si l’on iiUroduil dans la préparation quelques brins de foin, on trouvera rerlainement fixés à leur surface par un long’ pédicule des Vorticelles (lig. 253) du groupe des péritricJie^^. Leur corps est infundibuliforme et dépourvu de cils vibraiils, sauf cependant sur les bords de l’entonnoir et sur ceux d’un lobe supérieur simulant un couvercle à moitié rabattu. Ces cils ne servent ici qu’à la préhension des aliments en déterminant dans le liquide des courants qui portent les matières dans l’infundibulum où se trouve la bouche placée à coté de l’anus. Le phénomène le plus curieux que présentent ces êtres est la contraction de leur pédicule qui, au moindre danger, se rétracte en s’enroulant en spirale, pour se distendre lorsque les temps deviennent meilleurs. Ces êtres ont la même structure intime que les précédents. Pour colorer les infusoires, on les traitera au préalable par l’acide osmique, comme il a été dit précédemment. On rend tangibles les courants déterminés dans le liquide par le battement des cils, en semant dans la préparation un corps léger et opaque en poudre impalpable : un précipité de carmin par exemple.

SANO (pl. XXXIII).

Le sang est constitué par un liquide, le plasma^ contenant en suspension des corps divers qui, dans l’état normal, se réduisent à trois : des hématies ou f/lobiiles rouges, des leucocytes ou globules blancs, enfin des hématoblastes ou globulins. Avec la coagulation apparaît un quatrième élément figuré : la fibrine . Nous nous occuperons d’abord de ces matières.

On se procure du sang humain en serrant l’index avec une cordelette au niveau de l’articulation de la phalangette pour amener une congestion de l’extrémité du doigt ; on enfonce ensuite dans celle-ci une aiguille flambée et cela assez profondément pour faire sourdre au moins une goutte de sang de la blessure. Le sang, défibriné ou non, des grandes espèces domestiques s’obtient facilement et en grande quantité dans les abattoirs, celui des petites dans les marchés ; enfin, en piquant les grenouilles dans les espaces interdigitaux, on en fera sortir du sang étendu de lymphe, ce qui ne peut être désavantageux que dans le seul cas où l’on voudrait compter les globules de l’animal; il faudrait alors puiser le liquide dans le cœur. La lymphe est le meilleur véhicule des globules rouges qui sont altérés par presque tous les autres liquides : le mucus du vagin, celui des bronches, les sérosités, l’urine acide, le contenu des kystes font seuls exception.

Hématies. — On fera deux préparations de sang pour étudier les globules rouges. L^une s’obtiendra en étalant autant que possible sur la lame une petite quantité du liquide ; l’opération s’effectuera avec une aiguille ou en

imprimant au slide un mouvement de balancement entrecoupé de secousses violentes; un Int de paraffine sera appliqué sur la lamelle si l’observation doit durer longtemps pour empêcher la dessiccation. Ce procédé fournira des hématies vues à plat, nettement séparées les unes des autres. La seconde préparation se fera avec une quantité plus grande de sang et en interposant entre le slide et le cover un corps solide minuscule permettant de communiquer de légers mouvements de bascule à la lamelle en la touchant en différents points avec l’aiguille. On déplacera ainsi le liquide en y produisant des courants que l’on utilisera pour voir sous toutes leurs faces les hématies qui y tourbillonneront.

Les hématies des mammifères sont discoïdes, biconcaves (sauf chez les Caméliens où elles sont elliptiques), ce qui les fait paraître, vues aplat et par transmission, plus éclairées à la périphérie qu’au centre. L’observation des globules tournant dans les courants sanguins où ils se présentent tantôt avec la forme discoïde, tantôt comme des biscuits renflés à leurs deux extrémités, ne laisse pas de doute à cet égard. Les globules rouges de tous les autres vertébrés sont elliptiques, biconvexes et pourvus d’un noyau granuleux médian qui devient beaucoup plus évident après l’action du réactif iodé-ioduré, le meilleur colorant des hématies (üg. 3-4). Ces corps sont dicbroïques, rouges par réflexion, jaunes par transmission; c’est là un fait qui frappe fortement les novices; ils se croient tous fort malades en présence de globules aussi peu colorés.

Les hématies s’altèrent rapidement après leur sortie des vaisseaux ; elles émettent une substance gélatineuse qui leur permet de se fixer les unes aux autres lorsqu’elles arrivent au contact; elles se superposent en piles (;?, fig. 1); le fait est trop connu pour qu’il soit nécessaire d’insister. On rencontre toujours dans la préparation quelques hématies abords sinueux (c, fig. I) : ce sont les globules crénélés; leur nombre varie avec les individus. Les solutions de sulfate de soude et de sulfate de magnésie provoquent la formation de ces globules crénelés et aussi celle de globules, dits en marron d’Inde, hérissés d’un grand nombre de petites saillies.

Le volume des globules varie avec l’espèce dans les cinq classes de vertébrés et l’on sait qu’il existe une relation certaine entre l’activité respiratoire de l’animal et leur volume qui est d’autant moindre que l’échange des gaz est plus fréquent : les globules chargés d’oxygène sont plus aplatis que les autres. La chose est importante à retenir ; l’expertise légale en tire profit pour la distinction des taches de sang. C’est un excellent exercice d’apprendre à mesurer les globules et, si l’on veut des exemples frappants, on passera du sang de l’homme à celui du mouton dont les hématies ont des dimensions plus petites de moitié (fig. 2). Mais il faut bien établir que tous les globules rouges d’un même individu n’ont pas exactement les mêmes dimensions : ainsi le

TECJINIOUE SPÉCIALE

(liamèlrc de ceux de l’homme varie entre G a, et 9 a, la plupart ayant 7 a, 5 ; leur épaisseur n’atteint pas tout à fait 2 a. L’état de maladie peut influer sur le volume des globules : on rencontre chez les anémiques, à coté de globules nains ayant 2 à 6 [x de diamètre, des hématies géantes mesurant 10, 12 et même 14 ix.

La forme des globules permettant toujours de déclarer si un sang donné provient d’un mammifère, il faut, par contre, beaucoup de circonspection avant d'affirmer que des globules appartiennent à un mammifère déterminé : les hématies du lapin et du lièvre ont 6 a, 9 ; celles du chat 6 a, 6; du chien 6 a, 5; du rat 6 [x, 3 ; de l’âne G ;x, 2 ; du porc G a ; du bœuf 5 [j., G ; du cheval 5 [j. ; du mouton 4 a, 3 ; de la chèvre 4 jx.

Les globules rouges sont fixés par l’alcool à 90 ° ; plus étendu, ce liquide les altère. Los solutions salines les gonflent; la bile les détruit rapidement; l’acide acétique étendu les décolore partiellement. L’action de l’eau est violente : si l’on fait passer une goutte d’eau sous la lamelle, on voit les globules devenir sphériques, diminuer par conséquent de diamètre (llg. 7) et se décolorer à tel point (ju’après quelques instants ils deviennent invisibles; l’opération est plus saisissante avec le sang de grenouille : les globules deviennent rapidement sphériqueset les hématies semblentse réduire à leur noyau (fig. 10). Il est toujours possible de faire reparaître le corps par le réactif iodé-ioduré.

L’action de l’eau s’explique par la structure du globule rouge qui serait formé par une trame organique solide, molle, incolore (le stroma^ constitué par de la globuline), imprégnée comme une éponge d’un liquide rouge : \ hémo globule ou hématocrhtaUine . Cette dernière est une espèce chimique assez bien définie pour pouvoir cristalliser, mais elle ne semble pas être identi([ue chez tous les animaux, car on connaît plusieurs formes cristallines de l’hémoglobine. On peut même obtenir accidentellement deux variétés de cristalloïdes avec le sang du même animal. L’hémoglobine du sang de cochon d’Inde s’obtient très facilement : on saigne l’animal à la carotide et on défibriné immédiatement le liquide par le battage avec un petit balai de chiendent. Ayant versé le produit dans un petit flacon à large ouverture bien propre et sec, on y ajoute goutte à goutte de l’éther ordinaire en agitant jusqu’à ce que le liquide se laque, c’est-à-dire prenne une couleur rouge-groseille foncé : quelques gouttes suffisent; on plonge alors le flacon dans de la glace pilée : la cristallisation se produit bientôt. On réussit encore en addij^ionnant le sang défibriné du quart de son volume d’alcool à 90" et maintenant le mélange à 0". Les cristaux, recueillis avec une pipette, seront observés dans la glycérine neutre, l’eau les altérant immédiatement; ils sont tétraédriques, complets ou tronqués; ceux qui sont obtenus par l’éther sont deux fois fois plus gros que ceux fournis par l'alcool, mais leurs

arêtes sont moins nettes : la figure 18, montre ces deux variétés. Ces cristaux peuvent être conservés dans la glycérine.

L’hémoglobine maintenue quelques minutes à 80% ou bien traitée soit par les acides, soit par les alcalis, brunit et se dédouble en une matière albuminoïde et en Jiématine, corps pigmentaire bien défini, peu intéressant par lui-mêrne pour le micrograplie. Il n’en est pas de même de sa combinaison chlorhydrique (chlorhydrate d’hématine, Jtémine, cristaux de Teichmann) qu’on obtient facilement cristallisée et qui sert en expertise légale à caractériser les taches de sang, même fort anciennes, dans lesquelles les globules ou l’hémoglobine ne peuvent plus être mis en évidence. Actuellement, nous les préparerons, pour nous initier à des cas plus difficiles^ d’abord avec du sang pur, ensuite avec une solution d’hémoglobine obtenue en diluant du sang dans vingt fois son volume d’eau, ou en traitant un caillot frais par une proportion équivalente de ce liquide. On prendra soit une goutte de sang, soit 3 ou 4 de la dilution et, les ayant déposées sur une lame, on les additionnera d’une gouttelette d’une solution au millième de chlorure de sodium. On amènera la matière presque à siccité en maintenant lalame au-dessus de lalampe à alcool et en ayant soin de ménager la chaleur pour éviter la coagulation des albuminoïdes. Ou versera alors à la surface une goutte ou deux d’acide acétique cristallisable , et, le portant à l’ébullition, on l’y maintiendra jusqu’à ce qu’il soit totalement évaporé. On laisse refroidir la lame et on la place directement, sans véhicule aucun, sous le microscope armé d’un objectif faible. Si la préparation est constellée, au moins dans certaines parties, de points bruns, l’opération est réussie ; on étudie les cristaux, toujours dans les mêmes conditions, avec une amplification de 300 diamètres Sinon, onrépèteune deuxième et même une troisième fois, s’ille faut, le traitement par l’acide acétique pour faire apparaître l’hémine. L’emploi d’un acide aqueux conduit certainement à un échec. Un des points délicats de l’opération est l’addition de chlorure de sodium ; les personnes inexpérimentées en ajoutent facilement un excès qui cristallise sur la lame tantôt nettement ia, fig. 12), tantôt confusément en dendrites Z», fig. 12). Il ne faut pas prendre ces cristaux incolores pour les tables rhombiques brunes d’hémine.Les cristaux de Teichmann sont plus ou moins volumineux (fig. 8 et 9), selon la quantité d’hémoglobine mise en jeu et l’habileté do l’opérateur; ils sont libres le plus souvent, mais il n’est pas rare de les voir assemblés en nombre divers formant des étoiles plus ou moins riches en pointements. Ces cristaux se conservent bien à l’air libre; on [)eut, pour plus de précaution, les monter dans le baume.

On connaît deux variétés d’hémoglobine : V oxijhémoglobine qui est combinée à l’oxygène et possède seule la propriété de cristalliser, et V hémoglobine réduite que l’on obtient en faisant passer dans une solution de la première un courant de (70' ou de II, ou encore en la traitant par des soin-

TECHNIQUE SPÉCIALE

lions réductrices de sulfure d’ammonium ou de sulfate ferreux, mais par l'agitation de la masse au contact de l’air l’oxyhémoglobine reparaît facilement. Le spectroscope permet de distinguer ces deux corps, car leur [)Ouvoir absorbant est différent: La solution suffisamment étendue d’oxyliémoglobine donne un spectre complet présentant deux bandes d’absorption, l’une étroite, située dans le jaune un peu au delà de la raie D, l’autre plus large du double, placée en deçà de Eà l’origine du vert. xAvecTbémoglobine réduite on ne trouve plus qu’une bande [bande de Stockes) occupant à peu près l’espace que laissaient entre elles les deux bandes de l’oxyliémoglobine. Lacbose est importante, car, de toutes les matières quel’on pourrait confondre avec le sang, ce liquide est le seul qui se comporte ainsi et l’expertise légale en tient compte. L’bématinc jouit de propriétés analogues, ce qui est beureux, car on peut par son moyen arriver à caractériser certaines tacbes anciennes dans lesquelles on ne retrouve plus les caractères de l’iiémoglobine. En solution dans l’eau chargée d’une petite quantité d’alcali (soude, ammoniaque), l’iiématine donne une bande très large située entre G et D, à la limite du jaune et de l’orangé ; dissoute dans l’alcool acidulé par SO'II ou CTE^O', elle ne présente plus qu’une raie beaucoup plus étroite placée dans l’orangé, exactement sur la ligne G.

Toutes les f()is que l’on possédera une quantité suffisante de matières, on vérifiera ces propriétés du sang avec le spectroscope, et ce n’est que lorsque l’emploi de cet instrument sera impossible que l’on aura recours aux microspectroscopes. Le plus commode de ces appareils est le spectroscope à vision directe de Sorby, qui consiste en somme en un oculaire aebromatique surmonté d’un tube dans lequel se trouve un prisme formé par l’accolement de cinq petits prismes de flint et de crown-glass associés de manière à compenser la déviation que chaque prisme en particulier ferait subir aux rayons lumineux, tout en laissant la dispersion se produire : les rayons lumineux traversent donc en ligne droite le microscope etl’appareil en produisant un spectre de petite taille. Dans les instruments plus perfectionnés, il existe dans l'oculaire un petit prisme à réflexion totale qui permet de juxtaposer exactement au spectre de la substance le spectre solaire. Pour se servir de l’appareil, on met au point la matière à observer, vue avec une amplification quelconque, puis l’on remplace l’oculaire du microscope par le spectroscope oculaire qui donne sans autres précautions le spectre cherché. Il faut toujours atténuer l’éclairage du spectre solaire pour qu’il ne dépasse pas en éclat celui de la matière. On peut agir sur des globules sanguins. «On pourra opérer sur la lame les réductions et oxydations dont nous avons }iarlé ; il est facile même d’obtenir à plusieurs reprises, avec le même liquide, Falternance des spectres caractéristiques du sang.

On rencontre dans les anciens foyers hémorrhagiques des cristaux ou des

aiguilles d’un rouge orangé vif dont la composition est très voisine de celle delà bilirubine et que l’on regarde comme provenant d’une altération de l’iiématine qui aurait fixé un équivalent d’eau tout en perdant son fer. Quoi qu’il en soit, celte matière, se présente en petits prismes

clinorhombiques (fig. 22) avec des angles de 118° et de 62°, solubles dans l’ammoniaque, insolubles dans l’eau, l’alcool, l’éther, l’acide acétique.

Leucocytes. — Si l’on fixe avec attention les préparations de sang faites comme nous l’avons indiqué plus b aut, on découvrira çà et là entre les hématies de petitessphères, incolores, unpeu irrégulières, les leucocijtes[lS\^. 2, 3, 4); ces corps sont toujours largement séparés les uns des autres, leur nombre par rapport à celui des globules rouges n^étant que de 1 à 350 ou 600, certains disent 1200. Le diamètre de la plupart des leucocytes de l’homme varie entre 9 et 11 [j.; on rencontre aussi des globules nains n’ayant que 4 et quelques globules géants mesurant 14 jx. Leur substance est constituée par un protoplasma transparent contenant des granulations de dimensions diverses, parfois graisseuses. Placés entre le slide et le cover, ils s’attachent à l’un ou à l’autre, ce qui permet de les isoler en faisant passer entre les deux lames un courant de sérum qui entraîne les hématies.

Les leucocytes sont doués de mouvement, ils progressent à la façon des amibes, la chose est facile à constater si l’on monte une goutte de sang dans la chambre humide eisi on l’examine, aussitôt après sa sortie des vaisseaux, avec une amplification de 300 diamètres au moins ; pour que le phénomène soit bien manifeste, il faut maintenir la préparation à la température du corps de l’animal, ce qui pourra s’obtenir au moyen de la 'platine chauffante à circulation d’eau tiède de Ranvier, fabriquée par Yerick; on peut se passer de cet instrument avec le sang de grenouille dont les leucocytes s’accommodent de la température de nos laboratoires.

Le noyau des leucocytes est difficile à mettre en évidence ; le meilleur procédé consiste à le fixer d’abord par l’alcool à 30°, puis à le colorer par le sulfate de rosaniline qui teint plus fortement le noyau que le corps du globule blanc. Les leucocytes se multiplient par segmentation et, comme il se passe toujours un certain temps entre la division du noyau et celle du protoplasma, les globules blancs à plusieurs noyaux ne sont point rares.

Si l’on traite les leucocytes par l’eau, ils absorbent ce liquide, leurs granulations deviennent plus apparentes et s’agitent du mouvement brownien ; lorsque l’action se prolonge, des amas nucléiformes apparaissent dans leur intérieur (fig. 7), mais ce fait est bien plus marqué avec l’acide acétique qui fait naître immédiatement ces corps (fig. 5). Les petites masses réfringentes, nettement limitées, qui se produisent ainsi, sont caractéristiques des leucocytes.

Les globules blancs se rencontrent ailleurs que dans le sang : la lymphe.

TEGIIiMOUE SPÉCIALE

le chyle, le mucus, la synovie en contiennent ; les globules du pus ne sont autre chose que des leucocytes.

Hématoblastes ou GLOBULiNS. — D’api'ès Ilayem, les hématoblastes du sang de riiomme et des animaux vivipares sont des éléments très petits, peu réfringents et à contour peu visible. Leur diamètre moyen est compris, chez riiomme, entre 1 et 3 ix. Ils sont biconcaves discoïdes, à l’exception des plus petits qui sont sphériques. La plupart paraissent incolores ou d’un gris verdâtre, mais lesplus gros sont souvent colorés par de l’hémoglobine. Ils sont peu fréquents chez l’adulte; il faut les rechercher chez l’enfant, chez la femme pendantles périodes menstruelles; on provoque leur apparition chez les animaux par des saignées. Ils sont fort altérables ; observés dans le sang pur, ils se déforment aussitôt après leur sortie du vaisseau :ils se plissent, deviennent épineux et ont de la tendance à se grouper. Il faut, pour les étudier, traiter immédiatement le sang par du sérum iodé dont on a laissé évaporer l’excès d'iode ; ils deviennent d’abord épineux, mais reprennent bientôt leur forme normale. Une amplification de oOO diamètres est nécessaire pour les observer.

Fibrine. — Les hématoblastes ne seraientpasseulementde jeunes globules sanguins, ils provoqueraient par leur altération la formation de la fibrine, c’est du moins ainsi que M. Ilayem interprète les préparations obtenues comme il suit : on étale une goutte de sang sur une lamelle, on retourne celle-ci sur une chambre humide et on abandonne le tout pendant 24 heures dans un endroit calme pour que la coagulation se fasse sans trouble ; on lave alors la préparation avec de l’eau distillée jusqu’à décoloration complète et on l’observe ensuite avec une amplification de oOO diamètres soit dans cet état, soit après l’avoir teinte par l’iode ou les couleurs d’aniline. On y distingue nettement des filaments ténus (/, fig. 6) formés par de la fibrine, rayonnant autour de petites masses les globulins isolés ou groupés en rosaces.

Quoi qu’il en soit, ce procédé nous éclaire sur la structure de la fibrine. Il faut l’observer maintenant avec le faciès, tout différent, qu’elle possède lorsqu’elle s’est formée dans les conditions ordinaires. Pour cela, on détachera de la partie supérieure d’un caillot, préférablement de la couenne si elle existe, une parcelle de la grosseur d’une tète d’épingle et, la plaçant dans l’eau, on Vy laissera séjourner jusqu’à ce qu’elle soit décolorée ; la montant alors dans l’eau, onia portera sous le microscope, après l’avoir légèrement comprimée entre les deux verres. Il est plus avantageux de recueillir s;ir le balai qui a servi à battre le sang quelques petits lambeaux de fibrine qui se laveront plus facilement. Dans l’un et l’autre cas il faudra rechercher les parties les moins épaisses de la préparation, car là seulement on pourra distinguer les fibrilles pressées les unes contre les autres (fig. 11), et encore

n’apparaisscnt-elles que comiiio des stries .s. La masse semble constituée par un enchevêtrement de cordons et de lames dans lesquels les fibrilles courent plus ou moins parallèlement. La liqueur iodée-iodurée rendcette disposition plus évidente. Le réactif caractéristique de la fibrine est facide acétique qui la gonfle, lui donne un aspect homogène et gélatineux et finit, avec le temps, par la rendre invisible ; la mucine qui -ressemble assez à la fibrine à l’état naturel n’est pas altérée par ce réactif. Les alcalis dissolvent la übrine et la mucine.

CmcuLATiON DU SANG. — La transparence de certains de ses organes et le volume de ses hématies ont indiqué depuis longtemps la grenouille pour l’observation de ce phénomène. On s’adresse aux capillaires des membranes interdigitales, de la langue, du poumon ou du mésentère. Quelle que soit la partie sur laquelle on opère, le procédé est toujours le même avec des variantes légères sur lesquelles il n’est pas nécessaire d’insister avec des élèves intelligents. On prend une plaque de liège de 6 millimètres environ d’épaisseur, plus grande que la grenouille, pouvant être maintenue solidement sur la platine par les valets. On place l’animal sur le dos et on le fixe sur le liège au moyen d’épingles traversant les pattes étendues et la mandibule supérieure, mais de telle façon que la partie à observer puisse se superposer à une fenêtre, taillée dans le liège, de même dimension que l’orifice de la platine aA^ec lequel elle doit coïncider pendant l’observation. S’il s’agit de la langue, qui est attachée ici sur le devant de la bouche, on la fera saillir au dehors en la retournant et on la fixera avec des épingles, en la tendant, sur le pourtour de la fenêtre. On mettra la membrane interdigitale en situation d’être étudiée en écartant les doigts autant que possible et les maintenant dans cette position au moyen d’épingles. Pour le poumon et le mésentère on pratiquera une incision sur le côté de l’animal et l’on fera saillir l’organe au moyen de pinces s’il en est besoin, mais on évitera toutes perforations qui seraient nuisibles plutôt qu’utiles. On verse une forte goutte d’eau sur la préparation pour en empêcher le dessèchement et pour permettre aussi la fixation d’une lamelle qui en égalise la surface. Un objectif à long foyer donnant une amplification de 60 à, 100 diamètres est largement suffisant pour montrer les hématies circulant rapidement au milieu du courant et les leucocytes rapprochés de la périphérie animés d’un mouvement de progression moins rapide. Le mésentère a l’avantage de se prêter à l’observation de la circulation de la lymphe qui ne contient que des globules blancs et, à certains moments, à fétiide du chyle.

Applications a la médecine. — On rencontre dans le sang des anémiques des hématies déformées, ovalaires ou en raquette, mêlées à des globules géants, mais, chose plus grave encore, la proportion de ces corps s’abaisse

(le 127 h 113, 80 et meme 50 (un millimètre cube de sang normal renferme environs 000 leucocytes et 5 millions d’hématies chez l’homme, 4 millions et demi de ces dernières chez la femme). Pareille diminution s’observe dans la chlorose. Le nombre des hématies s’accroît au contraire dans la pléthore et celui des leucocytes dans la leucocythémie. Ces faits connus, le médecin ayant constaté une relation constante entre la grandeur de Pécart et la gravité des cas, la numération des globules rouges (ou blancs, selon le casj s’est introduite dans la pratique. Pour rendre l’opération rapide sans qu’elle cesse d’etre exacte, on a construit plusieurs appareils différents. Nous nous en tiendrons à un seul qui nous semble remplir toutes les conditions voulues. Nous emprunterons sa description et celle de la marche à suivre poulie mettre en usa^e à la notice que délivre Vérick avec l’instrument qu'il fabrique.

Numération des globules d’apbès le procédé de Malassez (fig. 19, 20, 21 pl. XXXIlIj. — L’appareil se compose de plusieurs instruments. 1° Le mélangeur Potain (fig. 21), destiné à faire des dilutions graduées de sang dans un sérum artificiel conslitué par une solution aqueuse à 5 p. 100 de sulfate de soude non effleuri, liquide qui gonfle légèrement les globules sans les altérer autrement. 2° La chambre humide graduée de Malassez (fig. 19J qui permet : 1° par son couvre- objet reposant sur des vis qu’on peut faire saillir plus ou moins au-dessus du porte-objet, d’obtenir des préparations microscopiques de mélanges sanguins, ayant juste une épaisseur voulue; 2“ par son porte-objet présentant à sa surface un réseau micrométrique, de limiter avec précision des étendues déterminées de préparation, et d’y compter facilement les globules sanguins. Cette chambre humide est réglée d’ordinaire, soit pour donner des préparations de 15, soit des préparations de 1/10 de millimètre d’épaisseur. Le réseau micrométrique est formé de rectangles ayant 1/5 de millimètre de haut sur 1 /4 de millimètre de largeur. Il en résulte que si l’épaisseur de la préparation est de 1/5 de millimètre, chacun d’eux limite un volume de mélange égal à l/lOO de millimètre cube. Ils sont au nombre de cent, disposés en dix rangées de dix. Ceux qui sont plus spécialement destinés à la numération des globules rouges sont subdivisés en vingt petits carrés (cinq rangées verticales de quatre carrés). Dans certains réseaux, les rectangles subdivisés sont placés à côté les uns des autres; pour qu’ils puissent être facilement distingués, ils sont séparés par une double ligne (fig. 20); 3° une lancette à curseur qui sert à faire des piqûres de profondeur déterminée ; 4° un compresseur porte-lamelles ayant pour but de faciliter le placement du couvre-objet sur les vis et de le maintenir appliqué sur elles. Il est fixé à la lame porte-objet (fig. 19) à l’aide d’une vis, et l’on colle le couvreobjet à sa face inférieure avec un peu d’eau ou de salive. Les couvre-objets

sont spéciaux, rigoureusement plans et assez épais; les verres minces ordinaires ne peuvent les suppléer en aucun cas.

Obtention du mélange. — Pour obtenir le sang, on pique avec la lancette à curseur l’extrémité d’un doigt, de préférence la face dorsale, au voisinage de la racine de l’ongle. Il ne faut pas que le doigt soit œdématié ou couvert de sueur, il ne faut pas non plus l’enserrer dans une ligature avant de faire la piqûre, toutes conditions qui modifieraient plus ou moins la composition du sang.

Si la piqûre est suffisante, on en fait sortir une grosse goutte de sang en pressant légèrement la pulpe du doigt.

On y plonge aussitôt la pointe du mélangeur, et, aspirant doucement par le tube en caoutchouc, on fait monter le sang dans la longue portion de l’appareil.

Si l’on veut un mélange au 500% on s’arrête quand le sang est arrivé au niveau du trait marqué 5 ; pour un mélange au 400% au SOO'* ou au 200% on va jusqu’aux traits marqués 4, 3 ou 2; pour un mélange au 100" on remplit toute la longue portion de l’appareil jusqu’au trait marqué 1. Si l’on veut un mélange au 50", on remplit une première fois de sang la longue portion; puis, après y avoir fait pénétrer une petite bulle d’air, on la remplit une seconde fois.

La quantité de sang voulue étant prise, on essuie la pointe de l’instrument. Si l’on a dépassé le Irait auquel on aurait dû s’arrêter, on souffle très légèrement par le tube en caoulcliouC;, et on essuie le-sang au fur et à mesure qu’il sort de la pointe; souvent même, il suffit de passer simplement la pulpe du doigt sur cette pointe pour faire baisser la colonne sanguine de la quantité nécessaire. Pour bien juger de l’affleurement, le mélangeur doit être placé perpendiculairement à la direction des rayons visuels.

Sans tarder, car le sang se coagulerait, on aspire le liquide à dilution, et celui-ci, précédé par le sang, pénètre dans le réservoir et le remplit peu à peu. Le mélangeur doit être maintenu vertical pendant tout le temps de l’opération, afin qu’il ne s’emprisonne pas de bulles d’air dans le réservoir. On s’arrête lorsque le mélange sanguin est arrivé dans le bout supérieur du mélangeur juste au niveau du trait marqué 101.

Il ne reste plus qu’à agiter le mélangeur en tous sens, pour que la petite boule placée dans l’intérieur du réservoir brasse intimement le mélange et le rende parfaitement homogène.

On doit employer des mélanges d’autant plus dilués que le sang à analyser est plus riche en globules et que la chambre humide dont on se sert donne des préparations plus épaisses. Ainsi, avec une chambre humide donnant une épaisseur de préparation de 1 /5 de millimètre, le mélange

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sera fait au 1()(J% si le sang est pauvre; au 400% s’il est normal. Avec une chambre humide graduée au 10% les mélanges seront, dans les mômes circonstances, deux fois moins dilués.

L’épaisseur de préparation est indiquée sur la chambre humide. Quant à la richesse du sang, on arrive par l’habitude à la juger très suffisamment à l’intensité de coloration que présente le sang pendant qu’il monte dans le mélangeur.

Préparation. — Il faut tout, d’abord s’assurer si le compresseur joue bien, et si, une fois rabattu, la lamelle se trouve appliquée d’aplomb sur les vis. Si elle est bien d’aplomb, on ne doit pas entendre de choc entre elle et les vis, lorsqu’on la frappe doucement avec un corps ne faisant pas de bruit par lui-même, un morceau de papier roulé, par exemple.

Le mélange sanguin étant bien agité, on en fait sortir une certaine quantité du mélangeur en soufflant par le tube en caoutchouc, parce que le contenu du tube n’a pas pris part au mélange, et il faut du reste qu’il en soit ainsi, l’instrument donnant toujours des dilutions trop fortes en raison do son mode de graduation (1). Une gouttelette est alors déposée sur le porteobjet de la chambre humide, tout en l’agitant avec la pointe du mélangeur pour qu’elle conserve son homogénéité.

Sans perdre de temps, on rabat doucement le compresseur porte-lamelle sur les vis et sur la gouttelette. Celle-ci s’aplatît de la quantité voulue. Elle doit alors occuper la plus grande partie de la surface du porte-objet, et ne pas présenter de bulles d’air.

Enfin, si Ton craint que la préparation ne se dessèche, on dépose un pcm d’eau ou de mélange sanguin le long des bords de la lamelle, en assez grande quantité pour que le liquide, s’infiltrant sous celle-ci, fasse le tour complet de la rainure; il n^y a pas à craindre qu’il vienne se mêler au mélange sanguin placé sur le porte-objet.

La chambre humide est alors portée sous un microscope dont le grossissement est assez fort pour qu’on puisse voir distinctement les globules, assez faible cependant pour que le champ microscopique embrasse au moins un rectangle tout entier, et que l’objectif ne vienne pas presser contre le couvre-objet.

On attend quelques instants pour donner aux globules le temps de gagner, en tombant, la face supérieure du porte-objet; on peut alors les voir en même temps que le réseau micrométrique. Il ne faudrait pas cependant trop tarder dans la crainte qu’il ne s’en détruisît quelques-uns ou que, se déplaçant, ils ne soient moins régulièrement disséminés.

La chambre humide doit être maintenue dans un plan horizontal,

(1) Si le contenu du tube se mêlait à celui du réservoir, l’on obtiendrait des dilutions au 101% 202% 40i% 505L

sans quoi les globules se porteraient du côté des parties déclives.

Numération. — On compte tous les globules compris dans un des rectangles subdivisés en petits carrés. Le mieux est de passer successivement en revue chacunes de tranches verticales de quatre carrés. Si la première a été comptée de haut en bas, on comptera la seconde de bas en haut, la troisième de haut en bas, et ainsi de suite.

Quant aux globules qui se trouvent à cheval sur les lignes du quadrillage, il est indispensable de se faire une règle de conduite invariable, si l’on ne veut pas risquer d’en oublier quelques-uns ou de compter les mêmes deux fois. On pourra, par exemple, ne compter comme faisant partie d’un carré que ceux occupant la ligne d’en haut et celle de droite; laissant de côté ceux qui sont situés sur les autres lignes, et qui seront forcément comptés lorsqu’on fera la numération du carré sous-jacent et de celui situé à gauche. La même règle sera appliquée aux globules qui se trouvent sur les lignes frontières des rectangles.

On possède ainsi tous les éléments du calcul; ce serait faire injure au lecteur d’insister plus longtemps sur ce point.

La numération des globules blancs demande l’emploi de mélanges plus concentrés, au 100° ou au 200°, et un dénombrement portant sur des étendues plus vastes de préparation.

On rencontre des granulations graisseuses dans le sang des femmes enceintes et dans celui de tous les individus après les repas et l’absorption d'alcool.

La mélanémie qui accompagne les fièvres paludéennes est due à l’altération des globules rouges qui cause la présence dans le sang soit de granulations pigmentaires provenant directement des hématies, soit de leucocytes teints par des amas de pigments. Ces éléments se distinguent bien dans le sang malade, délayé dans du sérum artificiel.

Parasites du sang. — Des vers peuvent s’introduire dans le sang. Le distome liæmatobie [Bilharzia hæmatohia^ Cobb) est fréquent en Egypte dans les veines de la cavité abdominale. Ce trématode est remarquable par sa forme filamenteuse et aussi parce que le mâle porte constamment la femelle dans une rainure de sa face ventrale. On a rencontré quelquefois le dis tome hépatique chez l’homme. Certains prétendent que le transport des jeunes trichines, de fintestin aux muscles, s’opère par l’intermédiaire du sang. Certaines hématuries des pays chauds seraient causées par la présence dans le sang dhm nématode, le Filaria sanguinis kominis^ dont les jeunes se retrouvent facilement dans les caillots de l’iirine.

Les Bactériacées sont certainement les parasites les plus intéressants du sang; leur présence cause toujours des désordres fort graves chez les individus et leur pullulation entraîne presque sûrement la mort. Je citerai entre

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autres : 1° ]e Bacillus anthracis, cause de la pustule maligne ; 2° le vibrion septique de Pasteur ou bacille de Tœdème malin formé par des bâtonnets anaérobies de 3 à 5 a de long, sur 1 de large, accolés généralement deux par deux, mais pouvant former des filaments de 20 à 40 a; ce vibrion n’apparaît dans le sang qu’après la mort de l’individu; 3° le Streptococcus pyogeiiiiSj agent de la pyémie et de la fièvre puerpérale, constitué par des cellules dont le volume varie, même dans une même chaînette, de 0 a,I àO ;j.,5 et même 0 t;.,7 ; 4° le Streptococcus erijsipelatis formé par des chaînettes analogues aux précédentes, mais dont les cellules sont égales; il peut passer dans le sang et s’arrêter en masse dans les vaisseaux des reins, du foie, etc.; Xf\{iSpirochæte Ohermeieri[^\^. 244, p. 369), qu’on trouve en grande quantité, pendant les accès, dans le sang des individus atteints de la fièvre récurrente; il a IG à 40 [j. de longueur et est animé de mouvements très rapides; 6“ on a trouvé dans le sang du porc atteint du rouget des diplocoques et des bacilles, etc.

Nous nous arrêterons sur le Bacillus anthracis^ le plus anciennement et le mieux connu des microbes pathogènes. Sa découverte par Davaine et Rayer en 1830 est une des plus belles conquêtes de l’humanité; elle est l’origine de la Bactériologie qui lui permettra de lutter victorieusement contre la plupart de ses causes de destruction. Je fais cependant cette réserve que, pour des raisons multiples, le maniement des Bactériacées pathogènes ne doit pas être abandonné à toutes les mains; il me semble surtout impossible, comme certains le réclament trop haut, d’introduire leur manipulation dans les laboratoires ordinaires de nos grandes facultés, peuplés, la chose est indéniable, de jeunes gens pleins de bonne volonté, mais trop inexpérimentés ou étourdis pour ne pas causer immanquablement des catastrophes. Il faut réserver leur étude à des hommes murs, ayant fait un stage sérieux pendant lequel ils se seront familiarisés avec les espèces zymogènes ou chromogènes qui fournissent, sans aucun risque, tout aussi bien et même parfois mieux, des sujets permettant d’acquérir une connaissance aussi complète qu’exacte des microbes.

On peut se procurer du sang contenant des Bacilles du charbon dans les abattoirs en s’adressant, avec une recommandation, au service des vétérinaires sanitaires. Pour l’observation et les cultures on peut rechercher ces bactéries dans les grosses veines des morceaux saisis par ce service; une goutte suffit. Le bacille s’y présente enbâtonnets del u. à 1 g, 3 d’épaisseur et de 3 à 10 a de longueur, qui sont souvent articulés par une extrémité élargie et plate, présentant une certaine analogie avec les surfaces articulaires des phalanges; il est rigide, immobile et se colore d’une façon très intense par toutes les matières colorantes tirées de l’aniline (fig. 23, XXXIHL Les globules rouges sont le plus souvent déformés et agglutinés en plaques.

La température de est la plus propice au développement de cette bactérie. Les milieux liquides qui lui conviennent le mieux sont Furine humaine neutre ou légèrement alcaline et le sang. On la cultive aussi dans l’humeur aqueuse. Les bacilles, n’étant plus gênés dans leur développement par le courant sanguin qui les dissocie, se groupent en filaments que l’on croit le plus souvent se contourner fortement et s’enchevêtrer en massifs cotonneux. « Les cultures les plus caractéristiques sont obtenues par une piqûre dans la gélatine à 8 p. 100. On y constate au bout de 24 à 48 heures un prolongement blanchâtre semi-transparent, rectiligne, dirigé de la surface de la gélatine à sa partie profonde, et d’où partent de chaque côté des branches transversales très fines. La gélatine se liquéfie lentement. Au fond de la partie liquéfiée, on voit un précipité blanc qui ressemble à une couche de ouate. La culture sur plaque de gélatine ressemble à des touffes de cheveux frisés. » (CoRNiL etSABÈs.) Les bacilles pris sur Tanimal vivant ou mort depuis peu ne montrent jamais de spores; dans les cultures faites dans l’urine, les spores durables apparaissent bientôt, surtout dans les parties exposées à l’air. Les filaments donnent naissance à un nombre variable de spores qu’ils mettent en liberté en se détruisant. On colorera ces filaments par le procédé d’Erhlich en faisant d’abord usage de fuchsine qui teindra en rouge les spores, puis de bleu de méthylène qui fera apparaître en bleu le corps du bacille.

Application a l’expertise légale. — Une tache donnée étant soupçonnée d’être formée par du sang desséché, on recherchera, pour s’en assurer, si elle possède bien les caractères chimiques et physiques de cette matière. En cette occasion le microscope est indispensable. Quel que soit le support de tache : linge, laine, papier, bois, fer, on s’arrangera pour l’isoler et, la divisant en deux, on en traitera une partie par des liquides spéciaux qui regénéreront, pour ainsi dire, les globules sanguins et en permettront l’inspection , l’autre sera soumise à l’action de l’eau pour se prêter à la recherche de la fibrine et des globules blancs, aux essais microspectroscopiques et enfin à la formation des cristaux d’hémine.

U Recherche des globides rouges. — Nous supposerons que la tache n'ait pas été lavée, ni qu’elle n’ait pas subi la putréfaction, car dans ces deux cas l’opération serait inutile, les globules se trouvant détruits ou altérés. Il faut agir autant que possible sur des caillots que l’on isolera par le grattage ou en rasantles étoiles duveteuses commelalaineetle velours. Prenant une quantité minime de matière, on la déposera dans un verre de montre et, après l’avoir brisée en petits fragments avec l’aiguille, on l’arrosera avec 3 ou 4 gouttes du licjidde 4^, préparé pour cet objet par Bourgogne, le préparateur bien connu de la rue du Cardinal-Lemoine, ou bien avec le liquide Roussin (glycérine 3, acide sulfurique 1, eau dislillée quantité suffisante pour obtenir un

TEGHNIOUE SPÉCIALE

liquide marquant 1028 à 15”). Selon l’ancienneté de la tache le contact sera prolongé pendant 24 ou 48 heures, et même trois et quatre jours. Pour mettre le hain à l’ahri de l’évaporation et des poussières, on recouvrira le verre de montre d’une petite cloche; on agitera aussi de temps en temps pour faciliter l’action du liquide et la dissociation des giohules. Les caillots, s’ils existent encore, seront portés sur une lame et montés dans une goutte du liquide dans lequel ils ont séjourné. Celui-ci sera agité avant de faire la prise, la chose est importante, car les globules qui se trouvent isolés dans son intérieur (fig. 13, pl. XXXIII) sont plus propices pour l’étude que les hématies encore renfermées dans les caillots, toujours polyédriques au centre de la masse et imparfaitement gonflées à la périphérie. On constatera la forme elliptique ou discoïde dos globules, et dans le second cas on procédera à leur mensuration en ayant soin de ne s'adresser qu’à ceux qui ont repris un contour circulaire et même, en agissant ainsi, il faudra être fort circonspect dans ses conclusions, car les giohules peuvent n’avoir pas repris leur volume normal ou l’avoir dépassé ; enfin, il ne faut pas oublier que certains mammifères ont des hématies presque semblables en tout à celles de l’homme. Les mensurations devront être répétées nombre de fois.

Il est rare que des caillots se forment à la surface des linges de coton, de chanvre ou de lin, toujours très perméables, à moins qu’ils ne soient apprêtés. On découpera alors dans le linge et à travers la tache une languette de 5 à G millimètres de large. Ayant déposé le li({uide dans le fond d’un tube à insecte (fig. 15, pl. XXXIII), on y fera plonger une des extrémités de la languette de façon que la tache émergée reçoive la liqueur par capillarité du tissu. L’imhibition est toujours plus lente que dans le premier cas; lorsque la tache' semble bien ramollie, on la racle une seule fois avec le scalpel, maintenu obliquement, pour enlever la matière rougeâtre qui la forme et l’on délaye celle-ci sur une lame dans une goutte de la macération. On peut ensuite découper la tache, porter le linge sur une seconde lame et reftilocher dans une autre partie de la liqueur. Dans l’une et l’autre préparation, surtout dans la seconde, les globules seront mêlés à des filaments du tissu, on négligera ceux-ci.

On se donnera de garde de confondre les spores de certaines moisissures avec les hématies; on pourra toujours reconnaître les premières à un des caractères suivants : la forme, le volume, la paroi bien accusée, la coloration, enfin, et surtout la résistance à l’eau et à la potasse.

2° Traitement de la tache par l eau. — On agira d’abord en tous points comme précédemment, ce qui fournira un liquide rouge et des caillots décolorés.

Le caillot privé d’hémoglobine, recueilli dans le verre de montre ou détaché du linge au moyen du scalpel, sera porté sous le microscope monté

dans Tcau (fig’. 14, XXXIII). S’il ne présente pas nettement les stries de la fibrine, on ferait apparaître celles-ci par Temploi de Tiode. On le traitera finalement par l’acide acétique qui, en rendant la fibrine hyaline, mettra en évidence les leucocytes, peu dislincts jusque-là; ces derniers se reconnaîtront facilement à leurs amas nucléiformes caractéristiques (fig. 16, XXXIII).

Une portion de l’eau rougie servira aux recherches spectroscopiques; si l’hémoglobine altérée ne donnait pas ses bandes caractéristiques, on traiterait la préparation par une goutte de potasse pour faire naître l’iiématine. L’autre partie, concentrée s’il en est besoin pour ne pas s’exposer à obtenir des cristaux pulvérulents qui pourraient échapper à l’observation, sera soumise, comme il a été dit, à l’action du sel marin, puis à celle de l’acide acétique glacial, pour donner de l’hémine (fig. 17, XXXIII).

Si la tache a été lavée à heaii^ il est inutile, avons-nous dit, d’y rechercher les hématies, mais il est toujours possible de fui appliquer le traitement par l’eau qui peut fournir des résultats, en ayant soin de faire concentrer la macération. Il ne faut pas désespérer même lorsque la tache a été imparfaitement lavée avec du savon. On peut même prouver alors fa tentative opérée dans le but de faire disparaître les traces du crime : on découpe la tache et on la fait macérer dans l’eau distillée pendant quelques heures. On fait ensuite évaporer doucement la macération sur un porte-objet après l’avoir additionnée d’une parcelle de chlorure de sodium; on traite le résidu par l’acide acétique glacial que l’on porte à l’ébullition : l’hémine cristallise ainsi que les acides gras du savon si l’on a soin de laisser refroidir lentement la préparation (fig. 20, XXXV). M. Husson achève de laver la tache avec de l’acide acétique qui sert ensuite à l’obtention de l’bémine.

Nous terminons ici, mais nous engageons nos lecteurs qui pourraient être appelés à faire profit de ces connaissances, à compléter leur éducation par la lecture du chapitre VI (Emploi du microscope) de la chimie légale de J. Bouis qui fait partie du Manuel complet de médecine légale de Briand et Chaudé.

TISSUS ÉPITHÉLIAUX.

Les cellules épithéliales sont de petits corps protoplasmiques nucléés caractérisés plutôt par leur position à la surface des organes que par leur forme variable et leur rôle, car elles s’adaptent tantôt à la protection (épiderme), tantôt à la sécrétion (glandes), tantôt enfin on les voit servir à la progression de gaz ou de liquides (épithéliums à cils vibratils).

Quelques auteurs divisent ces tissus en deux classes : 1° les épithéliums qui tapissent la surface externe de l’individu ou celle de conduits et de chambres communiquant plus ou moins directement avec le dehors (intestin.

TECHNIQUE SPÉCIALE

organes génito-urinaires); 2° les endothéliums qui limitent des chambres closes ou des organes n’ayant pas de relation avec l’extérieur (séreuses, synoviales, appareils sanguin et lymphatique). La pratique admet difficilement cette manière de voir, car on rencontre dans les deux classes des tissus qui ne peuvent se distinguer entre eux.

Au point de vue morphologique, il existe deux catégories de cellules épithéliales : les cellules polyédriques ou pavimenteiises, caractérisées par leurs trois dimensions sensiblement égales, et les cellules cylindriques. Les premières peuvent devenir lamelleuses en s’aplatissant. Les cellules de l’une et l’autre variété se groupent de deux façons différentes : soit sur un rang, l’épithélium est alors simple et permanent; soit sur plusieurs rangs, l’épithélium est stratifié^ et, dans ce cas, les éléments situés à des hauteurs différentes dans la masse sont dissemblables : les internes produisent continuellement par leur segmentation des cellules nouvelles qui repoussent les plus âgées vers l’extérieur ; celles-ci tombent par ordre d’ancienneté au fur et à mesure de leur arrivée à la surface.

On peut obtenir les éléments superficiels des épithéliums stratifiés en raclant avec un scalpel les organes qu’ils recouvrent, mais il est avantageux de faire macérer ceux-ci pendant 24 ou 48 heures dans l’alcool au tiers ou dans le sérum iodé avant de pratiquer cette opération : les cellules se présenteront alors nettement dissociées; on les traitera par le picrocarminate qui mettra le noyau en évidence. Si l’on veut observer ces cellules en place afin de juger de leurs relations, on séparera un lambeau de l’organe qu’elles tapissent et, l’ayant tendu sur une lame de liège au moyen d’épingles, on plongera le tout dans l’alcool absolu pour durcir la masse et pouvoir la débiter en coupes minces perpendiculaires à la face libre (lig. 2o4). On colorera ces préparations soit par le carmin, soit par l’hématoxyline.

Les épithéliums simples, très transparents, ne peuvent être étudiés qu’après avoir subi \ imprégnation au nitrate d'argent. Par cette opération, on met en évidence les limites des cellules épithéliales en utilisant la propriété que possède le cément (?) qui les unit de réduire ce sel en fixant l’argent dans son intérieur. La matière à observer étant aussi fraîche que possible est d’abord lavée à l’eau distillée pour la débarrasser du sang et des corps étrangers qui la souillent, puis elle est tendue au moyen d’épingles sur une lame de liège bien propre. La face intéressante étant tournée du côté de l’opérateur, on la lave de nouveau à l’eau distillée, puis on la couvre d’une solution de nitrate d’argent étendue, au 300" ou au 500", et on l’expose au soleil jusqu’à ce qu’elle prenne une apparence laiteuse. On procède alors à un nouveau lavage à l’eau distillée et l’on élimine finalement tout le nitrate non décomposé au moyen d’une solution d’hyposulfite de soude à 2 p. 100. On termine par un dernier lavage à l’eau et l’on applique le

picrocarminate sur la préparation. Les limites des cellules se colorent en noir, les noyaux en rouge, mais le carmin ne se fixe bien que si l’on a employé des solutions d’argent fort étendues. Nous engageons les étudiants à

Fig, 2o4. — Coupe verticale au travers de l’épiderme, a, stratum malpighien limité par la couche basilaire; b, stratum grauulosLim ; c, stratum lucidum ; d, stratum corneiim.

Fig. 255. — Portion de l’épiploon du chat imprégné de nitrate d’argent. Les lignes noires indiquent les limites des cellules endothéliales.

tenter d’abord les imprégnations sur des lambeaux de mésentère ou d’épiploon (fig. 255). Les gros vaisseaux seront fendus et traités comme une membrane; on fera pénétrer le nitrate dans les petits par injection.

Nous chercherons nos exemples d’épithéliums pavimenteux stratifiés dans l’épiderme de la peau et celui de la langue. On fera d’abord courir le scalpel incliné à 45° sur la peau du bras ou de la jambe, en un point qui n’est pas soumis à des lavages quotidiens, pour en détacher des lamelles blanchâtres que l’on dissociera sur une lame dans le picro carminate d’ammoniaque (fig. 1, XXXIY); puis l’on agira de même sur répithélium de la langue et l’on fera avec le produit une préparation semblable à la première (fig. 1', XXXIV); enfin, revenant à la langue, on attaquera de nouveau la partie entamée précédemment en y mettant un peu plus de force pour en détacher des éléments plus profonds (fig. 2, XXXIV). Les deux premières préparations ne contiendront que des cellules lamelleuses, mais il existe entre elles cette différence qu’il est presque impossible de mettre le noyau en évidence dans les éléments de la première, tandis que la chose est facile avec ceux de la seconde. Les premières sont mortes et en voie de chute : ce sont les cellules de la couche cornée de notre figure 25i; les secondes sont moins avancées et pourraient correspondre, par leur structure, aux éléments

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(lu stratum lucidum. La troisième préparation nous montrera quelques cellules véritablement polyédriques, mais ces éléments se feront remarquer par le grand nombre de petites saillies qui hérissent leur surface, saillies qui leur permettent de s’engrener mutuellement : ce sont les cellules crénelées des histologistes. Les éléments plus profonds de l’épiderme ne pourront être étudiés par dilacération que sur des sujets ayant macéré dans des liquides dissociants. Les coupes sont également instructives; elles permettront d’observer, entre autres choses, \di couche basilaire^ qui limite intérieurement l’épithélium; les cellules qui la constituent sont remarquables par leur forme allongée, leur disposition parallèle et aussi par leurs propriétés physiologiques : elles engendrent les cellules nouvelles, contiennent la plus grande quantité du pigment qui colore la peau en certains points; en s’encroûtant de calcaire, elles forment l’émail dos dents.

Le type des cellules cylindriques se trouve dans la muqueuse intestinale (lig. 4, 4', XXXIV). On se procurera facilement ces éléments en grattant avec le scalpel la face interne dhme portion d’intestin ayant séjourné dans un dissociant après avoir été complètement débarrassée de son contenu par des lavages. Il est indispensable de prendre les précautions indiquées, car on s’expose, sans elles : 1° à n’enlever que des lambeaux d’épithélium qui ne fourniront qu’une vue de haut des éléments ; dans ces conditions, ils se présentent pressés les uns contre les autres et comme de petits corps polyédriques (fig. 4'); 2° à ne pouvoir observer aucun des éléments, car ceux-ci étant très petits se trouvent facilement voilés par les détritus de la digestion. Ces cellules cylindriques, colorées par le picrocarminate, se présentent (fig. 4) comme de petits batofinets irréguliers, granuleux; elles contiennent un noyau facilement visible. Chez certaines espèces (lapin, etc.) ces cellules seront recouvertes sur leur face libre par une lamelle hyaline de 2 à 3 [x d’épaisseur : le plateau; nous en trouverons de plus beaux exemples dans les cellules à cils vibratiles que nous étudierons bientôt. La préparation pourra montrer aussi des cellules qui semblent provenir de l’altération des précédentes; elles se divisent en deux parties (fig. 3, XXXIV) : l’une, qui correspond à la face libre de la cellule encore engagée dans les tissus, est diaphane, excavée, remplie d’une matière à peu près hyaline qu’elle laisse échapper; l’autre est pleine, granuleuse et constituée par les restes du protoplasma et le noyau. Le picrocarminate employé seul ou après l’action de l’acide osmique montre bien la structure de ces éléments. On les appelle cellules caliciformes et on leur attribue la formation du mucus.

Nous terminerons par cellules à cils vibratiles (fig. 5, XXXIV). Ce sont des éléments cylindriques s’éloignant du type par la présence de prolongements plus ou moins déliés, rameux parfois, par lesquels elles se fixent fortement au milieu des cellules plus profondes, et aussi par leur noyau fort

volumineux qui amène ordinairement l’iiypertropliie de la rég-ion où il siège. L’épithélium à cil vibratile tapisse la trachée et les bronches, la membrane pituitaire, les canaux biliaires, ia trompe de Fallope, les tubes de l’épididyme, etc. On se le procure en bon état en introduisant dans les méats du nez un petit bâton de bois un peu rugueux, une allumette par exemple, pour en détacher quelques-unes des cellules qui les recouvrent; la matière obtenue, qui est en grande partie formée de mucus, est étalée sur la lame ou mieux dissociée dans une goutte d’une solution saline contenant soit 5 millièmes de chlorure de sodium, soit 20 millièmes de phosphate de soude. On peut aussi observer le liquide émis par le nez pendant le coryza. On y trouvera (fig. 16, pl. XXXIV) en plus du mucus, et des cellules à cils vibratiles epv^ des éléments lamelleuxe;:)/>, etpavimenteux ep^ provenant des parties inférieures des fosses nasales, ainsi que quelques leucocytes. On trouve des exemples plus beaux de ces cellules sur la langue et l’œsophage de la grenouille où on va les chercher avec le scalpel (fig. 5, XXXIV); l’observation se fait dans un des liquides précédents ou dans l’acide cbromique fort étendu qui met en évidence les cils en les rendant plus réfringents. Le corps de la cellule et son noyau pourront être colorés par le picrocarminate, mais il ne faudra pas fixer le carmin par l’acide acétique, qui ferait disparaître les cils. Les cellules de l’œsopbage de la grenouille portent toutes un plateau que surmontent les cils, généralement au nombre d’une dizaine ; on rencontre parmi elles beaucoup de cellules caliciformes plus faciles à étudier que celles de la muqueuse intestinale.

En prenant le soin de recueillir les cellules précédentes sur le vivant et de les monter immédiatement dans de l’eau albumineuse ou du sérum, on pourra observer les cils en mouvement. Il vaut mieux cependant détacher avec le scalpel quelques-unes des cellules qui revêtent la face interne du manteau de l’huître et les monter dans leur milieu naturel, l’eau de mer qu’on trouve dans la coquille. Le résultat est encore plus saisissant si l’on enlève dans les branchies de petites lamelles de 5 millimètres de côté que l’on monte immédiatement dans le même liquide en ayant soin de les y étaler avec précaution. Ces lamelles, vues au microscope, paraîtront constituées par des lanières parallèles, tapissées par un épithélium vibratile qui projette ses cils dans les canaux formés par les intervalles que laissent entre elles les lanières. Les cils y battent l’eau d’un mouvement isochrone, s’abaissant et se relevant successivement à la façon des tiges d’un champ de blé soumises à l’action de coups de vents légers et répétés.

L’étude des épithéliums stratifiés est intéressante pour les recherches cliniques, car leurs cellules, en raison de leur chute normale, se rencontrent fréquemment dans les matières à analyser. Leur chute étant encore activée

par l’inflammation, on devra tenir compte de leur quantité, car il devient possible, lorsque les cellules que l’on rencontre en nombre présentent quelques particularités caractéristiques, de renseigner exactement le médecin sur le siège de la maladie : le fait est fréquent dans les analyses d'urine.

TISSU CONJONCTIF OU CONNUCTIF.

Le tissu conjonctif se rencontre en tous points de l’économie, car il a pour rôle de réunir les organes entre eux et de maintenir leurs relations tout en permettant dans un espace limité les déplacements nécessaires à leur jeu. Il est susceptible d’un certain nombre de modifications et, pour nous en tenir aux principales, nous dirons que l’on s’accorde à regarder comme telles les tissus adipeux, tendineux, cartilagineux, osseux et la dentine.

Le tissu conjonctif proprement dit, qui est encore désigné par les noms de tissu fibreux et de tissu lumineux^ se rencontre dans le derme, le tissu sous-cutané, le péritoine, les muqueuses, les séreuses, les muscles rouges, les gros nerfs, etc. Il comprend une gangue constituée par une masse amorphe, molle, dans laquelle sont renfermées des cellules fibro-plastiques, des fibres lumineuses, des fibres élastiques, enfin des cellules migratrices qui ne semblent être le plus souvent autre chose que des leucocytes.

Parmi ces éléments les fibres lamineuses l’emportent tellement en quantité sur les autres^ qu’elles semblent à première vue constituer à elles seules le tissu. Il est cependant facile, en procédant avec méthode, de s'assurer qu’il en est autrement. Si l’on prend un petit lambeau de tissu sous-cutané et si on l’observe directement, il paraîtra formé tout simplement par des fibrilles nombreuses réunies en faisceaux onduleux séparés par une matière amorphe, la substance interstitielle. Yient-on à traiter la préparation par l’eau, cette substance disparaît aussitôt et le microscope ne montre plus que les fibres lamineuses simulant, si le tissu n’est point tendu, de longs cheveux bottants (fig. 1, a, XXXY); le picrocarminate accentue encore celte apparence, mais il faut se donner de garde de vouloir fixer le carmin par les acides étendus, car ceux-ci gonflent immédiatement les fibres lamineuses et les transforment en une masse hyaline en détruisant également les cellules fibro-plastiques. Par contre, l’action de ces réactifs, surtout celle de l’acide acétique, fera apparaître, au milieu de la masse des fibres lamineuses altérées, deux nouveaux éléments du tissu : les leucocytes sur lesquels nous ne nous étendrons pas elles fibres élastiques (fig. 5 et 6, XXXY). Celles-ci sont des éléments brillants, à bords généralement assez nets, ayant une épaisseur variable et qui sont caractérisés par leur résistance à presque tous les réactifs, par leurs ramifications et leurs anastomoses qui transforment leur

ensemble en un véritable réseau, enfin par leur élasticité. Elles sont droites quand le tissu qui les renferme est étiré, contournées, sinueuses dans tous les autres cas, à moins qu’elles ne soient brisées. Elles ne se colorent pas par le carmin, mais fixent l’acide picrique, la fuchsine et l’éosine en solutions alcooliques. On peut les isoler par l’action de la potasse au 10^ Elles résistent aux sucs digestifs et certains prétendent qu’on ne les rencontre nulle part aussi convenables pour l’étude que dans les fèces dont elles constituent avec les parties cellulosiques et lignifiées des végétaux les éléments figurés les plus constants.

Il faut des préparations spéciales pour voir les cellules fibro-plastiques. Le moyen le plus rapide consiste à injecter, au moyen d’une seringue à canule perforante, une solution de nitrate d'argent au millième dans le tissu souscutané. Il se forme ainsi une boule d’œdème dont on enlève une partie avec les ciseaux fins. On porte celle-ci dans le picrocarminate et, lorsqu’elle est colorée, on la monte dans la glycérine en ayant soin de l’y étalei*. Les cellules fibro-plastiques apparaissent alors nettement au milieu des éléments que nous connaissons et qui ont été dissociés par la pression du liquide. Ce sont des éléments nucléés (fig. 3, XXXV) présentant un corps et un nombre variable de prolongements filiformes, ramifiés quelquefois, par lesquels ces cellules se tiendraient en communication directe.

Le mésentère et l’épiploon se prêtent aussi à l’étude du tissu conjonctif, mais les cellules fibro-plastiques y sont difficiles à mettre en évidence, à moins toutefois que l’on ne s’adresse à la grenouille chez qui ces éléments présentent en tous points, sauf dans le noyau (fig. 3', XXXV), des granules pigmentaires d’un noir assez intense pour rendre les cellules fibro-plastiques plus visibles que tous les autres composants du tissu.

En raison de la présence constante des élastiques dans les fèces, matières que l’on peut avoir à analyser, il faut ajouter que ces éléments modifient quelquefois sensiblement leurs formes. Ainsi dans les ligaments que l’on considère comme une variété du tissu conjonctif dans laquelle les élastiques l’emportent de beaucoup sur les autres éléments, les fibrilles sont plus volumineuses que dans le tissu précédemment étudié (fig. 4, XXXV). Les élastiques forment de véritables membranes fenêtrées dans la paroi des artères. Les ligaments, que le vulgaire désigne à tort par le nom de nerf, se laisseront facilement dissocier après avoir été soumis pendant plusieurs heures à l’action de l’eau bouillante ; les élastiques des vaisseaux seront isolés en traitant des lambeaux de ceux-ci par la potasse concentrée.

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