SÉPARATION DE LA LEUCINE
Si l'on verse dans une solution bouillante de tyrosine une solution neutre d’azotate de bioxyde de mercure, il se produit un précipité blanc jaunâtre. L’addition, goutte à goutte, d’acide azotique fumant étendu d’eau dans la liqueur bouillante produit alors une coloration d’un rouge foncé. Un excès d’acide décolorerait le précipité ; aussi doit-on agir avec prudence.
Préparation. — Les procédés à l’aide desquels on prépare la tyrosine et la leûcine sont nombreux; voici l’un d’eux. Faites bouillir pendant un jour entier 500 grammes de râpure de corne avec un mélange de 1,300 grammes d’acidê sulfurique et de 3 kilogrammes d’eau, en remplaçant l’eau évaporée au fur et à mesure. L’ébullition terminée, étendez la liqueur d'une grande quantité d’eau, saturez-la avec un lait de chaux, passez à travers une toile pour séparer le sulfate de chaux. Faites bouillir encore avec une petite quantité de lait de chaux pour décolorer la liqueur, filtrez, et faites passer dans le liquide bouillant un courant d'acide carbonique pour enlever l’excès de chaux en dissolution. (L’acide oxalique a été employé à la place de l’acide carbonique.) Concentrez la liqueur filtrée, peu à peu elle déposera des cristaux de leucine mêlés à une petite proportion de tyrosine. On les sépare en utilisant leur différence de solubilité dans l’eau bouillante ; pendant le refroidissement la tyrosine se dépose. La leucine restée en dissolution est décolorée par le noir animal et cristallise par la concentration de la liqueur.
On peut obtenir par ce procédé o grammes de tyrosine.
Dans les cas de ramollissement du foie, l’urée diminue considérablement dans l’urine; la leucine et la tyrosine semblent en prendre la place. On peut trouver dans les dépôts urinaires de petites boules sphériques résultant de l’assemblage d’un grand nombre d’aiguilles de tyrosine, reconnaissables au microscope.
220. Séparation de la leucine et €le la tyrosine des liquides de l’organisme. — Pour isoler la tyrosine et la leucine, de l’urine par exemple, versez dans ce liquide du
LEUCINE ET TYROSINE.
sous-acétate de plomb, séparez le précipité, lavez-le légèrement, et laites passer dans la liqueur un courant d’hydrogène sulfuré pour enlever l’excès de plomb. La liqueur concentrée déposera peu à peu delà tyrosine. Faites-la redissoudre dans l’eau bouillante, filtrez, et laissez-la cristalliser pendant le refroidissement.
Pour avoir la leucine, concentrez la liqueur qui a déjà déposé la tyrosine, traitez-la par l’alcool absolu, d’abord froid, puis bouillant, tant qu’il se dissout quelque chose : le résidu est une matière brune qui contient encore de la tyrosine. Évaporez les liqueurs alcooliques en consistance fortement sirupeuse, puis abandonnez le résidu au repos ; au bout de quelques jours, il se dépose des petites sphères granuleuses, ordinairement colorées en jaune, où le microscope fait découvrir des cristaux mêlés à des globules graisseux. Exprimez-les entre des feuilles de papier à filtre, et, pour les purifier, redissolvez-les dans l’eau rendue alcaline par l’addition d’une quantité suffisante d’ammoniaque, versez du sous-acétate de plomb tant qu’il se produit un précipité. Ce précipité est une combinaison de leucine et d’oxyde de plomb. Recueilli sur un filtre, légèrement lavé, il est ensuite divisé dans l’eau distillée, et un courant d'hydrogène sulfuré enlève le plomb à l’état de sulfure. La leucine devenue libre se dissout dans la liqueur; concentrez celle-ci, et la leucine se déposera lentement en cristaux mieux définis.
Il faut employer de l’urine fraîche, sans quoi la leucine serait déjà transformée en valérate d’ammoniaque.
Si l’urine était albumineuse, il faudrait préalablement coaguler l’albumine par la chaleur.
S’il s’agissait d’opérer sur des matières solides, des tumeurs, il faudrait les réduire mécaniquement dans le plus grand état de division possible, les épuiser par l’eau froide, en se servant d’une bonne presse pour ménager la quantité de liquide. Cela fait, on acidifierait légèrement ce liquide avec quelques gouttes d’acide acétique, puis on le chaufferait à l’ébullition pour coaguler l’albumine, et l’on continuerait comme précédemment.
CREATINE.
221. Créatine, C8H9Az3Oi-f- 2H0. — La créaline est un produit cristallisé qui existe en très-petite proportion dans le suc des muscles striés et lisses des animaux. La chair de poulet, qui est la plus avantageuse pour sa préparation, en donne jusqu’à 3/1000 de son poids. Celle de la plupart des autres animaux ,en d.onne 1 à 2/1000. On a signalé des traces de créatine dans le sang (Marcet, Verdeil), dans le cerveau (W. Millier et L erch).
L'urine normale ne contient pas de créatine, mais diverses causes transforment la créatinine en créatine, aussi trouve-t-on quelquefois une plus grande quantité de créatine que de créatinine dans ce liquide.
La créatine est un produit très-azoté qui figure dans les extraits de viande en notable proportion ; ce n’est pas pourtant un aliment, car elle se transforme aisément en urée et sarcosine, et môme en créatinine que l'on retrouve dans l'urine. Il est bien rare d’ailleurs que les substances
Fig. 31. — Créatine.
azotées cristallisées jouent le rôle d’aliment. La créatine peut être considérée comme un produit d’excrétion intermédiaire entre l'albumine et l’urée (Voir sur ce sujet, Annuaire de Chimie de Millon et Reiset, 1848).
Caractères chimiques. — La créatine est incolore, cris-
PRODUITS DIVERS
tallisée en prismes brillants qui appartiennent au système klinorhombique ; scs cristaux ( fig . 31) peuvent être obtenus très-volumineux et d’une remarquable transparence.
Sa solution aqueuse a une saveur désagréable. Il faut 7.ï parties d’eau froide pour la dissoudre, et beaucoup moins d’eau bouillante. Elle se dissout dans 94 parties d’alcool absolu, et dans un peu moins d’alcool étendu. Elle est insoluble dans l’éther.
La créatine est sans action sur le tournesol, on a réussi à la combiner avec les acides azotique, chlorhydrique et sulfurique (Dessaignes).
Les acides concentrés la transforment à la température de l’ébullition en créatinine, en lui enlevant les éléments de l’eau :
C8H9Az30 v = CstTAz"^ + 2HO.
Créatine. Créatinine.
Les solutions alcalines bouillantes et concentrées, celle de baryte caustique, par exemple, la changent en urée et en sarcosine :
C8H9Az304 + 2HO = C2H4Az20* + C8H7Az04.
Créaline. Crée. Sarcosine.
Mais l’alcali caustique concentré tend à décomposer l'urée en carbonate d’ammoniaque, à s’emparer de l’acide carbonique et à laisser dégager l’ammoniaque ; aussi ne retrouve-t-on jamais toute la quantité d’urée indiquée par la théorie.
L’oxyde de mercure est réduit par une solution bouillante de créatine, il y a dégagement d’acide carbonique, dépôt de mercure métallique et formation d’oxalate de méthyluramine (G4II7Az’).
Préparation. — Pour obtenir de la créatine, hachez de la viande, pilez-la dans un mortier, meltez-la dans un maires de verre avec une fois et demie son volume d’alcool,
CREATININE.
chauffez au bain-marie jusqu'à l'ébullition, enfin soumettez le tout à la presse. Vous pourrez soumettre le résidu à un nouveau traitement avec une moindre quantité d’alcool. Distillez pour recueillir l’alcool, et, dans l’extrait alcoolique qui reste au fond du bain-marie, versez, après addition d’eau, du sous-acétate de plomb tant qu’il se produira un précipité. Recevez ce précipité sur un filtre, lavez-le, puis rejetcz-le. Dans le liquide, faites passer un courant d'hydrogène sulfuré pour enlever l’excès de plomb, filtrez pour enlever le sulfure de plomb, et concentrez la liqueur au bain-marie jusqu’en consistance de sirop épais : au bout de quelques jours vous verrez se déposer des cristaux de créatine impure. Quand ce dépôt n’augmentera plus, recueillez-le, et, après l’avoir desséché entre des feuilles de papier à filtre, soumettez-le à une nouvelle cristallisation dans l’eau bouillante, avec addition de charbon de sang ou de noir animal lavé.
La viande de bœuf ne donne guère que 0er,7 de créatine, celle demorue l6r,3,etcelle d’oiseau jusqu’à 3 grammes par kilogramme.
Autre procédé. — Si vous opérez sur le suc des muscles, étendez-le d’eau, coagulez l’albumine qu’il renferme en le chauffant au bain-marie d’eau bouillante, filtrez et ramenez la liqueur en consistance d’extrait dans une capsule de porcelaine. Cet extrait est acide, rendez-le alcalin, en y versant de l’eau de baryte qui précipitera en meme temps les phosphates ; filtrez, concentrez le liquide à basse température, et laissez cristalliser la créatine en abandonnant l’extrait sirupeux dans un milieu d’une basse température (Liebig).
222. Créatinine, C8H7Az302. — Ainsi que l’indique sa formule, la créatinine ne diffère que par deux équivalents d’eau en moins de la créatine, dont elle dérive d’ailleurs très-facilement.
La créatinine forme des prismes incolores d’une saveur très-alcaline solubles dans 11 parties 1/2 d’eau à la température de 16°, et encore plus solubles dans l’eau bouillante. L’alcool en dissout le centième de son poids ( fig . 32).
PRODUITS DIVERS
C’est une hase très-énergique qui ramène vivement au bleu le papier de tournesol rougi. Elle déplace môme l’ammoniaque de ses combinaisons salines.
Fig. 3?. — Créatinine.
La créatinine forme avec les acides minéraux des sels bien définis, généralement très-solubles dans l’eau et dans l’alcool (sulfate, chlorhydrate).
Une solution un peu concentrée de créatinine additionnée d’une solution pas trop étendue d’azotate d’argent se prend en une masse cristalline, facilement soluble à chaud, qui se dépose par le refroidissement.
Le bichlorure de mercure précipite aussi la créatinine en blanc, et le précipité devient cristallin en très-peu de temps.
Les oxydants, l’oxvde de mercure, le bioxyde de plomb et le permanganate de potasse la transforment en acide oxalique et oxalale de méthyluramine :
C8H7Az302 + 40 = C4H7Az3 + (C203)2.
La créatine subit celte dernière transformation dans les mômes conditions.
L'azotate de mercure ne précipite pas la solution de
CREATININE.
créatinine, mais si l’on ajoute goutte à goutte au mélange une solution de carbonate de soude jusqu’à ce qu’il se produise un trouble persistant, il se fait un dépôt d’aiguilles microscopiques (C8H7Az302,Az0s-f-2Hg0). L’emploi du carbonate de soude a pour effet de neutraliser l’acide azotique libre, dans lequel le précipité est soluble.
A ces caractères, il faut en ajouter un d’une extrême importance. Si l’on verse une solution concentrée de chlorure de zinc dans une solution concentrée de créatinine, il se produit un précipité cristallin, résultant de la combinaison à équivalents égaux de la créatinine et du chlorure de zinc (C8H7Az;,02,ZnCd). Si cette combinaison se dépose assez lentement, elle prend une forme cristalline où le microscope fait distinguer des groupes d’aiguilles rayonnant d’un centre, ou disposées en aigrettes. Ce chlorure double de créatinine et de zinc est très-peu soluble dans l’eau froide, il est encore moins soluble dans l’alcool; l’eau bouillante le dissout un peu. Il faut noter encore que le chlorure de zinc ne précipite pas les sels (chlorhydrate, sulfate, azotate) de créatinine, à moins qu’on ne les additionne préalablement d’une quantité suffisante d’acétate de soude .
Le chlorure de zinc ne précipite pas la créatine, mais en faisant bouillir le liquide, il se produit de la créatinine, et la combinaison s’effectue. Une petite quantité d’acide chlorhydrique ou sulfurique aide à la réaction.
La créatinine est caractérisée par sa combinaison avec le chlorure de zinc, par son action réductrice sur l’oxyde de mercure, par les réactions qu’elle produit au contact de l’azotate d’argent et du bichlorure de mercure. De plus, la créatinine réduit assez aisément à la température de l’ébullition l’hydrate d’oxvde de cuivre.
Préparation. — Pour obtenir de la créatinine, on fait bouillir pendant une demi-heure au moins de la créatine avec un acide minéral concentré, de préférence avec de l’acide chlorhydrique. Peu à peu la créatine passe à l’état de chlorhydrate de créatinine, que l’on fait cristalliser.
Ces cristaux sont redissous dans 25 à 30 fois leur poids
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d’eau, la liqueur est portée à l’ébullition et additionnée d’hydrate d’oxyde de plomb récemment précipité. Peu à peu l’oxyde de plomb se combine à l’acide chlorhydrique, forme du chlorure de plomb et élimine de la créatine. Un excès d’hydrate d’oxyde de plomb est nécessaire pour transformer le chlorure de plomb en oxychlorure tout à fait insoluble. On reçoit ce précipité sur un filtre, et par l’évaporation du liquide filtré on obtient la créatinine.
La créatinine donne, au contraire, de la créatine quand on la laisse longtemps au contact d’un alcali. L’action d’une température un peu élevée favorise la réaction.
Cette assimilation des éléments de l’eau est assez fréquente pour que l’on puisse trouver de la créatine dans l’urine qui n’en renferme probablement jamais quand on opère rapidement, tandis qu’en agissant sur de grandes masses à la fois, et en les maintenant à une température élevée pendant un temps prolongé, on obtient assez ordinairement un mélange de créatine et de créatinine. L’oxyde de plomb dont on fait usage pour isoler la créatinine de sa combinaison avec l’acide chlorhydrique ou le chlorure de zinc paraît concourir à cette transformation.
Le sulfhydrate d’ammoniaque, mis au contact du chlorure double de zinc et de créatinine impure, donne de la créatinine mélangée à de la créatine.
La putréfaction de l’urine et l’alcalinité qui en est la conséquence, paraissent aussi produire la transformation de la créatinine en créatine.
